Importancia de la infección por Mycoplasma hyopneumoniae en lechones al destete. Estudio preliminar en España

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1 dossier micoplasmas Importancia de la infección por Mycoplasma hyopneumoniae en lechones al destete. Estudio preliminar en España Marina Sibila 1 y Joaquim Segalés 1,2 Imágenes cedidas por los autores Resumen Mycoplasma hyopneumoniae es el principal agente etiológico de la neumonía enzóotica (NE), una enfermedad respiratoria crónica que afecta sobre todo a los cerdos de finalización. Los perjuicios que causa se deben principalmente al coste del tratamiento, la reducción de los rendimientos productivos en cebo y finalización y el consecuente descenso en el precio de venta de la canal. Aunque los signos clínicos atribuidos a la NE suelen observarse en cebo, la infección puede darse en etapas tempranas de la producción. Se ha descrito esta infección temprana como un indicador potencial de la presencia de lesiones pulmonares compatibles con NE a la edad de sacrificio. El presente artículo se divide en dos secciones. En la primera se revisan los conocimientos actuales sobre la infección temprana por M. hyopneumoniae, y en la segunda se describen los resultados de un estudio sobre la infección por esta bacteria en lechones de 3-4 semanas de edad procedentes de 46 explotaciones españolas. Dicho estudio ayudará a determinar la importancia de M. hyopneumoniae en las infecciones tempranas. Palabras clave: Mycoplasma hyopneumoniae, infección temprana, PCR, hisopos traqueobronquiales Summary Importance of M. hyopneumoniae early infections. Preliminary study in Spain Mycoplasma hyopneumoniae is the principal aetiologic agent of enzootic pneumonia (EP), a chronic respiratory disease that affects mainly finishing pigs. Detrimental effect of EP are mainly associated to treatment cost, reduce performance in growing and finishing pigs and the consequent lower market price of the carcass. Although the clinical signs attributed to EP are normally observed in finishing pigs, animal infection can occur early in f the production systems. This early infection has been described as a potential indicator of the presence of EP-compatible lung lesions at slaughterage. The present paper is divided in two sections. Firstly, the current state of knowledge on M. hyopneumoniae early infection is reviewed and secondly, the results of a study focused on the M. hyopneumoniae infection of in 3-4 weeks old piglets from 46 Spanish farms are described. This study will help to elucidate the importance of M. hyopneumoniae early infections. Key words: Mycoplasma hyopneumoniae, early infection, PCR, tracheo-bronchial swabs Contacto con el autor: 1 Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA) - UAB-IRTA - Campus de la Universitat Autònoma de Barcelona Bellaterra (Barcelona) - 2 Departament de Sanitat i d Anatomia Animals - Facultat de Veterinària - Universitat Autònoma de Barcelona Bellaterra (Barcelona). marina.sibila@cresa.uab.cat 24 n SUIS Nº 84 Enero/Febrero 2012

2 Mycoplasma hyopneumoniae es el agente primario causante de la neumonía enzoótica (NE) en el cerdo. La prevalencia de las infecciones por esta bacteria es muy elevada en la mayoría de las áreas productoras porcinas, de modo que resulta difícil encontrar explotaciones comerciales libres de ella, y en su caso se limitarían, en su mayoría, a granjas de selección genética. La NE ocasiona graves pérdidas económicas en el sector porcino, derivadas del empeoramiento de los parámetros productivos (reducción de la ganancia media diaria e incremento del índice de conversión) y de un aumento en el gasto en medicamentos, lo que implica un incremento de los costes de producción. Por otro lado, M. hyopneumoniae es uno de los principales agentes implicados en el