IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES DE CALONECTRIA Y CYLINDROCLADIELLA PRESENTES EN VIVEROS DE EUCALIPTO DE PAYSANDÚ

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1 IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES DE CALONECTRIA Y CYLINDROCLADIELLA PRESENTES EN VIVEROS DE EUCALIPTO DE PAYSANDÚ Pilar Gasparri Guillermo Pérez Raquel Alonso Carlos A. Pérez VI Jornada Técnica Protección Forestal Tacuarembó, 15 de noviembre 2013

2 Enfermedades causadas por Cylindrocladium Muerte de pie madre

3 Muerte de estacas Podredumbre de tallo Anillado del tallo

4 Manchas foliares

5 Muerte de plantines en el campo

6 Tizón foliar por Cylindrocladium en Sur de China FABI

7 Calonectria Biología Taxonomía Reino: Fungi Filum: Ascomycota Familia: Nectriaceae Genero: Calonectria Fase Sexual = Calonectria Peritecio de color rojo-anaranjado, ostiolados y con paredes rugosas. En su interior contiene ascos con ascosporas hialinas, fusiformes. Fase Asexual = Cylindrocladium Reproducción por conidióforos con conidiosporas cilíndricas Lombard et al., 2010

8 Cylindrocladiella Taxonomía Reino: Fungi Filum: Ascomycota Familia: Nectriaceae Genero: Cylindrocladiella Reproducción por conidióforos con conidiosporas cilíndricas Conidios pequeños Estípite sin septo Fase asexual Lombard et al., 2012

9 Especies asociadas a manchas foliares Ca. reteaudii Sur oeste de Asia Norte de Australia Ca. reteaudii Ca. ilicicola Ca. gracile India Ca. avesiculatum Ca. theae Ca. cadelabrum Ca. colhounii Ca. heptaseptatum Ca. ovatum Ca.parasiticum Ca. pauciramosum Ca. pteridis Ca. reteaundii Ca. variabile Sudamérica Ca. gracile Ca. pauciramosum Brasil Sudáfrica

10 Especies asociadas a podredumbre de tallo Ca. candelabrum Ca. colhounii Ca. floridanum Ca. macroconidiale Ca. parasiticum Ca. ovatum Ca. retaudii Ca. scoparium. Especies asociadas a podredumbre de raíz Ca. pauciramosum Ca. gracile Ca. scoparium Ca. gracile Ca. curvatum Ca. floridanum Cy. camelliae Sudáfrica Brasil India R. Reyna

11 Escasa información a nivel nacional OBJETIVO Identificar especies de Calonectria y Cylindrocladiella presentes en viveros de eucalipto en Paysandú Estrategia de investigación Prospección Aislamiento Generación de colección de cultivos puros Identificación por técnicas moleculares

12 MATERIALES Y MÉTODOS Prospección - 4 viveros del departamento de Paysandú. Muestras Plantines con síntoma de Calonectria Sustrato Arena de mini jardines Suelo Bandejas

13 Tipo de muestras tomadas en cada vivero Vivero Sustrato Arena Planta Suelo Bandejas Total A B C D Total: 71

14 Procesamiento Cámaras húmedas : Inducción esporulación desde infección Pesca : Inducción esporulación desde sustrato

15 Obtención de cepas puras Esporulación Lupa Conidióforos extracto de malta 2% Purificación Repique punta de hifa Cepa pura Generación de una colección de cultivos puros

16 Colección de cepas analizada Vivero Sustrato Arena Planta Suelo Bandejas Total A B C D Total Colección total: 120 cepas

17 Agrupamiento por morfología Cepa 48 : Vivero B/plantin N muestra: Cepa 31 : Vivero B/plantin N muestra: Cepa 30 : Vivero B/plantin N muestra: Cepa 13 : Vivero A/sustrato N muestra: 1.4

18 Identificación molecular Extracción de ADN desde cultivo puro Amplificación de la región del ITS Secuenciación Comparación con cepas de referencia Análisis filogenético

19 Ca colombiensis CBS T Análisis filogenético PG25 Cy peruviana CBS Cy camelliae STE U234 Cy. Cy natalensis peruviana CBS Cy camelliae CPC237 PG10 Cy lageniformis CBS T Cy lageniformis CBS Complejo camelliae Cy. lageniformis Análisis realizado por Máxima Parsimonia basado en la región ITS del ADN ribosomal PG14 PG20 PG45 PG54 PG60 PG3 PG42 PG44 PG16 PG15 PG24 PG64 Ca. sulawesiensis PG48 PG PG56 PG51 PG61 PG50 Ca sulawesiensis CBS T 100 Ca sulawesiensis CBS Ca cerciana CBS T Ca cerciana CBS Ca reteaudii CBS Ca reteaudii CBS T Ca pseudospathiphylli CBS Ca insularis CBS T Ca insularis CBS Ca densa CBS T Ca densa CBS Ca spathiphylli CBS T Ca spathiphylli CBS Ca spathulata CBS Ca spathulata CBS PG17 PG19 Ca scoparia CPC1675 Ca scoparia CPC1679 Ca. scoparia Ca pentaseptata VM3 Ca pentaseptata VM11 PG58 Ca humicola CBS T Ca. humicola Ca humicola CBS PG52 Ca pauciramosa CMW5683 T Ca pauciramosa CPC416 Ca hawksworthii CBS T PG18 PG55 PG53 PG27 Ca. pauciramosa PG2 PG13 PG11

20 Número de cepas por especie por vivero

21 Presencia de las especies en los diferentes sustratos

22 Ca. humicola Ecuador: suelo En un vivero, aislado desde compost Ca. pauciramosa Reportada en Uruguay por Lombard et al África y Australia: patógeno dominante en viveros Presente en 3 de 4 viveros, en todos los sustratos analizados Ca. sulawesiensis Indonesia: patogénica Presente en todos los viveros y en todos los sustratos analizados, menos arena

23 Complejo Cylindrocladiella camelliae Cy. peruviana Sudáfrica y Brasil: patogénica Cy. camelliae Australia, Brasil, Nueva Zelanda y Sudáfrica: patogénica, presente en suelo Sólo aislada de compost de un vivero Cy. lagenifromis Brasil y Sudáfrica: patogénica Sólo aislada de compost de un vivero

24 Conclusiones Dos géneros presentes en los viveros Varios grupos taxonómicos representados Confirmación del inóculo en todos los sustratos Necesidad de análisis de otras regiones genómicas 4 viveros 1 Departamento

25 IDENTIFICACIÓN Conocimiento sobre la biología de cada especie Necesidad de evaluar patogenicidad Conexión con las especies presentes en el campo Resistencia de materiales genéticos

26 Agradecimientos UPM Trabajo realizado en el marco de tesina de grado Facultad de Ciencias Vivero Dodera Vivero Nasca Financiación: Muchas gracias!!!