PLANIFICACIÓN DE ASIGNATURA

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1 PLANIFICACIÓN DE ASIGNATURA I IDENTIFICACION GENERAL DE LA ASIGNATURA CARRERA BIOQUIMICA DEPARTAMENTO BIOLOGIA ASIGNATURA BIOLOGIA MOLECULAR II CÓDIGO 1681 PRERREQUISITOS Biología Molecular I CREDITOS (TEL) AÑO Primer Semestre 2008 RÉGIMEN DE ASISTENCIA Obligatoria Palabra Clave Técnicas de ADN recombinante TEORIA 0 HORAS PEDAGOGICAS EJERCICIO 0 LABORATORIO 6 II DESCRIPCION DE LA ASIGNATURA La asignatura de Biología Molecular II tiene carácter eminentemente práctico, con énfasis en el empleo de técnicas y métodos de ADN recombinante, y donde se espera la aplicación, por parte del alumno, de la teoría previamente aprendida en química, fisicoquímica, bioquímica y biología molecular para analizar, comprender y describir los fenómenos observados en el quehacer experimental de este curso. III OBJETIVO GENERAL Poner en práctica diversas técnicas y procedimientos experimentales de biología molecular, analizando y comprendiendo los resultados obtenidos, los principios teóricos fundamentales de los mismos, así como su aplicabilidad en el área de la bioquímica. IV CAPACIDADES A LOGRAR POR EL ALUMNO Reconocer los aspectos teóricos de cómo funcionan las herramientas de biología molecular más comunes. Aplicar procedimientos prácticos de extracción y visualización de ADN y ARN, PCR, clonamiento y transformación bacteriana, purificación de ADN recombinante, hibridación de ácidos nucleicos y análisis de expresión transcripcional. Manejar los aspectos teóricos y prácticos de enzimas auxiliares (polimerasas, enzimas de restricción, ligasas, etc.), kits y vectores comerciales, y reactivos químicos en general, utilizados frecuentemente en biología molecular. Conocer las magnitudes de volúmenes, masas y unidades enzimáticas más frecuentemente usadas en biología molecular, así como ser capaces de realizar los cálculos matemáticos necesarios para preparar reacciones. Manejar el equipamiento habitual existente en laboratorios de biología molecular.

2 Analizar las posibles fuentes de errores en experimentos fallidos, así como proponer procedimientos experimentales alternativos. Reconocer la importancia de métodos de biología molecular en la comprensión de la estructura y función de los ácidos nucleicos. Ser capaz de trabajar en equipo, con el orden y disciplina necesaria para un laboratorio de biología molecular. Discutir en forma oral y escrita los resultados experimentales en coherencia con los fundamentos teóricos que sustentan dichos resultados. V VI UNIDADES TEMÁTICAS UNIDAD I: Extracción de ADN genómico, ADN plasmidial, PCR y clonamiento Nº HORAS 30 Aprendizajes Esperados Extraer e identificar distintos tipos de ADN. Amplificar un fragmento de ADN mediante PCR. Clonar un fragmento de ADN y transformar una bacteria con ADN recombinante. Analizar ADN mediante enzimas de Criterios de evaluación Obtiene, identifica y cuantifica ADN cromosomal y plasmidial mediante técnicas estándares. proceso experimental de obtención de distintos tipos de ADN y de su análisis mediante electroforesis. Amplifica e identifica un fragmento de ADN amplificado por PCR. proceso de amplificación de ADN por PCR. Conoce la mecánica básica de funcionamiento de un termociclador. Obtiene clones bacterianos al transformar con una mezcla de ligación vector-inserto preparada previamente. proceso de ligación de ADN y transformación bacteriana. Reconoce la teoría y utilidad de métodos de selección positiva de clones recombinates. Obtiene fragmentos de restricción desde una mezcla de Contenidos Extracción de ADN cromosomal y su visualización en geles de agarosa. Purificación de plásmidos por el método de lisis alcalina y su análisis en geles de agarosa. Amplificación por PCR de un gen desde ADN cromosomal. Clonamiento de un trozo de ADN. Transformación de E. coli. Liberación de un inserto desde plásmidos usando enzimas de