complejo respiratorio porcino (Thacker et al., 2006). La infección por M. hyopneumoniae se puede dar en cerdos de todas las edades, pero la presentación clínica de la enfermedad raramente se produce antes de las seis semanas de vida. Esto se debe a una transmisión relativamente ineficiente de cerdas a lechones, lo que se explica por la baja excreción de la bacteria por las madres y la protección de los lechones gracias a la inmunidad calostral. La presentación característica de la enfermedad se produce en la fase de engorde, y es frecuente su aparición entre los tres y los seis meses de vida (Thacker et al., 2006). INFECCIONES TEMPRANAS Y PREVALENCIA AL DESTETE A pesar de que la presentación clínica de la enfermedad se produce durante la etapa de cebo, la infección se suele dar con anterioridad, incluso durante la fase de lactación. Durante los últimos años ha aumentado el conocimiento sobre las infecciones tempranas por M. hyopneumoniae y su importancia en la epidemiología y el desarrollo de la enfermedad. Por un lado, se han descrito distintas dinámicas de infección según el sistema de producción (Sibila et al., 2004). En ciclos cerrados, la infección de lechones en la fase de transición tiende a ser mayor y el porcentaje de cerdos infectados aumenta progresivamente con la edad. En los sistemas de múltiples fases, las infecciones en transición y en las primeras etapas del crecimiento son menos importantes que en las granjas de ciclo cerrado, aunque la prevalencia de la infección puede aumentar de manera importante en el engorde (Sibila et al., 2004). Tabla 1. Número y porcentaje (entre paréntesis) de cerdas y lechones positivos por ELISA, y número y porcentaje (entre paréntesis) de lechones muestreados con hisopos nasales npcr positivos (adaptado de Sibila et al., 2007). Edad npcr positivo ELISA positivo Cerdas 1 semana posparto * 19 de 69 (27,5%) Lechones * no aplicable. Consolidación pulmonar cráneo-ventral. 1 semana 8 de 507 (1,6%) 71 de 504 (14,1%) 3 semanas 19 de 507 (3,7%) 47 de 506 (9,3%) Tabla 2. Resultados de granjas y lechones positivos por npcr por país (Adaptado de Villareal et al., 2010). País Nº (%) de granjas positivas Nº (%) de lechones positivos Bélgica 4 (66,6) 6 (3,3) Dinamarca 3 (50,0) 3 (1,7) Francia 6 (100,0) 38 (21,1) Alemania 3 (75,0) 23 (18,7) Hungría 3 (50,0) 18 (10,0) Italia 5 (83,3) 40 (22,1) Polonia 4 (66,6) 17 (9,7) España 2 (33,3) 9 (5,0) Holanda 5 (83,3) 14 (7,7) Total 35 (67,3) 168 (10,7) SUIS Nº 84 Enero/Febrero 2012 n 25

3 Por otro lado, los estudios realizados durante los últimos 10 años (Ruiz et al., 2003; Sibila et al., 2007; Fano et al., 2007; Villareal et al., 2010) han demostrado que la prevalencia de lechones de días de edad infectados por M. hyopneumoniae (positivos a PCR en hisopo nasal) puede ser muy variable (entre 0% y 51,8%, según lote y/o granja). Sibila et al. (2007) muestrearon seis lotes consecutivos de animales de una explotación de ciclo cerrado con problemas respiratorios en cebo en los cuales estaba involucrado M. hyopneumoniae. En total, se tomaron hisopos nasales y sangre de 507 lechones en la primera y la tercera semanas de vida. Los hisopos se analizaron mediante una PCR anidada (npcr) (Calsamiglia et al., 1999) y los sueros mediante un kit comercial de ELISA. Estos lechones procedían de 69 cerdas (1º a 8º parto) y el porcentaje de positivos en la 1ª y 3ª semanas de vida fue de 1,6% (8 de 507) y 3,7% (19 de 507), respectivamente (tabla 1). El rango de detección por npcr en los lechones de los distintos lotes fue de 0-3,1% y de 0-6,4% en la 1ª y 3ª semanas de vida, respectivamente. La mayoría de los animales npcr positivos a M. hyopneumoniae en lactación eran seronegativos (75% y 95% en la 1ª y 3ª semanas de edad) y procedían mayoritariamente de cerdas seronegativas (62,5% y 58% a la 1ª