RECOPILADO POR: EL PROGRAMA UNIVERSITARIO DE ALIMENTOS

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1 NMX-F MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE DEXTRANA EN AZÚCAR CRUDO (MASCABADO). METHOD FOR THE DETERMINATION OF DEXTRAN IN RAW SUGAR (UNREFINED). NORMAS MEXICANAS. DIRECCIÓN GENERAL DE NORMAS PREFACIO. En la elaboración de esta Norma participaron los siguientes Organismos: Dirección General de Normas. Laboratorio de Azúcar. Azúcar, S.A. de C.V. Subdirección de Producción. Laboratorio. Cámara Nacional de las Industrias Azucarera y Alcoholera. Secretaria de Hacienda y Crédito Publico. Dirección de Servicios al Contribuyente Asociación de Técnicos Azucareros de México, A.C. 1. OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIÓN Esta Norma establece el método de prueba para determinar dextrana en muestras de azúcar crudo (Mascabado). 2. REFERENCIAS Para la correcta aplicación de esta Norma se debe consultar la siguiente Norma Mexicana vigente: NMX-K-368. Muestreo para materiales pulverulentos o granulados. 3. DEFINICIONES 3.1 Azúcar crudo: Es el producto cristalizado que se obtiene de la centrifugación de las masas cocidas, y que no ha sido sometido al proceso de refinación. 3.2 Dextrana: Es un polisacárido polímero de la D-glucosa (C 6 H 10 O 5 )n, (ver A.1) formado por reacciones bioquímicas a partir de la sacarosa, con la intervención, principalmente, del Leuconostoc mesenteroides. 4. FUNDAMENTO RECOPILADO POR: EL PROGRAMA UNIVERSITARIO DE ALIMENTOS Este método se basa en la medición de la absorbancia, dada por la concentración de dextrana en la muestra, empleando para el efecto un espectrofotómetro. 5. REACTIVOS Y SU PREPARACIÓN

2 Los reactivos que se mencionan a continuación deben ser grado analítico y cuando se mencione agua debe entenderse agua destilada. 5.1 Reactivos Resinas intercambiadoras de iones Filtroayuda Acido tricloracético Enzima α-amilasa tipo X-A Alcohol etílico absoluto 5.2 Preparación de reactivos Resinas intercambiadoras de iones La amberlita IR (H + ) y la IRA - 45 (OH - ) (VER a.2), son normalmente aplicadas húmedas, por lo cual deben lavarse con al menos su doble en peso de agua destilada y drenarse. Luego deben lavarse con acetona por un tiempo no mayor de 2 minutos. El solvente debe removerse inmediatamente. Las resinas se secan con aire o en estufa a baja temperatura, aproximadamente 303K (30 C) y se almacenan en recipiente cerrado Filtroayuda: 50 ± 5 g de filtroayuda se agregan a 1000cm 3 de agua destilada, se agregan 50 ± 5 cm 3 de ácido clorhídrico concentrado y la mezcla se agita por 5 minutos. Luego se filtra y la torta de filtroayuda se lava con agua destilada hasta que el ph del lavado sea igual al del agua destilada. El filtroayuda se seca a 373K (100 C) durante 6 horas y se almacena en un recipiente hermético Acido tricloracético: 10 ± 0.1 g de ácido tricloracético se disuelven en agua destilada en un matraz aforado y se llevan a 100cm 3. Este reactivo se conserva por dos semanas. NOTA: Este reactivo ataca las proteínas y debe evitarse su contacto con la piel. No debe pipetearse con la boca y no debe almacenarse en recipientes de plástico Enzima - Amilasa tipo X-A Enzima removedora de almidón. Se consigue preparada Alcohol Alcohol etílico absoluto. Se consigue preparado o se puede preparar por cualquiera de los métodos conocidos. 6. MATERIALES Y APARATOS 6.1 Materiales Bureta de vidrio de 50cm Cápsula de níquel con capacidad para pesar 23.5g de azúcar crudo.

