Bilirrubina Total Modular: Cobas 6000 Test. Diazo Especial. 2. Principio y método del procedimiento utilizado para el examen
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- María Rosario Montero Luna
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1 ÍNDICE. 1. Propósito del examen Principio y método del procedimiento utilizado para el examen Características de desempeño Tipo de muestra Preparación del paciente, indicaciones generales Tipo de contenedor y aditivos Equipo y reactivos requeridos Controles ambientales y de seguridad Procedimientos de calibración, trazabilidad metrológica Pasos del procedimiento Procedimientos de control de calidad Evaluación Externa de la Calidad Interferencias Principio del método para el cálculo de resultados incluyendo resultado de medición de incertidumbre de valores de la magnitud medida Intervalos de referencia biológicos o decisión clínica Intervalo reportable de resultados del examen Instrucción para determinar resultado cuantitativo cuando un resultado no está dentro del intervalo de medición Valores de alerta o críticos Interpretación clínica del laboratorio Fuentes potenciales de variación Referencias Control de cambios y vigencia CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 1 de 11
2 Información de la prueba EXAMEN EQUIPO/METODO Bilirrubina Total Modular: Cobas 6000 Test. Diazo Especial SINONIMOS/ABREVIACIONES BT, Bilirrubina Total DEPARTAMENTO Bioquímica Clínica. CLAVE/CODIGO D-LC-02/ Propósito del examen. La bilirrubina total en suero y plasma es la suma de la bilirrubina no conjugada (Bu), la bilirrubina conjugada monoglucurónida y diglucurónida (Bc) y la bilirrubina delta (DELB), una fracción de la bilirrubina unida covalentemente a la albúmina. Excepto en los casos de ictericia anictérica, la bilirrubina sérica total aparece invariablemente aumentada en los casos de ictericia. Las causas de la ictericia son prehepáticas, como resultado de diversas enfermedades hemolíticas; hepáticas, las que están causadas por lesiones hepatocelulares u obstrucción; y posthepáticas, a consecuencia de una obstrucción de los conductos hepáticos o los conductos biliares comunes. 2. Principio y método del procedimiento utilizado para el examen Método diazo (especial). En un medio fuertemente ácido (ph 1 a 2) y en presencia de un agente disolvente adecuado, la bilirrubina total se acopla a un ion de diazonio. bilirrubina + ion de diazonio ácido azobilirrubina La intensidad cromática de la azobilirrubina producida es proporcional a la CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 2 de 11
3 concentración de bilirrubina total y puede medirse fotométricamente 3. Características de desempeño Datos del fabricante Precisión Repetibilidad Concentración Desviación estándar CV Nivel mg/dl mg/dl 2.1% Nivel mg/dl 0.02 mg/dl 0.6% Total / Intermedia Concentración Desviación estándar CV Nivel mg/dl mg/dl 2.1% Nivel mg/dl 0.02 mg/dl 0.8% Intervalo de medición (linealidad) a 38.0 mg/dl Recuperación +/- 10% para muestras > 1.99 mg/dl Diagnomol Refiérase al reporte de verificación de métodos (FR-BQ-04). 4. Tipo de muestra. Suero 5. Preparación del paciente, indicaciones generales. Ayuno mínimo de 8 horas. 6. Tipo de contenedor y aditivos Suero: recolectar la muestra en tubo tapón rojo o tubo tapón dorado (gel separador) 7. Equipo y reactivos requeridos. Reactivos Soluciones de trabajo R1 Acido sulfámico (H3NO3S): 110 mmol/l; tampón de acetato sódico (C2H3NaO2): 85 mmol/l; agente tensioactivo; disolvente R2 Ion diazonio: 3 mmol/l; HCl: 100 mmol/l R1 está en la posición B y R2 está en la posición C. CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 3 de 11
