Aplicación de metodologías tradicionales y alternativas en el diagnóstico oficial de E. coli O157 H7 para procesos de exportación en Chile

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1 Aplicación de metodologías tradicionales y alternativas en el diagnóstico oficial de E. coli O157 H7 para procesos de exportación en Chile Subtitulo de la presentación en una línea IRMA ACEVEDO GONZÁLEZ MÉDICO VETERINARIO UNIDAD DE BACTERIOLOGÍA PECUARIA DEPTO. LABORATORIOS LO AGUIRRE S.A.G. - CHILE

2 Inocuidad en Chile Agencia Chilena para la Calidad e Inocuidad Alimentaria

3 Entrenamiento Microbiológico FSIS/SAG en Técnicas Diagnósticas para Salmonella y Escherichia coli Genérico Victor Cook Tharon Hoephner Santiago, 3 al 7 de Marzo 2003 Participan 20 profesionales de la red de laboratorios SAG y privados en vías de habilitarse.

4 Salmonella spp

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6 Escherichia coli O157:H7

7 Escherichia coli O157:H7

8 Escherichia coli O157:H7 Instructivo Basado en U.S.D.A F.S.I.S. MLG Etapa de detección Muestras de 25 g Caldo E.C.Modificado con novobiocina. Reveal Neogen AOAC Official Method Procedimiento 20 horas. Sensibilidad 99.9 (FSIS 98%) Especificidad 99.4 (FSIS 90%) Promedio de falsos positivos 1% (FSIS 2%) Promedio de falsos negativos 1% (FSIS 10%)

9 Escherichia coli O157:H7. 2. Etapa de concentración para aislamiento. Perlas IMS Dynal o ICE Biomerieux. Medios altamente selectivos. 3. Etapa confirmación bioquímica y serológica. Sistemas de identificación API 20E Biomerieux. Aglutinación en latex E. coli RIM Remel. 4. Etapa Determinación presencia de Shigatoxinas. Premier EHEC Meridian Diagnostic. Diferencias Cepa Control :Cepa FSIS Fluorescente EC vs Cepa I.S.P. Agar selectivo: Rainbow Agar O157 vs Fluorocult. Inclusión ICE como alternativa a la Separación Inmunomagnética en columnas paramagnéticas.

10 Escherichia coli O157:H7 Criterios de Equivalencia Compliance guidelines for establishments on the FSIS Microbiological testing program and other verification activities for Escherichia coli O157 H7. April,2004 Unidad analítica de al menos 325 g. analizadas como submuestras individuales de hasta 75 g. Sensibilidad igual o mayor al Método F.S.I.S. a. Confirmación con metodos de cultivo que incluyen el uso de separación inmunomagnética o b. Los resultados positivos obtenidos con métodos screening por AOAC Internacional u otra organización científica reconocida internacionalmente podría considerarse equivalente al método de FSIS. Método científicamente validado, aprobado o adoptado por una organización internacional. Solitud de equivalencia presentada en 2008 y aprobada en 2009.

11

12

13 Escherichia coli O157:H7 1. Etapa de detección. Muestra de 325 g, 5 submuestras de 65g Protocolos validados AFNOR (Nº 12/8-07/00) del Instructivo VIDAS E. coli O157 (VIDAS ECO). CaldoTripticasa Soya modificado con novobiocina 6 o 7h /41,5 o C±1 o C. Caldo CT-MAC 18h±1h/35-37 o C 2. Etapa de concentración para aislamiento. VIDAS ICE Biomerieux. Agar O157:H7 ID (BioMérieux ref y ) o un medio selectivo equivalente. 3. Etapa confirmación bioquímica y serológica. Sistemas de identificación API 20E Biomerieux. Aglutinación en latex E. coli RIM Remel. 4. Etapa Determinación presencia de Shigatoxinas/genes Shigatoxinas. PCR multiplex en Instituto de Salud Pública.

14

15 Escherichia coli O157 H7

16 Metodologías Incorporadas al Plan de Reducción de Patógenos

17 Metodologías Incorporadas al Plan de Reducción de Patógenos Método Screening Assurance GDS Salmonella Validación AFNOR TRA 02/12-01/09

18

19 Ultimas Metodologías Aceptadas como Equivalentes 9 de Marzo 2011 VIDAS UP E. coli Incluyendo H7 (VIDAS ECPT) Validación AFNOR Certificado BIO 12/25-05/09 Acorde a Norma ISO :2003. Método de referencia EN 16654(2001):Horizontal method for the detection of Escherichia coli O157 VIDAS Listeria monocytogenes Xpress( VIDAS LMX) Validación AFNOR Certificado BIO 12/27-02/10 Acorde a Norma ISO :2003. Método de referencia EN (1997) incluye Amendment A(2004):Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes. Part 1 :Detection Method El FSIS informa que se ha completado la revisión conducente a la equivalencia de los métodos screening mencionados, para ser utilizados en alimentos listos para el consumo enviados desde Chile.

20 Validación Interna e Implementación Método Screening VIDAS EASY SLM Protocolo de acuerdo a la Validación AFNOR BIO 12/16-09/05. Metodología de referencia utilizada ISO 6579:2002 Matrices: Ingredientes de importación y alimentos completas para el consumo animal. Harinas de visceras Harinas de carne y hueso * Harinas de plumas y sangre Alimentos terminados para aves Se procesaron 317 muestras,261 muestras negativas y 56 muestras positivas a Salmonella spp. Para el análisis se consideraron 150 resultados,99 análisis negativos y 51 positivos dando cumplimiento a lo indicado en la Norma ISO para los cálculos de exactitud, sensibilidad y especificidad relativa, de contar con un total de resultados negativos que no supere el doble de los resultados positivos. La exactitud, sensibilidad y especificidad relativa obtenidas fue 100%. Se adopta la nueva metodología a partir del 10 de Julio de 2011.* Este estudio fue realizado por la Dra. Amelia Morales con la colaboración de Nayaret Sepúlveda.

21 Próximos Desafíos Shiga Toxin-Producing Escherichia coli in Certain Raw Beef Products (Federal Register) El Food Safety and Inspection Service (FSIS) del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos (USDA) ha publicado en el Federal Register una determinación final con solicitud de comentarios referente a la adopción de nuevas medidas para combatir el E.Coli. En concreto, se considerarán como adulterantes a 6 serogrupos adicionales de E.Coli en carne bovina cruda. La agencia recibirá comentarios del público hasta el 21 de noviembre de 2011.

22 Otras serovariedades de Escherichia coli productoras de shigatoxinas FSIS Guidance for evaluating Test Kit Performance.

23

24 Gracias.

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