II Curso Avanzado WHO Global Salmonella Surveillance (WHO-GSS) 1er Taller WHO-GSS / PulseNet Buenos Aires, 27 al 31 de mayo de 2008

Transcripción

1 II Curso Avanzado WHO Global Salmonella Surveillance (WHO-GSS) 1er Taller WHO-GSS / PulseNet Buenos Aires, 27 al 31 de mayo de 2008 Técnicas aplicadas al diagnóstico de la infección por Escherichia coli productor de toxina Shiga O157 y no-o de mayo de 2008 Bioq. Elizabeth Miliwebsky Servicio Fisiopatogenia Departamento Bacteriología INEI ANLIS Dr. Carlos G. Malbrán 1

2 STEC E. coli productor de toxina Shiga Serotipos O : H E. coli O157:H7 E.coli no-o157 Enfermedad severa en humanos E. coli enterohemorrágico EHEC 2

3 Vías de transmisión de STEC Medio ambiente Contaminación Fecal Animales Agua Otros alimentos Carne Leche Humano Persona a persona Humano Dosis infectiva baja, menos de 100 UFC/g de alimento 3

4 Genes involucrados en la patogénesis Bacteriófago Stx espp katp ori etpc-o po kb hlya-d LEE (35.5 kb) escrstu esccjz escvn sepq tir cest eae espadb escf espf Aparato de secreción Tipo III intimina Proteínas secretadas Locus of enterocyte effacement (LEE) 4

5 Historia natural de la infección por STEC Ingestión de STEC 3-4 días Portador asintomático Diarrea sin sangre dolor abdominal 80% 1-2 días Diarrea con sangre 90% 6-8 días 10% Resolución SUH 5

6 LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA CLINICA CASO DE SUH O DIARREA SANGUINOLENTA Aislamiento e identificación del patógeno COPROCULTIVO agar SMAC Seroagrupamiento Antisueros anti- O157 y no-o157 Prueba de detección de enterohemolisina IDENTIFICACION BIOQUÍMICA PCR-Multiple stx1/stx2/ rfbo157 RESULTADO 6

7 LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA CLINICA RESULTADO STEC POSITIVO STEC NEGATIVO Informar al médico Realizar control de excreción y control de contactos familiares e Institucionales indicados por epidemiología Enviar muestras del aislamiento, materia fecal y suero al LNR Suero Aislamiento Hisopado rectal Materia fecal Informar al médico Realizar control de contactos familiares indicados por epidemiología Enviar muestras de materia fecal y suero al LNR 7

8 DIAGNOSTICO DE Escherichia coli PRODUCTOR DE TOXINA SHIGA (STEC) Laboratorio Nacional de Referencia 1. Aislamiento y caracterización del microorganismo -Tipificación: factores de virulencia, biotipo, serotipo, antibiotipo -Subtipificación aplicada a la Vigilancia Epidemiológica y a la investigación de brotes : PFGE, fagotipificación y genotipificación de variantes de Stx1, Stx2 y de intimina. 2. Detección de toxina Shiga libre en materia fecal -Citotoxicidad específica en células Vero 3. Detección de anticuerpos anti-stx Ensayos de neutralización de la citotoxicidad en células Vero Desarrollo de Western Blot anti-lps O157 Desarrollo de Western Blot 8

9 Instrucciones para el envío o de muestras de origen clínico para aislamiento de Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) en casos de diarrea o Síndrome S Urémico Hemolítico (SUH) COPROCULTIVO: Remitir el hisopo en medio de transporte (Stuart, Cary Blair o similar) MATERIA FECAL: Enviar aproximadamente 5 gr. en frasco estéril AISLAMIENTOS: Enviar repiques en agar blando o en tripticasa de soya SUERO: Enviar 500 µ de suero en tubo seco DATOS DEL PACIENTE: Enviar ficha de notificación OBSERVACIONES: Las muestras deben ser enviadas según las Normas de Bioseguridad que corresponden al transporte de muestras clínicas. 9