4 Equipo Modular Cobas 6000: Modulo C501 con NS: Controles ambientales y de seguridad El instrumento de medición se opera entre 30% y 85% de humedad y entre 18 y 32ºC (FR- AC-21). Para controlar la temperatura, nuestro laboratorio cuenta con equipos de aire acondicionado. El personal sigue los lineamientos indicado en el Manual de Bioseguridad 9. Procedimientos de calibración, trazabilidad metrológica. Calibrador f.a.s., emplear agua desioniazada como calibrador cero, se trata de una calibración de regresión lineal que se recomienda realizarla por duplicado. Calibradores: S1: H2O S2: C.f.a.s. Modo de Calibración: Lineal. Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente al método Doumas. Refiérase a la cadena de trazabilidad correspondiente La calibración de pruebas se deberá definir de acuerdo a los siguientes criterios: 1.- Expiración de acuerdo a tiempos establecidos por proveedor. 2.- Cambio de lote. 3.- Como recurso al C.C.I. 4.- Después de realizado un mantenimiento preventivo. 10. Pasos del procedimiento. Se realiza el encendido automático del equipo (programado), se procede a realizar el registro de mantenimiento diario y semanal del analizador cobas 6000, de acuerdo a lo requerido. Se realiza una revisión en LIS de lo que se tiene de carga de trabajo, se verifica que prueba requiere de calibración para realizarla, se proceder a montar el control de calidad interno de las pruebas, si es necesario se realiza un reproceso de controles de acuerdo a los criterios de aceptación del C.C.I. Una vez cumplido con el C.C.I, se procede con el corrimiento de pruebas de acuerdo a lo requerido en LIS. La programación del análisis de las muestras en el equipo, se lleva a cabo conforme a lo indicado en el manual de usuario del instrumento. CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 4 de 11
5 De acuerdo a los criterios del Químico o Gerente responsable del área, se determina si alguna prueba requiere un reproceso, de lo contrario se procede a la validación en LIS y la generación del resultado en formato PDF. Para su posterior liberación de resultado a cliente por parte del área de envió de resultados. 11. Procedimientos de control de calidad. Control de Calidad Interno Material: Precinorm (PNU) y Precipath (PPU) y/o Precicontrol clinchem (multi 1) y Precicontrol clinchem (multi 2). Catálogo: (PNU) y (PPU) y/o (multi 1), (multi 2). Presentación: 4 x 5 ml y/o 20 x 5 ml Almacenamiento: liofilizado de 2 a 8ºC estable hasta la fecha de caducidad indicada. Una vez reconstituido, -15 a -25 ºC, estable 1 mes. Frecuencia de uso: Diaria, siempre que haya muestras de pacientes por analizar. Tamaño de la corrida analítica: 12 horas (08:00 a 20:00 horas). Ubicación dentro de la corrida analítica: al inicio y al final de la corrida. Preparación: Abrir el frasco cuidadosamente para evitar la pérdida de liofilizado y pipetear exactamente 5.0 ml de aguadesionizada. Cerrar el frasco con cuidado y disolver el contenido completamente mezclando levemente una y otra vez dentro del lapso de 30 minutos. Evitar la formación de espuma. Separar alícuotas de 300 µl y rotular (PNU) y (PPU) respectivamente. Además se debe anotar la fecha de preparación y numero de lote. Procesamiento: Se deben descongelar en el refrigerador (2 a 8ºC) y posteriormente, llevar a temperatura ambiente (15 a 25ºC) durante 15 minutos antes de su uso. Programar el análisis del material de control en el instrumento de medición de acuerdo a lo indicado en el manual de uso proporcionado por el fabricante. En el procedimiento de control de calidad interno y externo se describen lo relacionado con la planificación de la calidad. CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 5 de 11