y 3ª semanas de edad). Por tanto, el hecho de que hubiese un 25% y 5% (a la 1ª y 3ª semanas de edad, respectivamente) de lechones colonizados por M. hyopneumoniae con anticuerpos de origen calostral, indica que esta inmunidad no fue suficiente para evitar la infección. Estos resultados sugieren que la infección por M. hyopneumoniae puede empezar a edades tempranas. Como consecuencia, la transmisión madre lechón y/o lechón lechón en las salas de partos tendría, probablemente, un papel significativo en la epidemiología de esta infección, a pesar de que éste no se encuentra bien establecido. Neumonía bronquiolo-intersticial con hiperplasia del tejido linfoide peribronquial y peribronquiolar. Nivel de infección en lechones lactantes Durante el periodo comprendido entre mayo de 2008 y marzo de 2009, Villarreal et al. (2010) llevaron a cabo un estudio para detectar el nivel de infección por M. hyopneumoniae en lechones lactantes en nueve países de la Unión Europea. Las explotaciones seleccionadas para este estudio presentaban problemas respiratorios en la fase de cebo y no empleaban ningún antibiótico durante las tres primeras semanas de vida de los lechones. En cada granja se tomaron hisopos nasales de 30 lechones de 21 días de vida (± 3 días). Se muestrearon seis granjas por país (excepto Alemania, con cuatro explotaciones) y en total el estudio incluyó 52 granjas y lechones. Estos hisopos fueron analizados mediante una técnica de npcr. Los resultados globales obtenidos (tabla 2) muestran que un 67,3% de explotaciones presentaban lechones npcr positivos a hisopo nasal al destete, con un porcentaje de lechones npcr positivos del 10,7% (168 muestras positivas de lechones muestreados). El porcentaje de lechones positivos a M. hyopneumoniae variaba dentro de un intervalo de 0% a 30,0% (de 0 a 11 positivos de 30 lechones muestreados). En España, se demostró la existencia de infecciones tempranas por M. hyopneumoniae en el 33,3% de las granjas, y el porcentaje medio de lechones infectados por granja al destete fue del 5%, con un intervalo entre 0% y 20%. Estos resultados sugieren que las infecciones tempranas por M. hyopneumoniae en Europa son relativamente habituales. Importancia de la prevalencia al destete El conocimiento de la prevalencia al destete de M. hyopneumoniae en una explotación aporta información sobre dos aspectos clave. Nivel de excreción de las cerdas (Ruiz et al., 2003): la prevalencia de M. hyopneumoniae en lechones al destete es un indicador aproximado del número de madres en el lote de partos que están excretando la bacteria. Tradicionalmente se ha pensado que la probabilidad de transmitir la infección es mayor en cerdas jóvenes que en viejas. Sin embargo, Calsamiglia et al. (2000) demostraron que incluso las hembras que habían parido más veces (3 a 7 partos) podían transmitir el patógeno. Ello sugeriría que, aún cuando las madres transmiten inmunidad calostral, hay un porcentaje de lechones que se infectan antes del destete. La existencia de esta inmunidad es relativamente fácil de medir a través de la presencia de anticuerpos. Gravedad de la NE en cerdos (Fano et al., 2007; Sibila et al., 2007): la prevalencia en el destete, es decir, el porcentaje de lechones que ya se encuentran colonizados en el momento previo a la transición, está asociada aparentemente a la prevalencia de lesiones pulmonares (porcentaje de pulmones con lesiones compatible con NE) a la edad de sacrificio y a la gravedad de estas lesiones. 26 n SUIS Nº 84 Enero/Febrero 2012

