Kit de detección de Salmonella

Transcripción

1 Kit de detección de Salmonella Nuevo método para una detección cuantitativa de Salmonella Sergio Martínez Montequín

2 Emprendedores

3 Enfocados a: Desarrollar tecnologías y productos para seguridad agroalimentaria y diagnóstico clínico en un entorno global The next leader in easy, fast, reliable and cost effective detection kits

4 Estrategia Seguridad alimentaria Clínica Diagnóstico

5 Facilidad de uso Agrifood Salmonella Campylobacter Plataforma Multipatógenos Clínica UCI Patógenos y resistencia a Antibióticos Enfermedades Infecciosas Diagnóstico Alérgenos Celíacos, Diabetes, Embarazo, Desarrollo de Fármacos

6 Valor de mercado Valor de mercado Seguridad alimentaria Clínica Diagnóstico Desarrollo

7 Plataforma tecnológica Basada en serigrafía Reducido coste y alto throughput Versátil

8 Plataforma tecnológica Detección electroquímica Fácilmente integrable y miniaturizable Lector compacto

9 Serigrafía, elementos Sustrato Máscara Tinta

10 Serigrafía

11 Serigrafía

12 Construcción dispositivo Cubierta Conexiones Microcanal

13 Ventaja diferencial El material impreso es a la vez el elemento estructural y de detección Control de la fluídica vía serigrafía Electrode

14 Modificación del dispositivo Modificación del dispositivo con un elemento biológico de amplificación (EBA) Señal 4000 EBA EBA EBA EBA 2000 Electrode 0 Con EBA Sin EBA

15 Detección de patógenos Muestra inicial Inmuno- Partícula paramagnética Inmunoseparación Separación inmunomagnética Carga patogénica aislada Inmovilización y detección electroquímica Carga patogénica Patógeno Sustrato Conjugación Inmunopartícula Patógeno Anticuerpo Partículas paramagnéticas Electrodo Producto e -

16 Detección de patógenos Ventajas: No requiere marca, un paso menos que ELISA y similares Preconcentración en superficie, LOD menor Señal proporcional a la cantidad de enzima proporcional a la cantidad de patógeno Cuantitativo

17 Salmonella Enterobacteria zoonótica Interés en seguridad alimentaria

18 Salmonella: Mercado Elevado crecimiento Políticas de autocontrol Incremento de la legislación España, 43 M, % 11% 5% 8% 1% 4% 4% 35% Pienso Mataderos pollos Mataderos cerdos Producción de huevos Granjas avícolas Alimentos procesados Leche y productos lácteos Frutas y verduras

19 Product development Validación /Certificación Ritos tecnológicos: IMS, dispositivo serigráfico 12 months Requisitos usuario final Pre-enriquecimiento para distintos tipos de muestra imicroq Basic Tech: PCT/IB2009/

20 Protocolo Homogeneización de la muestra Preenriquecimiento en medio selectivo, <14 horas Separación de carga patogénica con IMS anti-salmonella (1/2 hora) Llenado de microcanal Reacción enzimática (1/2 hora) Lectura de resultado

21 Homogeneización Sólidos: Stomacher Líquidos: Analizar directamente

22 Pre-enriquecimiento Necesario para aumentar el nivel de Salmonella en el caldo. Selectivo, para evitar propagación de flora competitiva Se está formulando en la actualidad específicamente para cada tipo de muestra

23 Inmunoseparación magnética 30 min

24 Inmovilización Lisante, sustratos enzimáticos 5 min

25 Detección Lisante Se añade un material lisante y los sustratos enzimáticos en el canal, liberándose la fosfatasa alcalina EBA Electrodo 15 min

26 Detección One of the molecules released is Alkaline Phosphatase () Given the very low volume of the microchannel and proximity of cells to the electrode, gets accumulated near the surface EBA Electrodo 15 min

27 Detección The presence in the media of two enzymatic substrates and triggers a electrochemical cascade reaction that generates a discernable signal Sustrato Prd EBA Red e- Prd Electrodo e - 15 min

28 ISO:6579 Annex D Etapas de incubación Lunes Recepción Incubación Peptona Martes Incubación MSRV Miércoles Negativo Positivo, transferir Incubar otras 24 h Incubar en Brilliant Green Incubar en XLD Jueves Negativo Muestra negativa Positivo, transferir Muestra presunta positiva Viernes Incubar en Brilliant Green Muestra presunta positiva Incubar en XLD

29 Vidas SLM Via simple o Easy Lunes Martes Miércoles Incubación BPW horas Incubación RVS 6-8 horas Incubación Caldo M horas Recepción Heat + Vidas 60 minutos Incubación BPW horas Incubación Xpress horas Muestra negativa Muestra presunta positiva Resultados en horas Coste del equipo:

30 IMICROQ Muestra negativa Lunes Recepción Incubación BPW <14 horas IMS + Electroqª 60 mins Muestra positiva CUANTIFICADA Martes Resultados en <15 horas Coste del equipo:

31 Análisis diferencial Tiempo, hr LOD, ufc/25 grs Precio, /analisis Infrastructure ISO 6579: < High ELISA VIDAS >25k IMICROQ < 500

32 Análisis Cuantitativo Contaminación de Salmonella en distintos lotes con Método actual: Contamination cruzada Contaminación de Salmonella en distintos lotes con Método CUANTITATIVO: Se procesan los lotes según su carga

33 Sensibilidad Tiempo de adsorción Concentración

34 Inclusividad de la separación Los 5 serotipos de interés detectados Enteritidis, Hadar, Infantis, Typhimurium, Virchow Salmonella serotipo CFU Recovery % Typhimurium % Enteritidis % Hadar % Infantis % Virchow %

35 Selectividad de la separación Reactividad cruzada con otras especies Especie CFU Reactividad cruzada Citrobacter spp % Escherichia coli % Proteus spp % Shigella spp % Enterococcus faecalis %

36 Lector Lector portátil bajo costo <300 Uso sencillo: Colocar dispositivo Muestra introducida por capilaridad Programa automático Calibración interna. Resultado en UFC/ml Lector multimuestra (8 muestras indep.)

37 Otros kits Campylobacter Lysteria Legionella Chip multianalito

38 Equipo humano Carlos Arias: Ingeniero Químico, MSc. Nanoscience. 20 años en Desarrollo de Negocio, Administración y Gerencia Gerente, Administración y Estrategia de negocio Ioanis Katakis: Dr. Ingeniería Química. Profesor Titular, más de 20 años en I+D+I en biosensores Nuevos productos y Estrategia de negocio Viviana Duarte: Dr en biosensores, MBA en URV. Responsable de Diseminación de Resultados en el único Proyecto EU IP de URV, Financiación de I+D (EU, España) Pablo Lozano: Dr en Electroquímica. Director de diversos Proyectos (EU & PN) en ATIC. Más de diez años de experiencia en I+D+i Desarrollo de Productos Diego Bejarano: Ingeniero Químico. MSc. Nanoscience. Encargado de producción en DINAMIC (ISO 13845). Diez años de experiencia en I+D+i Producción y estrategia Técnica

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