Shigella spp Salmonella spp STEC. Bioq. Esp. María Emilia Suárez Laboratorio Central de la Provincia- Córdoba

Transcripción

1 Shigella spp Salmonella spp STEC Bioq. Esp. María Emilia Suárez Laboratorio Central de la Provincia- Córdoba

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3 GÉNERO SHIGELLA Gram negativos, anaerobios facultativos, no esporulados, no móviles de la familia ENTEROBACTERIACEAE, no produce gas a partir de carbohidratos. 4 especies: Shigella dysenteriae, serogrupo A: 13 serotipos.(*) Shigella flexneri, serogrupo B: 8 serotipos. (*) Shigella boydii, serogrupo C: 20 serotipos. (*) Shigella sonnei, serogrupo D: 1 serotipo. (*) La cantidad de serotipos por grupo cambia cuando se definen nuevos serotipos. (*) En el marco de un grupo de trabajo a nivel internacional se está consensuado la nomenclatura de la nueva variante emergente de S. flexneri Manual de procedimientos.identificación y caracterización de Patógenos asociados a enfermedad diarreica aguda.inei- ANLIS carlos G. Malbrán 2013

4 Salmonella spp Salmonella Salmonella enterica Salmonella enterica subesp enterica (> 2400 serovars) Salmonella enterica subesp salamae Salmonella enterica subesp arizonae Salmonella enterica subesp diarizonae Salmonella enterica subesp houtenae Salmonella enterica subesp indica Salmonella bongori

5 STEC

6 Manual de procedimientos.identificación y caracterización de Patógenos asociados a enfermedad diarreica aguda.inei- ANLIS carlos G. Malbrán 2013

7 Detección de Shigella spp Salmonella spp STEC Coprocultivo

8 materia fecal Examen macroscópico ( consistencia/ aspecto) Examen microscópico Observación en fresco /azul metileno: respuesta inflamatoria Fucsina diluida

9 Siembra de la muestra Agar Mac Conkey/ Agar Levine Agar XLD/ Agar SS Shigella spp. (NF) Salmonella spp (NF) Caldo selenito Agar Mac Conkey Sorbitol Shigella spp. (NF) E. coli O157:H7 (NF) Otras E.coli (F)

10 MAC / XLD / SS: colonias compatibles con Salmonella spp / Shigella spp Pruebas mínimas de identificación bioquímica TSI / CIT / SIM / UREA / LIA / MIO / FENIL / ONPG Serología

11 Shigella sp en Mac Conkey TSI

12 Reacciones Bioquímicas de Shigella spp Especie D- Manitol ONPG Ornitina decarboxilasa S.dysenteriae S.flexneri S.sonnei S.boydii Extraido de: Farmer III, J.J., Boatwright, K.D., Janda, J.M. (2007) Enterobacteriaceae: Introduction and identification. En Manual of Clinical Microbiology. Murray, P., Baron, E.J., Jorgensen, J.H., Landry, M.L. and Pfaller, M.A. (ed.). 9th Edition. American Society for Microbiology. Washington D.C. Manual de procedimientos.identificación y caracterización de Patógenos asociados a enfermedad diarreica aguda.inei- ANLIS carlos G. Malbrán 2013

13 Salmonella spp en SS Salmonella spp en XLD

14 Foto: MES

15 STEC

16 No Fermentadora de Sorbitol Fermentadora de Sorbitol Foto: MES

17 E.coli O157:H7 Foto: MES

18 Foto: MES

19 E.coli.. Foto: MES

20 Detección de Enterohemolisina (EHEC-Hly) Placa AGRSL (placa control) Control negativo) Placa AGRL (placa de ensayo) Foto: MES

21 Diagnóstico de infección por STEC (Métodos rápidos) Métodos inmunocromatográficos Materia Fecal Foto: MES Detección de Ag O157 Sensibilidad: 82% Especificidad: 99% Reacción cruzada con: Salmonella Hilversum, E.coli O157:H38 y E.coli O157:H1

22 Detección de Toxina (ELISA) Límite de detección: 7 pg/well Stx-1 15 pg/well Stx-2 (+) (-) (T-) (T+) Foto: MES Sensibilidad: 79% Especificidad: 98%

23 Procesamiento de muestras Técnicas moleculares

24 PCR multiplex stx1/stx2/rfbo157 H2O EDL933 stx2 O157 stx1 346 pb 259 pb 130 pb Paton A, Paton J. Clin. Microbiol. 1998; 36: Foto: MES

25 PCR multiplex stx1/stx2/rfbo157 H2O EDL933 stx2 O157 stx1 346 pb 259 pb 130 pb Foto: MES Paton A, Paton J. Clin. Microbiol. 1998; 36:

26 PCR multiplex stx1/stx2/rfbo157 H2O EDL pb stx2 130 pb stx1 259 pb O157 Foto: MES Paton A, Paton J. Clin. Microbiol. 1998; 36:

27 PCR factor eae H2O EDL pb gen eae H, Bohm H, Schmidt H, Gunzer F, Aleksic S, Heesemann. Clin. Microbiol.1993; 31: Foto: MES

28 PCR factor eae H2O EDL pb gen eae H, Bohm H, Schmidt H, Gunzer F, Aleksic S, Heesemann. Clin. Microbiol.1993; 31: Foto: MES