3 6.1.3 Embudo para el dispositivo de filtración al vacío (ver fig. 2) Matraz de filtración al vacío de 1000cm Matraces aforados de 25cm Membrana Millipore de 0.45 µm Membrana absorbente (prefiltro) para dispositivo de filtración (ver fig. 2) Pipeta de seguridad para dosificar el ácido tricloracético Pipeta graduada de 20cm Tubo de Nessler con aforo a 100cm Vaso de precipitados de 250cm Vidrio de reloj de 12cm de diámetro 6.2 Aparatos Bomba de vacío Espectrofotómetro UV - visible, con dos celdas de 5cm y dos celdas de 1cm Parrilla térmica con agitador magnético 7. PROCEDIMIENTO 7.1 Pesar 23.5g de la muestra de azúcar crudo y colocarlos en el vaso de precipitados. Agregar 35cm 3 de agua destilada, insertar la barra magnética, cubrir el vaso de precipitados con el vidrio de reloj y conectar la placa de calentamiento para disolver. (ver fig. 1) 7.2 Agregar 0.05g de enzima - Amilasa tipo X-A e incubar a 328K (55 C) por una hora en una estufa o en un baño de agua, agitando cada 15 minutos. 7.3 Después de la incubación se agregan a la muestra 5g de Amberlita IR y 5g de Amberlita IRA - 45 y se agita por 30 minutos. 7.4 Se agrega 1g de filtroayuda lavada con ácido, se mezcla y se filtra solamente a través de la membrana absorbente. El filtrado se recibe en un tubo de Nessler de 100cm 3 colocado dentro del matraz de filtración al vacío. Las paredes del vaso de precipitados se lavan con una pipeta, empleando aproximadamente 10cm 3 de agua destilada. Este líquido se pasa a través del embudo y se recoge en el tubo de Nessler. Se continúa con dos pequeños lavados del embudo, teniendo cuidado de no exceder los 100cm 3 del aforo del tubo de Nessler (ver. fig. 2). 7.5 La muestra y lavado contenidos en el tubo de Nessler se aforan a 100cm 3 con agua destilada y se agregan 10cm 3 de ácido tricloracético. Se tapa el tubo y se agita. 7.6 Filtre el contenido del tubo a través de la membrana Millipore de 0.45 µm cubierta con a membrana absorbente y reciba el filtrado en un tubo de Nessler limpio, colocado dentro de un matraz de filtración de 1000cm 3. Colecte por lo menos 30cm 3 de filtrado (Ver fig. 2). 7.7 Con una pipeta ponga 12.5cm 3 del filtrado en cada uno de dos matraces aforados de 25cm 3, designando a primero como El Control y al segundo como La Muestra.

4 NOTA: Use pipeta de seguridad. 7.8 Al primer matraz (El control) agregar, moviéndolo, agua destilada hasta la marca de 25cm 3, tapar y agitar. Al segundo matraz (La muestra) agregar, moviéndolo, alcohol absoluto con una bureta de 50cm 3 hasta la marca de 25cm 3. Tapar y mezclar invirtiendo el matraz suavemente de tres a cinco veces (Ver fig. 3). 7.9 Dejar en reposo la muestra por 60 ± 2 minutos contando este tiempo desde el momento en que se termina de mezclar Durante el período de reposo, llenar dos celdas de 5cm, una con agua destilada y la otra con El Control. Después de poner en cero el espectrofotómetro a 720 nanómetros con la celda que contiene agua destilada; leer la absorbancia de El Control la cual se designa como B Después de realizada la lectura, El Control se guarda en un matraz de 25cm 3 para un posible uso futuro. La celda vacía se lava varias veces con agua destilada y se seca rociándola con acetona Al terminar los 60 minutos de reposo, llenar la celda limpia de 5cm con La Muestra. Después de poner en cero el espectrofotómetro a 720 nanómetros con la celda que contiene agua destilada, leer la absorbancia de La Muestra la cual se designa como A. 8. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS 8.1 El contenido de dextrana se expresa en Unidades de Mili absorbancia: U.M.A. = (A - B) REPETIBILIDAD 9.1 Cuando la absorbancia de La Muestra excede de 0.7 ( ver A.1) el valor de ambos; El Control y La Muestra, debe releerse inmediatamente en celdas de 1cm, después de poner el espectrofotómetro en cero a 720 nanómetros con agua destilada. Los resultados entonces se expresan así: U.M.A. = (A - B) REPRODUCIBILIDAD 10.1 Para lograr resultados reproducibles, debe seguirse estrictamente el método. (Ver A.2) APÉNDICE A

5 A.1. La dextrana es un producto que ocasiona problemas en los filtros y en la cristalización, por incrementar la viscosidad de las soluciones de azúcar. Estos problemas se presentan con valores superiores a 0.05% (500p.p.m.) en el azúcar crudo. A.2. Equipos y reactivos pueden substituirse por equivalentes, únicamente después de demostrar que dan resultados comparables a los de este método. Esto es aplicable particularmente al reactivo alcohol.

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8 Esto es aplicable particularmente al reactivo alcohol

9 11. BIBLIOGRAFÍA Amstar Corporation - American Sugar Division Avenueof the Americas, New York. NY (212) Form July 1, Principles of Sugar Technology; Pieter Honig, Elsevier Publishing Company Cane Sugar Handbook, Meade - Chen - John Willey & Sons, Inc. 10th Ed., CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES Esta Norma no concuerda con ninguna Norma Internacional por no haber referencias sobre el tema.

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