10 ALGORITMO Algoritmo para el PARA diagnóstico EL DIAGNOSTICO de STEC O157 y Y no CARACTERIZACION O157 con tamizaje por DE Escherichia coli O157 CON PCR TAMIZAJE multiplex POR PCR MULTIPLEX Materia fecal (suspensión) Separación Inmunomagnética E. coli O157 Agar MacConkey Sorbitol (SMAC) CTS SMAC 37ºC x 18 h 37ºC x 18 h CT-CTS 37ºC x 6 h 37ºC x 6 h SMAC 37ºC x 18 h Seroagrupamiento presuntivo STEC Tamizaje PCR Multiplexstx1/stx2/rfbO157 zona de confluencia y colonias sorbitol (-) PCR (-) PCR (+) Descartar Aislamiento Identificación bioquímica Fenotipo enterohemolítico Sorbitol en tubo β- glucuronidasa Biotipificación Serotipificación Sensibilidad a ATB Caracterización por PCR eae, EHEC-hlyA, flich7 Centro Nacional de Referencia Citotoxicidad especifica células Vero Subtipificación de STEC Genotipo de variantes stx Fagotipificación PFGE 10

11 Primo-cultivos Siembra directa Hisopado rectal Agar SMAC Caldo CTS Incubación a 37º por 6 hs Caldo CTS con cefixima 0,05 mg/l y telurito de potasio 2,5mg/l..... Agar SMAC... 11

12 Color Turquesa 12

13 CHROMAGAR Aislamiento y diferenciación directa de E.coli O157 por colonias coloreadas Interpretación E.coli O157 malva Otras bacterias Azul, transparentes o inhibidas 13

14 EHEC-Enterohemolisina Enterohemolisina Se visualiza la hemólisis de EHEC-Hly a las 18 hs de incubación a 37ºC Agar base triptosa con glóbulos rojos de oveja sin lavar Agar base triptosa con Cl 2 Ca y glóbulos rojos lavados de sangre desfibrinada de oveja 14

15 DETECCION DE Stx Test de inmunocromatografía Duopath Verotoxina Fundamento Test inmunocromatográfico con anticuerpos a-stx1 y a-stx2 marcados con oro. Características Zona de siembra Stx1 Stx2 Zona de reacción Zona de control Rápido Sencillo Sensible y específico 15

16 ALGORITMO Algoritmo para el PARA diagnóstico EL DIAGNOSTICO de STEC O157 y Y no CARACTERIZACION O157 con tamizaje por DE Escherichia coli O157 CON PCR TAMIZAJE multiplex POR PCR MULTIPLEX Materia fecal (suspensión) Separación Inmunomagnética E. coli O157 Agar MacConkey Sorbitol (SMAC) CTS SMAC 37ºC x 18 h 37ºC x 18 h CT-CTS 37ºC x 6 h 37ºC x 6 h SMAC 37ºC x 18 h Seroagrupamiento presuntivo STEC Tamizaje PCR Multiplexstx1/stx2/rfbO157 zona de confluencia y colonias sorbitol (-) PCR (-) PCR (+) Descartar Aislamiento Identificación bioquímica Fenotipo enterohemolítico Sorbitol en tubo β- glucuronidasa Biotipificación Serotipificación Sensibilidad a ATB Caracterización por PCR eae, EHEC-hlyA, flich7 Centro Nacional de Referencia Citotoxicidad especifica células Vero Subtipificación de STEC Genotipo de variantes stx Fagotipificación PFGE 16

17 Seroagrupamiento O157 Fundamento: los anticuerpos anti-o157 aglutinan en presencia del antígeno O157 del LPS bacteriano. Realizar test de aglutinación en SF para descartar autoaglutinación Reacciones cruzadas con: Salmonella Urbana O:30; Yersinia enterocolitica O:9; Yersinia pseudotuberculosis O:IB; Citrobacter freundii; Escherichia hermanii; Haffnia spp. y Brucella abortus 17

18 Seroagrupamiento STEC no-o157 Seleccionar colonias sospechosas Recuperarlas e incubar en un medio de cultivo Realizar seroagrupamiento presuntivo con antisueros polivalentes y monovalentes como el anti: O26, O91, O103, O111, O113, O121, O145, O174 etc. Hervir suspensión bacteriana y realizar el seroagrupamiento confirmatorio Luego de una aglutinación con un antisuero específico anti O Estudiar factores de virulencia 18