4 Mediante npcr, Fano et al. (2007) analizaron hisopos nasales tomados de lechones al destete (19 días de vida) de tres granjas de producción de destetados. Dentro de este estudio incluyeron 20 grupos (cada uno correspondiente a un lote semanal), cada uno de los cuales estaba formado por 39 lechones, uno por camada (39 camadas). Los ejemplares seleccionados de cada camada incluida en el estudio se crotalaron de forma individual y se monitorizaron hasta su sacrificio, de modo que se analizaron 780 lechones. En el matadero se tomó de cada uno de estos animales una muestra de sangre, un hisopo bronquial, se valoraron las lesiones pulmonares y se registró el número de individuos con lesiones compatibles con NE (consolidación pulmonar cráneo-ventral). Se analizó la correlación entre la detección de M. hyopneumoniae en hisopo nasal al destete y el porcentaje de animales con lesiones compatibles con NE en matadero, así como el grado de estas lesiones. La prevalencia media de animales npcr positivos al destete en cada una de las tres explotaciones fue de un 25,67% en la granja A, un 11,85% en la granja B y un 3,39% en la granja C. Cabe destacar la gran variabilidad que se observó entre lotes de una misma y/o de distintas explotaciones (tabla 3). El análisis estadístico determinó una correlación positiva entre la colonización al destete con el porcentaje de pulmones afectados, la extensión de la lesión pulmonar, la seroconversión frente a M. hyopneumoniae y la prevalencia del patógeno medida por npcr en matadero. Además, se observó una correlación positiva entre la prevalencia al destete y la extensión de lesiones pulmonares (por ejemplo, cuanto mayor era la prevalencia al destete, mayor fue la extensión lesional en matadero). Finalmente, el porcentaje de pulmones afectados también estaba Tabla 3. Prevalencia de la colonización de M. hyopneumoniae al destete y evidencia de la bacteria en diferentes grupos en matadero (adaptado de Fano et al., 2007). Grupo npcr hisopo nasal (%) 1 Valoración media de las lesiones pulmonares Frecuencia de pulmones con lesiones asociadas a M. hyopneumoniae (%) 2 npcr hisopo bronquial (%) ,28 12,56 83, ,2 1,30 53,3 79,3 3 48,7 5,70 74, ,76 4,45 70, ,94 5,51 81, ,12 1,07 39,3 10,7 7 15,38 4,27 55, ,94 7,36 80, ,78 3, , ,2 8,06 86, ,46 7,30 80,0 71,8 12 7,69 2,38 44,0 15, ,69 1,15 34,4 25,0 16 5,12 7,06 63,3 48,3 17 5, ,7 18 2,5 0,23 6,6 33,3 19 5,12 1,06 18,8 46,0 20 2,56 1,81 53,5 66,2 1 Porcentaje de detección en destete; 2 Porcentaje de pulmones con lesiones asociadas a M. hyopneumoniae; 3 Porcentaje de detección en matadero. relacionado positivamente con la prevalencia de M. hyopneumoniae al destete. La conclusión final del estudio fue que la prevalencia de animales infectados por M. hyopneumoniae al destete podía, potencialmente, predecir el curso clínico de la enfermedad. Es decir, sin establecer puntos de corte de prevalencias al destete, la gravedad y, por tanto, la repercusión económica de la enfermedad sería mayor en aquellas granjas o lotes en los que la prevalencia al destete fuese más elevada (por encima del 10% en este estudio). En general, este estudio proporcionó evidencias indirectas de que la NE podría ser potencialmente controlada reduciendo el grado de transmisión de M. hyopneumoniae de la madre al lechón en la unidad de partos, donde se asume que la colonización al destete representa la principal fuente de infección. DETERMINACIÓN DE LA PREVALENCIA DE M. HYOPNEUMONIAE AL DESTETE MEDIANTE HISOPOS TRAQUEOBRONQUIALES El objetivo de este trabajo fue determinar la prevalencia de las infecciones por M. hyopneumoniae en animales de destete procedentes de 46 granjas españolas con y sin problemas respiratorios. Para determinar el tamaño muestral necesario para conocer la prevalencia de animales infectados a edades tempranas se estimó, según la información publicada disponible, una prevalencia esperada del 10% y un nivel de confianza del 95%. A partir de estos cálculos, el tamaño muestral fue de 30 muestras por granja. Así pues, se tomó un hisopo traqueobronquial a una media de 30 lechones de 3-4 semanas