ANALISIS LABORATORIAL DE SALMONELLA

Transcripción

1 ANALISIS LABORATORIAL DE SALMONELLA Teresa Nuez Polo Departamento de microbiología UASA Conselleria Agricultura,Medio Ambiente, Cambio Climáticoy Desarrollo Rural 17/02/2016

2 PROGRAMAS NACIONALES DE SALMONELLA 2016 LABORATORIO NACIONAL DE REFERENCIA EN ALGETE LABORATORIOS OFICIALES Y DE AUTOCONTROL ACREDITADOS POR ENAC (2002) LABORATORIOS OFICIALES:AISLAMIENTO DE SALMONELLA SPP SEGÚN NORMA UNE-EN ISO 6579:2003/A1:2007 E IDENTIFICACIÓN MEDIANTE SEROTIPADO DE COLONIAS (ESQUEMA DE KAUFFMAN WHITE) MATRIZ HECES DE ANIMALES, SOPORTES QUE LAS CONTENGAN Y MUESTRAS AMBIENTALES DE LA ETAPA DE LA PRODUCCIÓN PRIMARIA DISTINTAS MUESTRAS A LO LARGO DE LA VIDA PRODUCTIVA DEL ANIMAL AUTOCONTROLES Y MUESTRAS OFICIALES MUESTRAS: VISCERAS POLLITO DE UN DIA,FONDOS DE CAJA,MECONIO,CALZAS,HECES,POLVO,AGUA, PIENSO. ANIMALES VIVOS PARA DESCARTAR ANTIMICROBIANOS

3 TAXONOMIA DEL GENERO SALMONELLA EL GENERO SALMONELLA SE DIVIDE EN DOS ESPECIES : S enterica subespecies: Símbolo Nº serovares enterica I 1478 salamae II 498 arizonae III a 94 diarizonae III b 327 houtenae IV 71 indica VI 12 S bongori V 21

4 EN FUNCIÓN DE SUS CARACTERÍSTICAS ANTIGÉNICAS EXISTEN 2501 SEROTÍPOS DISTINTOS LOS SEROTÍPOS CONTROLADOS EN LOS PPNN SON: REPROD» S. ENTERITIDIS» S. TYPHIMURIUM» S. TYPHIMURIUM MONOFASICA» S. INFANTIS» S. VIRCHOW» S. HADAR PONED. POLLOS PAVOS

5 TOMA DE MUESTRAS SVO TOMA DE MUESTRAS LABORATORIO OFICIAL UASA AUTOCONTROLES LABORATORIOS AUTORIZADOS CECAV

6 **MATERIAL ESTERIL**

7 TIPO DE MUESTRAS: CALZAS

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14 REFRIGERACION RECEPCION NO >96 H DESDE TOMA DE MUESTRA

15 1.PREENRIQUECIMIENTO EN MEDIO LIQUIDO NO SELECTIVO :agua de peptona Etapas del análisis Norma ISO 6579 ANEXO D 37ºC/18HORAS

16 2.ENRIQUECIMIENTO EN MEDIO SEMISOLIDO SELECTIVOS 41,5+/-1ºC/2(24H)

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18 3,AISLAMIENTO DIFERENCIAL SOBRE MEDIO SÓLIDO SELECTIVO XLD Y OTRO 37ºC/24 HORAS

19 AISLAMIENTO EN AGAR NUTRIIVO 24HORAS

20 4.CONFIRMACIÓN BIOQUÍMICA DE COLONIAS SOSPECHOSAS GENERO SALMONELLA

21 5.CONFIRMACIÓN SEROLÓGICA DE COLONIAS SOSPECHOSAS /SEROTIPADO ESQUEMA DE KAUFFMANN-WHITE Para describir los serotípos de Salmonella se ha diseñado una fórmula antigénica que consta de tres partes, que expresan por orden el antigeno somático, el antigeno flagelar de fase 1 y el antigeno flagelar de fase 2 (O: H1:H2). fórmula antigénica del serotipo Virchow 6, 7 : r : 1, 2 Antigenos Antigenos Antigenos somáticos flagelares flagelares fase 1 fase