19 ALGORITMO Algoritmo para el PARA diagnóstico EL DIAGNOSTICO de STEC O157 y Y no CARACTERIZACION O157 con tamizaje por DE Escherichia coli O157 CON PCR TAMIZAJE multiplex POR PCR MULTIPLEX Materia fecal (suspensión) Separación Inmunomagnética E. coli O157 Agar MacConkey Sorbitol (SMAC) CTS SMAC 37ºC x 18 h 37ºC x 18 h CT-CTS 37ºC x 6 h 37ºC x 6 h SMAC 37ºC x 18 h Seroagrupamiento presuntivo STEC Tamizaje PCR Multiplexstx1/stx2/rfbO157 zona de confluencia y colonias sorbitol (-) PCR (-) PCR (+) Descartar Aislamiento Identificación bioquímica Fenotipo enterohemolítico Sorbitol en tubo β- glucuronidasa Biotipificación Serotipificación Sensibilidad a ATB Caracterización por PCR eae, EHEC-hlyA, flich7 Centro Nacional de Referencia Citotoxicidad especifica células Vero Subtipificación de STEC Genotipo de variantes stx Fagotipificación PFGE 19

20 Toma de muestra para realizar PCR multiplex stx1 / stx2 / rfbo157 Placa de SMAC o Cromogénico Muestra de zona de confluencia Pool de colonias no fermentadoras de sorbitol Pool de colonias fermentadoras de sorbitol SMAC Grillado 20

21 PCR Multiplex stx1 1 / stx2 2 / rfbo bp 259 bp 130 bp Leotta GA, Chinen I, Epszteyn S, Miliwebsky E, Melamed IC, Motter M, et al. Validación de una técnica de PCR multiple para la detección de Escherichia coli productor de toxina Shiga. Rev Argent Microbiol 2005; 37:

22 Resultados posibles de PCR Confluencia y pool de colonias positivas PCR de colonias individuales Confluencia positiva y pool de colonias negativas PCR seleccionando nuevas colonias Confluencia y pool de colonias negativas Muestra negativa 22

23 ALGORITMO Algoritmo para el PARA diagnóstico EL DIAGNOSTICO de STEC O157 y Y no CARACTERIZACION O157 con tamizaje por DE Escherichia coli O157 CON PCR TAMIZAJE multiplex POR PCR MULTIPLEX Materia fecal (suspensión) Separación Inmunomagnética E. coli O157 Agar MacConkey Sorbitol (SMAC) CTS SMAC 37ºC x 18 h 37ºC x 18 h CT-CTS 37ºC x 6 h 37ºC x 6 h SMAC 37ºC x 18 h Seroagrupamiento presuntivo STEC Tamizaje PCR Multiplexstx1/stx2/rfbO157 zona de confluencia y colonias sorbitol (-) PCR (-) PCR (+) Descartar Aislamiento Identificación bioquímica Fenotipo enterohemolítico Sorbitol en tubo β- glucuronidasa Biotipificación Serotipificación Sensibilidad a ATB Caracterización por PCR eae, EHEC-hlyA, flich7 Centro Nacional de Referencia Citotoxicidad especifica células Vero Subtipificación de STEC Genotipo de variantes stx Fagotipificación PFGE 23

24 Esquema de diferenciación n entre Escherichia coli y Escherichia hermanii Prueba Fermentación n de celobiosa Crecimiento en KCN Pigmento amarillo Lisina decarboxilasa E. coli - (2%)* - (3%) - (0%) + (90%) E. hermanii + (97%) + (94%) + (98%) - (6%) 24

25 Detección n del antígeno flagelar Fundamento: los anticuerpos del antisuero aglutinan con el antígeno flagelar. Estimulación n de la movilidad por 7 días en el medio de Craigie. Siembra del Craigie a TSA estría. Aglutinación n en placa o en tubo. Cepa móvil Cepa no móvil 25