de vida por granja. Una vez tomados los hisopos, y para mejorar su conservación, se sumergieron en 1 ml de solución salina y se mandaron refrigerados al Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA). Una vez allí, se procesaron mediante una técnica de npcr previamente descrita (Calsamiglia et al., 1999). Además de la muestra, también se recogió información sobre el estado sanitario y distintos aspectos productivos de la granja mediante una encuesta epidemiológica. La información más relevante derivada de las encuestas epidemiológicas se detalla en la tabla 4. Se detectó M. hyopneumoniae en 17 de las 46 granjas estudiadas (37%). 28 n SUIS Nº 84 Enero/Febrero 2012

5 Técnicas de muestreo Tradicionalmente, en los diferentes estudios que se han llevado a cabo sobre prevalencias de M. hyopneumoniae al destete, el método de muestreo ha sido el hisopo nasal. Además de esta muestra, se podrían emplear otras para la detección de M. hyopneumoniae en animales vivos, como el lavado traqueobronquial, el raspado orofaríngeo y los hisopos traqueobronquiales (Marois, 2007; Fablet, 2010). Evidentemente, la muestra de uso más cotidiano, por su simplicidad y rapidez, es el hisopo nasal. No obstante una buena muestra para su uso en diagnóstico debe ser aquella que presente una mayor sensibilidad por ser el punto de acción o multiplicación primario del patógeno en cuestión. De forma experimental, Marois et al. (2007), llevaron a cabo un estudio en cerdos SPF infectados experimentalmente y sacrificados a los días posinfección, con el fin de valorar la capacidad de detección de M. hyopneumoniae por npcr con diferentes técnicas de muestreo. La conclusión del estudio fue que la técnica de hisopo nasal presentó la menor sensibilidad de las cuatro valoradas, de forma que no existieron diferencias estadísticamente significativas entre las técnicas de hisopo oro-faríngeo, lavado traqueobronquial e hisopo traqueobronquial. Posteriormente, el mismo grupo de investigadores realizó un estudio con el objetivo de evaluar cuatro técnicas de muestreo diferentes para la detección de M. hyopneumoniae en cerdos infectados de forma natural (Fablet et al., 2010). Estas técnicas fueron: hisopo nasal, lavado traqueobronquial, hisopo traqueobronquial y raspado orofaríngeo. Para ello se seleccionaron aleatoriamente 60 cerdos de cebo (180 días de vida aproximadamente) de un lote de una granja con problemas respiratorios crónicos. De cada animal se tomaron las muestras anteriormente citadas y fueron analizadas mediante npcr y PCR a tiempo real, para evaluarse posteriormente la sensibilidad y especificidad de cada método de muestreo. De los 60 animales, 18 (30%) tuvieron todas las muestras negativas por npcr, 7 (11,6%) las tuvieron todas positivas y 13 (21,6%) tuvieron todas positivas excepto el hisopo nasal. El resto de animales, 22 (36,7%) tuvieron distintas combinaciones de muestras positivas y negativas. Las conclusiones a las que llegaron los autores de este estudio fueron las siguientes: Las técnicas de muestreo más sensibles fueron los hisopos traqueo-bronquiales y el lavado traqueobronquial. El hisopo nasal fue la técnica de muestreo que presentó una menor sensibilidad. Las cantidades de ADN de M. hyopneumoniae fueron mayores en los lugares de muestreo traqueobronquiales que a nivel nasal u orofaríngeo. Los hisopos traqueobronquiales, combinados con PCR a tiempo real, pueden ser una herramienta de diagnóstico precisa para el estudio de las dinámicas de infección en granjas porcinas. El número final de hisopos traqueobronquiales analizado fue de La prevalencia de muestras npcr positivas por granja varió entre 3,33% (1 animal positivo) y 16,67% (5 animales positivos). La prevalencia media entre todas la granjas fue del 2,33% y, considerando solo las granjas npcr positivas, del 