29 PCR Enterohemolisina (ehxa) H2O O157NM pb gen hlya Karch H. Infect. Immun. 1995; 63: Foto: MES

30 Comparación de pruebas genotípicas de E.coli O104 y O157 GEN PATOTIPO E.coli O104 E.coli O157 aggr EAggEC + - east 1 Múltiple - - st-b ETEC - - lt-a ETEC - - a-hlya Múltiple - - ipah EIEC - - E-hlyA STEC/EHEC - + eae STEC/EHEC - + stx1 STEC/EHEC - +/- stx2 STEC/EHEC + +/- stx2f STEC/EHEC - - st-h ETEC-humana - - st-p ETEC-animal - - Manual de procedimientos.identificación y caracterización de Patógenos asociados a enfermedad diarreica aguda.inei- ANLIS carlos G. Malbrán 2013

31 Shigella spp. Laboratorio Central de la Provincia N= 115 Shigella boydii n= 2 Shigella spp n= 4 Shigella sonnei n= 19 OSh-B OSh-D OSh-C Shigella spp Shigella flexneri n= 90 OSh-B 78,3% OSh-D 16.5% OSh-C 1,7% Shigella spp 3,5%

32 Shigella OShB (serotipos). Laboratorio Central de la Provincia N= 90 S.flexneri AA479 n= 11 S.flexneri 1 n= 1 S.f lexneri 1 S.f lexneri 2 AA479 S.flexneri 2 n= 78 S.flexneri 1 1,1% S.flexneri 2 86,7% AA479 12,2%

33 Serovariedades de Salmonella Laboratorio Central de la Provincia N= 127 Otras n= 33 S.Enteritidis n= 8 S.Infantis n=3 S. Enter itidis S. Typhimur ium S. Or anienbur g S. Newpor t S. Inf antis Otr as S.Newport n=12 S.Oranienburg n=4 S.Typhimurium n=66 S. Enteritidis 6,5% S. Typhimurium 52,0% S. Oranienburg 3,1% S. Newport 10.0% S. Infantis 2,4% Otras 26,0%

34 Otras serovariedades de Salmonella Laboratorio Central de la Provincia N= 33 S. Chester 1 S. Derby 2 S. Give 2 S. Agona 6 S.Corvalis 4 S. Javiana 2 S. Adelaide 1 S. Branderburg 3 S. Anatun 1 S. Heidelberg 1 S. spp 10

35 Muestras con aislamientos de STEC Laboratorio Central de la Provincia-2014 n=20 E.coli O157 n=12 E.coli no O157 n=8 E.coli O145 7 (87.5%) E.coli O55 1 (12.5%) E.coli no O157 E.coli O157

36 DETECCIÓN DE Escherichia coli PRODUCTORA DE TOXINA SHIGA EN CONTACTOS DE PACIENTES CON SÍNDROME URÉMICO HEMOLÍTICO Autores: SUÁREZ, M.; CASTRO, G.; GIAMMARILI, M.; RODRÍGUEZ, E.; SOSA, M.; ESQUIVEL, P.; FRÍAS, M.; BARBÁS, G.; CUDOLÁ, A Institución: LABORATORIO CENTRAL DE LA PROVINCIA- DIRECCIÓN DE EPIDEMIOLOGÍA. MINISTERIO DE SALUD DE LA PROVINCIA De enero de 2012 a diciembre de 2013 se estudiaron en el laboratorio 212 MF de contactos asintomáticos de 55 casos remitidas por la Dirección de Epidemiología acompañadas de la ficha clínico-epidemiológica. Se sembraron en agar Mac Conkey Sorbitol y de la zona de confluencia se realizó la extracción de ácidos nucleicos por métodos comerciales. A partir del extracto se realizó una Multiplex-PCR, siguiendo el protocolo recomendado por el Centro Nacional de Referencia ANLIS-Malbrán (CNR-ANLIS), que detecta los genes: rfb (LPS O157), stx1 y stx2 (subunidad B y A de las toxinas respectivamente). En los barridos positivos por PCR, se buscaron colonias sospechosas y aquellas bioquímicamente compatibles con E.coli se sometieron nuevamente a la PCR. Sobre estas colonias se realizaron otras dos PCR para los genes eae (intimina) y hlya (enterohemolisina). En las cepas con resultado positivo por PCR se determinó el serogrupo con antisueros poli y monovalentes provistos por el CNR-ANLIS. El serotipo fue determinado por el CNR. De los 212 contactos estudiados, 32 resultaron positivos pudiendo aislar E.coli en 13: 61% O157 H7 (stx2, eae, hlya), 8% O55 (stx2, eae, hlya), 8% STEC H2 (stx1, eae, hlya), 8% O145 (stx2, eae, hlya) y 15% O103H2 (stx1, eae, hlya). En relación al vínculo, 63% de los contactos positivos por PCR eran convivientes y 37% no convivientes. El 53% eran mayores de 15 años y de éstos, el 71% cuidaban al caso y preparaban mamaderas. El 66% de los contactos positivos eran de Córdoba capital, 19% del interior de la provincia, 3% de Santiago del Estero y en el 12% no se consignó el dato. El serotipo predominante fue E.coli O157 H7 pero hay otros serogrupos y serotipos en nuestra zona, demostrando la importancia de implementar técnicas moleculares para detectar STEC aún en personas asintomáticas. Se encontró relación entre la edad del contacto y las tareas que desempeña en relación al caso, lo cual demuestra la importancia de estudiar a los contactos del caso de SUH. La extensa distribución de STEC en diferentes barrios de Córdoba capital, representa un gran impacto epidemiológico-sanitario. Se deben intensificar y optimizar estrategias de vigilancia y difundir información sobre buenas prácticas de higiene y manipulación de alimentos. Publicado en JAM 2014

37 Gracias