6 12. Evaluación Externa de la Calidad Proveedor: PACAL Frecuencia de participación: Mensual Para mayor información, refiérase al procedimiento Control de Calidad interno y externo 13. Interferencias Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de bilirrubina total de 17 μmol/l (1.0 mg/dl). Hemólisis:5 Sin interferencias significativas hasta un índice H de 500 (concentración de hemoglobina: aproximadamente 310 μmol/l o 500 mg/dl). Lipemia (Intralipid):5 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 600. No existe una correlación satisfactoria entre el índice L (quecorresponde a la turbidez) y la concentración de triglicéridos. Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso común en concentraciones terapéuticas.6, 7 Indicán: Sin interferencias significativas por indicán hasta concentraciones de 10 mg/dl o 100 mg/l. Excepción: El ácido ascórbico a 30 mg/dl provoca resultados de bilirrubina total falsamente bajos. El fármaco Cyanokit (hidroxocobalamina) puede causar interferencias con los resultados. En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía, particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenström).8 Los resultados de muestras de pacientes con ciertos tipos de mieloma múltiple pueden mostrar una desviación positiva en la recuperación. El error sistemático y su gravedad varía de paciente a paciente y no se presenta en todos los pacientes de mieloma múltiple. Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de otros exámenes. En ciertos casos, cuando casi la totalidad de la bilirrubina que reacciona se encuentra en forma directa, el valor de la bilirrubina directa puede resultar ligeramente más elevado que el de bilirrubina total. Si es así, el resultado para la bilirrubina total debe indicarse tanto para la bilirrubina directa como para la bilirrubina total. CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 6 de 11
7 14. Principio del método para el cálculo de resultados incluyendo resultado de medición de incertidumbre de valores de la magnitud medida. Los analizadores Roche/Hitachi cobas c calculan automáticamente la concentración de analito de cada muestra. Factores de conversión: μmol/l x = mg/dl mg/dl x 10 = mg/l mg/dl x 17.1 = μmol/l Para dar seguimiento a la incertidumbre es responsabilidad de la Gerencia de Laboratorio revisarla una vez al año. 15. Intervalos de referencia biológicos o decisión clínica. Hombres hasta Mujeres hasta Niños 1 mes de edad hasta 24 μmol/l (hasta 1.4 mg/dl) 15 μmol/l (hasta 0.9 mg/dl) 17 μmol/l (hasta 1.0 mg/dl) Alto riesgo de desarrollar una hiperbilirrubinemia clínicamente significativa: Neonatos: A término y casi a término Edad del neonato: 24 horas 137* μmol/l ( 8.0* mg/dl) 48 horas 222* μmol/l ( 13.0* mg/dl) 84 horas 290* μmol/l ( 17.0* mg/dl) *percentil 95 Niveles > percentil 95: Tales niveles de hiperbilirrubinemia se consideran significativos y generalmente requieren una estrecha supervisión y posiblemente una evaluación ulterior, o incluso una intervención. 16. Intervalo reportable de resultados del examen. Intervalo de medición. 1.7 a 600 μmol/l ( mg/dl) 17. Instrucción para determinar resultado cuantitativo cuando un resultado no está dentro del intervalo de medición. Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de repetición. En este caso las muestras se diluyen 1:2. Los resultados de las muestras diluidas usando la función de repetición se multiplican automáticamente por el factor 2. CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 7 de 11