6,3%. De estas 17 granjas con al menos un lechón npcr positivo, 13 utilizaban un sistema de producción en múltiples fases y solo cuatro eran granjas de ciclos cerrado. Esta diferencia, sin embargo, no fue estadísticamente significativa. Por otro lado, no se encontró ninguna relación estadística del número de granjas npcr positivas a M. hyopneumoniae con el hecho de vacunar a los lechones, ni con la presencia de sintomatología compatible con NE. De la misma manera, tampoco se observaron diferencias significativas en cuanto a la prevalencia de la detección del patógeno con respecto a los parámetros SUIS Nº 84 Enero/Febrero 2012 n 29

6 Tabla 4. Número de granjas analizadas, positivas y rango de animales positivos por npcr a M. hyopneumoniae teniendo en cuenta las variables epidemiológicas estudiadas. Variable Nº de granjas analizadas Nº (%) de granjas positivas a M. hyopneumoniae por npcr Rango (%) de animales positivos por npcr Sistema de producción Presencia de sintomatología clínica compatible con NE* Vacunación frente a M. hyopneumoniae Ciclo cerrado 14 4 (28,6) 0-10 Múltiples fases (40,6) 0-16,67 Sí 20 9 (45,0) 0-10 No 23 7 (30,4) 0-16,67 Sí (40,7) 0-16,67 No 19 6 (31,5) 0-16,67 * Información no disponible en 3 de las 46 granjas. anteriormente citados (sistema de producción, presencia de sintomatología y vacunación frente a M. hyopneumoniae). El porcentaje de granjas positivas detectadas por npcr en el presente estudio (37%) es muy similar al porcentaje de explotaciones españolas positivas (33%) observado por Villareal (2010), pero menor que el detectado en las granjas del resto de países europeos incluidos en ese estudio. Por otro lado, la prevalencia de animales infectados por M. hyopneumoniae observada en el presente trabajo (2,33%) es muy parecida a la hallada en dos estudios españoles donde se tomaron hisopos nasales en cerdos de 3-4 semanas de vida (Sibila et al., 2007, Sibila et al., 2008), pero menor que la observada en la mayoría de países incluidos en el estudio de Villareal et al. (2010) y que la descrita por Calsamiglia et al., (2000) y Ruiz et al., (2003). El hecho de que no se haya encontrado relación entre la positividad de una granja y/o la prevalencia de la detección con el sistema de producción puede deberse a la baja prevalencia de infecciones observada. Estos resultados no coincidirían con dos estudios anteriormente publicados (Sibila et al., 2004, Moorkamp et al., 2009) en los que se detectó una mayor prevalencia de animales infectados a edades tempranas en sistemas de producción de una o dos fases comparados con los de tres fases. Se debe tener en cuenta que en los dos estudios anteriormente mencionados los animales analizados tenían entre 1-5 (Sibila et al., 2004) y 3-6 (Moorkamp et al., 2009) semanas de edad. La infección temprana implica un riesgo importante de enfermedad En resumen, el estudio realizado en 46 granjas españolas indica que M. hyopneumoniae está presente en lechones al destete en un porcentaje significativo de granjas. Considerando que este es un patógeno de transmisión lenta y persistente, la presencia de la infección a edades tan tempranas probablemente significa un riesgo importante de diseminación de la infección y de potencial generación de enfermedad clínica en las fases posteriores. 30 n SUIS Nº 84 Enero/Febrero 2012