3 restricción digestión vector-enzima de restricción preparada previamente. Reconoce las teorías, y principios biológicos detrás de los sitios de restricción de ADN y de las enzimas de restricción. Reconoce la utilidad de las enzimas de restricción en ingeniería genética. restricción. Análisis de los fragmentos mediante electroforesis en geles de agarosa. Evaluación de la Unidad Tipo e instrumento Evaluación sumativa en Prueba Parcial de Ciclo 1. Preguntas de desarrollo Test de entrada a laboratorios periódicos (uno por sesión de laboratorio). Preguntas de desarrollo respecto a la guía de laboratorio. Evaluación formativa. Desarrollo de trabajos prácticos y presentación de informes. contexto Sala de Clases UNIDAD II: Southern blot, extracción de ARN y análisis transcripcional Nº HORAS Aprendizajes Esperados Analizar ADN mediante la técnica de Southern blot Extraer e identificar ARN. Criterios de evaluación Corta ADN genómico con enzimas de restricción y transfiere estos fragmentos a membranas de nylon. Marca una sonda de ADN e hibrida con ella la membrana de nylon. Lava y revela la membrana. Reconoce las teorías, y principios biológicos detrás de los distintos procedimientos asociados a la técnica de Southern blot. Reconoce la utilidad de la técnica de Southern blot en ingeniería genética. Obtiene, identifica y cuantifica RNA mediante técnicas Contenidos Corte de ADN cromosomal con enzimas de restricción. Transferencia de fragmentos de ADN a membrana de nylon. Marcación de una sonda de ADN mediante random priming. Hibridación de membrana de nylon con la sonda. Lavado y revelado de la membrana. Extracción de RNA total desde distintos tipos celulares. Visualización

4 Analizar las diferencias en los niveles de transcripción de un gen sometido a distintas condiciones. Evaluación de la Unidad estándares. principios biológicos detrás del proceso experimental de obtención de ARN. Reconoce las diferencias teóricas y prácticas de la extracción de ARN respecto al ADN. principios biológicos detrás del proceso de expresión diferencial de genes Es capaz de obtener cdna a partir de los distintos RNA. Es capaz de amplificar diferencialmente por PCR el cdna obtenido en dos condiciones distintas. Es capaz de comparar e interpretar los resultados de distintos niveles de inducción transcripcional de un gen. de RNA en geles de azarosaformaldehído. Extracción de ARN desde células sometidas a distintas condiciones. Amplificación por RT-PCR de un gen específico en condiciones distintas. Análisis de la inducción transcripcional de un gen. Tipo e instrumento Evaluación sumativa en Prueba Parcial de Ciclo 1. Preguntas de desarrollo. Test de entrada a laboratorios periódicos (uno por sesión de laboratorio). Preguntas de desarrollo respecto a la guía de laboratorio. Evaluación formativa. Desarrollo de trabajos prácticos y presentación de informes. contexto Sala de Clases VII PONDERACIÓN DEL PROCESO EVALUATIVO Unidad I Prueba parcial de ciclo 1: 25%; test de entrada a laboratorios: 12,5%; informes de trabajos prácticos: 12,5% Unidad II Prueba parcial de ciclo 1: 25%; test de entrada a laboratorios: 12,5%; informes de trabajos prácticos: 12,5% Examen (*)

5 VII REQUISITOS DE EXIMICIÓN DE EXAMEN (*) El curso no contempla examen pues se aprueba sólo si el promedio de cada uno de los tres tipos de evaluación por separado (pruebas parciales de ciclo, test de entrada e informes) tiene nota mínima 4,0. Quienes no logren esta meta en alguno de los tres tipos de evaluaciones reprueban el curso.

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