8 18. Valores de alerta o críticos. >15 mg/dl 19. Interpretación clínica del laboratorio. 1. De forma fisiológica; a) En el recién nacido en la primera semana de vida, con cifras inferiores a mg/dl. b) Durante la permanencia en grandes alturas. c) En períodos de ayuno prolongado. 2. De forma patológica: a) Por aumento en la producción de büirrubina (bilirrubina directa inferior al 20% del total): i) Procesos hemolíticos: cursan con bilirrubinemia por debajo de 10 mg/dl. Se incluyen hemoglobinopatías, déficit de enzimas eritrocitarias, CID, hemólisis autoinmune, hemoglobinuria paroxística nocturna, paludismo, etc. ii) Eritropoyesis ineficaz. iii) Transfusiones de sangre incompatible. iv) Reabsorción de grandes hematomas. b) Déficit en la captación o conjugación hepática de la bihrrubina (bilirrubina directa menor del 20% del total): i) Déficit en la captación por competición con rifampicina, algunos contrastes radiológicos, probenecid o ácido flavispídico. ii) Alteración en la conjugación: o Ictericia neonatal (ya comentada), por inmadurez del sistema de conjugación, o Síndrome de Crigler-Najjar. o Enfermedad de Gilbert^^. c) Lesión hepatocelular y colestasis intrahepática no obstructiva (bilirrubina directa 20-60%): i) Causas hepáticas: hepatitis aguda (etílica, viral, fármacos) e insuficiencia hepática aguda grave, hepatitis crónica (etílica, viral, autoinmune, fármacos), cirrosis hepática, tumores y abscesos hepáticos. ii) Insuficiencia cardíaca derecha. iii) Sepsis. iv) Colestasis benigna postoperatoria. v) Colestasis benigna recurrente idiopática y del embarazo. vi) Colestasis benigna recurrente familiar. vii) Nutrición parenteral. viii) Neoplasias: enfermedad de Hodgkin, hipernefroma no metastásico. CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 8 de 11
9 ix) Hipertiroidismo. x) Amiloidosis. xi) Protoporfiria. xii) xiii) Déficit de a, -antitripsina. Enfermedades hereditarias: enfermedad de Aagenae^*, síndrome de Zellweger^, síndrome de Dubin-Johnson^ y síndrome de Rotor. d) Colestasis intrahepática obstructiva (buirrubina directa 50-70%). i) Cirrosis büiar primaria. ii) Colangitis autoinmune. iii) Colangitis esclerosante primaria y secundaria. iv) Enfermedad de injerto contra huésped. v) Rechazo de trasplante hepático. vi) Granulomatosis y sarcoidosis. vii) Algunos tumores intrahepáticos: colangiocarcinoma, algunos hepatocarcinomas y metástasis hepáticas. Otras lesiones ocupacionales no tumorales. viii) Enfermedad de Caroli. ix) Fibrosis quística. x) Síndrome de AlagUle. xi) Síndrome del aceite tóxico. xii) PFIC (colestasis intrahepática familiar progresiva) tipo I, II y IIP e) Colestasis extrahepática (bilirrubina directa superior a 60%). i) Litiasis bihar. ii) Pancreatitis aguda y crónica, seudoquiste pancreático. iii) Estenosis biliar posquirúrgica. iv) Malformaciones congénitas: atresia biliar, quistes coledocianos, perforación espontánea de la vía bihar, tapones mucosos de bilis. v) Parasitosis (hidatidosis, fasciolasis, ascaridiasis). vi) Candidiasis. vii) viii) Hemobiha. Enfermedades duodenales {ulcus, infección diverticular, enfermedad de Crohn, enteritis eosinofílica). ix) Tumores benignos de la vía biliar principal. x) Tumorales: carcinoma de cabeza de páncreas, colangiocarcinoma, ampuloma, carcinoma de vesícula biliar, compresión o infiltración por tumor o adenopatías. Hipobilirrubinemia Tiene escaso interés clínico y puede observarse en las anemias aplásicas o ferropénicas intensas. CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 9 de 11
10 20. Fuentes potenciales de variación. No aplica. 21. Referencias. 1.-Manual del Operador cobas 6000 analyzer series V Inserto, Bilirrubina total, Bilirrubin total Gen.3, , V 1, Español. 3. Campuzano Maya German, Valores Críticos en el Laboratorio Clínico: de la Teoría a la práctica. Medicina y Laboratorio 2011; 17: Control de cambios y vigencia. Versión Fecha Motivo del cambio Realizado por de Febrero de de Febrero de Elaboración del procedimiento. Revisión del procedimiento. QC Alejandro Dauzon Movis T.L.C. Víctor Hugo García Jiménez Q. Ana Rosa Jiménez CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 10 de 11
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