7 Por otro lado, tampoco se observó ninguna relación entre la detección de M. hyopneumoniae en hisopos traqueobronquiales y la presencia de sintomatología compatible con NE. Este hecho puede deberse a que la aparición de los síntomas clínicos asociados a esta enfermedad se suele observar en animales de engorde y que hay otros patógenos que pueden producir tos, lo que sugiere que quizás la sintomatología observada no fuese en todos los casos causada por M. hyopneumoniae (Thacker et al., 2006). Los resultados obtenidos en este estudio indican que la infección por M. hyopneumoniae a edades tempranas en granjas españolas es bastante frecuente, pero que el porcentaje de animales infectados por granja es relativamente bajo. Es importante destacar que con este tamaño muestral (30 muestras por granja con una prevalencia esperada del 10%) no se puede llegar a determinar el porcentaje exacto de animales infectados. Es decir, la detección de al menos un ejemplar npcr positivo (independientemente del número de animales positivos detectados) nos indica que la granja en cuestión tendrá una prevalencia de animales infectados por M. hyopneumoniae al destete superior al 10%. Por el contrario, el hecho de no detectar ninguna muestra npcr positiva, no quiere decir que no existan infecciones debidas a la bacteria en el destete en la granja, sino que la prevalencia será menor del 10%. Agradecimientos Los autores de este artículo agradecen al personal del servicio técnico de Elanco Valquímica su inestimable participación en la selección de las granjas, así como en la toma de muestras analizadas en el estudio. Por otro lado, agradecen también a los veterinarios clínicos responsables de las granjas, su voluntad e interés en participar en este estudio. BIBLIOGRAFÍA Thacker, E., Mycoplasmal diseases. In: Straw, B.E., Zimmerman,J.J., D Allaire, S., Taylor, D.J. (Eds.), Diseases of Swine. 9th ed. Blacwell Publishing Ltd., Oxford, UK, pp Sibila, M., Calsamiglia, M., Vidal, D., Badiella, L., Aldaz, A., Jensen, J.C., Dynamics of Mycoplasma hyopneumoniae infection in 12 farms with different production systems. Canadian Journal of Veterinary Research 68, Ruiz, A., Utrera, V., Pijoan, C., Effect of Mycoplasma hyopneumoniae sow vaccination on piglet colonization at weaning. Journal of Swine Health and Production, 11 : Sibila, M., Nofrarías M., López-Soria, S., Segalés, J., Riera, P., Llopart, D., Calsamiglia, M., Exploratory field study on Mycoplasma hyopneumoniae infection in suckling pigs. Veterinary Microbiology 121, Fano E. Pijoan C y Dee S Effect of Mycoplasma hyopneumoniae colonization at weaning on disease severity in growing pigs. The Canadian Journal of Veterinary Research 71, Villareal, I., Vranckx, K., Duchateau, L., Pasmans, F., Haesebrouck, F., Jensen, J. C., Nanjiani, I. A., Maes, D., Prevalence and risk factors for early Mycoplasma hyopneumoniae infections in suckling pigs in different EU countries. Proceedings of the 21st IPVS congress, Vancouver, Canada. pp Calsamiglia M, Pijoan C, Bosch G Profiling Mycoplasma hyopneumoniae in farms using serology and a nested PCR technique. Journal of Swine Health and Production 7: Calsamiglia M, Pijoan C,2000. Colonisaition state and colostral immunity to Mycoplasma hyopneumoniae of different parity sows. Veterinary Record. 146: Marois, C., Le Carrou, J., Kobisch, M., Gautier-Bouchardon, A.V., Isolation of Mycoplasma hyopneumoniae from different sampling sites in experimentally infected and contact SPF piglets. Veterinary Microbiology. 120, Fablet, C., Marois, C., Kobisch, M., Madec, F., Rose, N., Estimation of the sensitivity of four sampling methods for Mycoplasma hyopneumoniae detection in live pigs using a Bayesian approach. Veterinary Microbiology, 143, Sibila, M., Bernal, R., Torrents, D., Riera, P., Llopart, D., Riera, P., Llopart, D., Calsamiglia, M., Segalés J Effect of sow vaccination against Mycoplasma hyopneumoniae on sow and piglet colonization and seroconversión, and pig lung lesions at slaughter. Veterinary Microbiology 127, Moorkamp L., Hewicker-Trautwein M., Grosse Beilage E Occurrence of Mycoplasma hyopneumoniae in coughing piglets (3 6 weeks of age) from 50 herds with a history of endemic respiratory disease. Transboundary and Emerging Diseases. 56: SUIS Nº 84 Enero/Febrero 2012 n 31