22 5.CONFIRMACIÓN SEROLÓGICA DE COLONIAS SOSPECHOSAS /SEROTIPADO

23 EN FUNCIÓN DE SUS CARACTERÍSTICAS ANTIGÉNICAS LOS SEROTÍPOS MÁS IMPORTANTES PARA NOSOTROS SON SON: S.ent. subesp. ent.serot. Enteritidis 1,9,12:g,m: S.ent. subesp. ent.serot. Typhimurium 1,4,[ 5 ],12:i:1,2 S.ent. subesp. ent.serot. Typhimurium monofasica1,4,[ 5 ],12:i: S.enterica subespecie enterica.serotipo Infantis 6,7,14,: r : 1,5 S.enterica subespecie enterica.serotipo Virchow 6,7:r:1,2 S.enterica subespecie enterica.serotipo Hadar 6,8 : z10: e,n,x

24 LUNES AGUA DE PEPTONA +HECES ISO 6579:2002 Amd 1:2007 MARTES 0, 1 ml. MSRV Incubación 37ºC+/-1ºC 18H.+/-2H incub. 41,5ºc+/-1ºc 2 X (24h.+/-3h) JUEVES MSRV _ MSRV + INCUBACIÓN 37ºC+/-1ºC(24H.+/-3H) AUSENCIA XLT4 XLD INCUBACIÓN 37ºC+/-1ºC(24H.+/-3H) VIERNES AUSENCIA XLD _ XLT4 - XLT4 + XLD + INCUBACIÓN 37ºC+/-1ºC(24H.+/-3H) SABADO 1 COLONIA SI ES (-) SE ESTUDIAN LAS OTRAS 4 COLONIAS AISLADAS AN LUNES AUSENCIA TIRA API MARTES SALMONELLA SPP

25 LUNES AGUA DE PEPTONA + PIENSOS ISO 6579:2002 MARTES INCUBACIÓN 37ºC+/-1ºC(24H.+/-3H) 1ml. Incubación 37ºC+/-1ºC 18H.+/-2H 0,1ml. INCUBACIÓN 41,5ºC+/-1ºC(24H.+/-3H) MKTTn RVS MIERCOLES XLD XLT4 XLD XLT4 INCUBACIÓN 37ºC+/-1ºC(24H.+/-3H) JUEVES AUSENCIA XLD _ XLT4 _ XLD + XLT4 + INCUBACIÓN 37ºC+/-1ºC(24H.+/-3H) VIERNES SABADO LUNES AUSENCIA 1 COLONIA SI ES (-) SE ESTUDIAN LAS OTRAS 4 COLONIAS AISLADAS AN TIRA API SALMONELLA SPP INCUBACIÓN 37ºC+/-1ºC(24H.+/-3H)

26 DIAGNOSTICO DIFERENCIAL CEPA VACUNAL CEPA DE CAMPO VACUNA DIVA VACUNA AVIPRO SALM LOHMAN VACE VACT CEPA CAMPO RIFAMPICINA RESISTENTE RESISTENTE SENSIBLE ESTREPTOMICINA RESISTENTE SENSIBLE SENSIBLE ACIDO NALIDIXICO SENSIBLE RESISTENTE SENSIBLE ERITROMICINA SENSIBLE SENSIBLE RESISTENTE VACUNA GALLIVAC MERIAL MEDIO A MEDIO B( HISTIDINA Y ADENINA ) CEPA DE CAMPO CRECIMIENTO CRECIMIENTO CEPA VACUNAL NO CRECIMIENTO CRECIMIENTO

27 RESULTADOS EN CASO DE POSITIVIDAD SE COMUNICA A SERVICIOS CENTRALES LOS RESULTADOS OBTENIDOS SE GRABAN EN LABORATORIO EN LOS PROGRAMAS DEL MINISTERIO

28 GRACIAS