Efecto de la producción in vitro de embriones en

Transcripción

1 Efecto de la producción in vitro de embriones en la alteración n de la proporción n de sexos. Dpto. de Reproduccion Animal y Conserva ción n de Recursos Zoogenéticos INIA - Madrid

2 Preselección del sexo Porqué es importante? Económicamente Producir animales con m éritos genéticos Progreso genético Enfermedades ligadas al sexo Flexibilidad de mercado y manejo

3 Métodos de presel eccionar el sexo Manipulación in vivo Separación in vitro de Espermatozoides X e Y Diagnóstico preimplantacional in vitro Técnicas de gradientes Marcadores de superficie Citometría de flujo Albúmina Percoll Sephadex Swim-up Antígeno HY Electroforesís

4 Primera aplicación comercial de la selección preimplantacional de embriones: sexaje de los embriones

5 Sexaje de embriones Biopsia embrionaria Aspiración División mecánica Técnicas de diagnóstico Citológicos Diferencias metabólicas FISH PCR (con o sin electroforesis)

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7 División mecánica Macho Hembra

8 FISH

9 Sexaje de embriones: análisis por FISH de n úcleos en interfase Cromosoma X Cromosoma Y Cromosoma 16 Hembra normal Macho normal

10 Resultados de sexaje por FISH Male Female

11 Sexaje de embriones mediante PCR

12 Sexaje de embriones mediante PCR ( Bry, Sal) M M 300 bp 210 bp

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14 Mecanismos de variaci ón pre-concepcional de la proporción de sexo: Selección de esperma Diferencias en los niveles hormonales de las donantes durante el ciclo pueden seleccionar los espermatozoides X ó Y (James, 1996) El envejecimiento de los ovocitos podría ser responsable de la selección de espermas X ó Y (Dominko et First, 1996) Procesado del esperma La longevidad diferencial de los espermas X e Y (Aranha and Martin, 1992) Comportamiento diferencial (motilidad/reacción acrosómica) de los espermas X e Y (Gutiérrez-Adán et al., 1999)

15 Efecto de Sistemas in vitro para el sexo de los embriones produc idos: Medios de cultivo in vitro (Gutiérrez-Adán et al., 2001) Presencia de glucosa Momento de la primera división celular Momento de inseminación (Gutiérrez-Adán et al., 1999)

16 Introducción Existe evidencia en distintas especies que indica que los embriones producidos in vitro que alcanzan antes el estadio de blastocisto, aparecen mas machos que hembras, los ejemplos incluyen: Ratón Valdivia et al Embriones in vitro (Blastocistos) Rápidos = 78.0 % Medios = 57.5 % Lentos = 42.5 % Trasferidos in vitro (Fetos) Rápidos = 76.2 % Lentos = 25.7 % Bovino Avery et al., 1992 Embriones in vitro (Blastocistos) Dia 7 = 60 % Día 8 = 40 % Día 10 = 33 % Ovino Bernardi & Delouis 1996 Embriones in vitro (Blastocistos) Día 6 = % Día 8 = % Cerdo Cassar et al, 1994 Embriones in vivo (fetos-dia 10) Rápidos = 73.0 % Medios = 45.5 % Lentos = 17.6 % Humano Pergament et al., 1994 Embriones in vitro Nacimientos >4 cel al transferir : = 6 : 1

17 Velocidad de d esarrollo embrionario in vitro Los blastocistos que se desarrollan rápidos r en el cultivo son generalmente considerados "mas viables" y mejores supervivientes a la congelaci ción n y a la transferencia, que los que se desarrollan mas despacio (Nedambale( et al. 2004). Medio KSOM KSOM-SOF Período de Cultivo Día: 6 Día: Día: Día: 6 Día: Día: Supervivencia 48 h post congelación (%) Machos (%) Hembras (%) 58 a b b ab c b

18 Efecto de la duraci ón de la maduraci ón (16 h: línea azul vs 24 h: línea roja) sobre la tasa acumulativa de divisi ón en cada momento (P<0.05) % a a b a b a b b 24h 28h 32h 36h 40h 44h 48h Horas post inseminación

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21 SEXAJE DE ESPERMAT OZOIDES: Separación de espermas X de Y Diferencias entre espermatozoides X e Y en las que se basa el sexaje del semen: Menor cantidad de DNA en el esperma Y Menor tamaño y densidad en el esperma Y Capacidad f luorescente del cromosoma Y Mayor motilidad del espermatozoide Y? Carga negativa del espermatozoide Y? Diferencias en expresi ón génica haploide?

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25 Gradiente de albúmina

26 Conclusión El estadio de maduración del ovocito en el momento de la fecundación tiene un efecto sobre la cinética de las primeras divisiones, pero no sobre el total de la tasa de división, ni sobre la cantidad de blastocistos obtenidos. Así mismo, la distribución de blastocistos machos y hembras entre los días 6 y 8 no se ve afectada por la duración de la maduraci ón.

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