26 ALGORITMO Algoritmo para el PARA diagnóstico EL DIAGNOSTICO de STEC O157 y Y no CARACTERIZACION O157 con tamizaje por DE Escherichia coli O157 CON PCR TAMIZAJE multiplex POR PCR MULTIPLEX Materia fecal (suspensión) Separación Inmunomagnética E. coli O157 Agar MacConkey Sorbitol (SMAC) CTS SMAC 37ºC x 18 h 37ºC x 18 h CT-CTS 37ºC x 6 h 37ºC x 6 h SMAC 37ºC x 18 h Seroagrupamiento presuntivo STEC Tamizaje PCR Multiplexstx1/stx2/rfbO157 zona de confluencia y colonias sorbitol (-) PCR (-) PCR (+) Descartar Aislamiento Identificación bioquímica Fenotipo enterohemolítico Sorbitol en tubo β- glucuronidasa Biotipificación Serotipificación Sensibilidad a ATB Caracterización por PCR eae, EHEC-hlyA, flich7 Centro Nacional de Referencia Citotoxicidad especifica células Vero Subtipificación de STEC Genotipo de variantes stx Fagotipificación PFGE 26

27 PCR Factor eae PRIMER SK1 SK2 SECUENCIA DEL OLIGONUCLEOTIDO (5-3 ) CCCGAATTCGGCACAAGCATAAGC CCGGATCCGTCTCGCCAGTATTCG TAMAÑO FRAGMENTO pb 864 Referencia Karch H., Bohm H., Schmidt H, Gunzer F., Aleksic S., Heesemann J. Clonal structure and pathogenicity of Shiga-like toxin-producing, sorbitol-fermenting Escherichia coli O157:H-. J. Clin. Microbiol. 1993; 31:

28 PCR PRIMER HlyA1 HlyA4 Enterohemolisina SECUENCIA DEL OLIGONUCLEOTIDO (5-3 ) GGTGCAGCAGAAAAAGTTGTAG TCTCGCCTGATAGTGTTTGGTA TAMAÑO FRAGMENTO 1551 Referencia Schmidt H, Beutin L, Karch H. Molecular analysis of the plasmid-encoded hemolysin of Escherchia coli O157:H7 strain EDL 933. Infect. Immun. 1995; 63:

29 PCR flic H7 PRIMER FLICH7-F SECUENCIA DEL OLIGONUCLEOTIDO (5-3 ) GCGCTGTCGAGTTCTATCGAGC TAMAÑO FRAGMENTO Pb FLICH7-R CAACGGTGACTTTATCGCCATTCC 625 Referencia Gannon VP, D Souza S., Graham T., King RK., Rahn K., Read S. Use of the flagellar H7 gene as a target in multiplex PCR assays and improved specificity in identification of enterohemorrhagic Escherichia 29 coli strains. J. Clin. Microbiol. 1997; 35:

30 ALGORITMO Algoritmo para el PARA diagnóstico EL DIAGNOSTICO de STEC O157 y Y no CARACTERIZACION O157 con tamizaje por DE Escherichia coli O157 CON PCR TAMIZAJE multiplex POR PCR MULTIPLEX Materia fecal (suspensión) Separación Inmunomagnética E. coli O157 Agar MacConkey Sorbitol (SMAC) CTS SMAC 37ºC x 18 h 37ºC x 18 h CT-CTS 37ºC x 6 h 37ºC x 6 h SMAC 37ºC x 18 h Seroagrupamiento presuntivo STEC Tamizaje PCR Multiplexstx1/stx2/rfbO157 zona de confluencia y colonias sorbitol (-) PCR (-) PCR (+) Descartar Aislamiento Identificación bioquímica Fenotipo enterohemolítico Sorbitol en tubo β- glucuronidasa Biotipificación Serotipificación Sensibilidad a ATB Caracterización por PCR eae, EHEC-hlyA, flich7 Centro Nacional de Referencia Citotoxicidad especifica células Vero Subtipificación de STEC Genotipo de variantes stx Fagotipificación PFGE 30

31 Separación inmunomagnética 5 ml de Caldo GN + MF STEC O157 Incubación a 37ºC por 5 hs 1ml de caldo +20 µl de perlas inmunomagnéticas recubiertas con a-o min. a TA c/agitación Lavar 3 veces con PBS Tween Separar -concentrar con iman Agar CT-SMAC..... Perlas reconstituidas... Agar CROMOGÉNICO 31

32 ALGORITMO Algoritmo para el PARA diagnóstico EL DIAGNOSTICO de STEC O157 y Y no CARACTERIZACION O157 con tamizaje por DE Escherichia coli O157 CON PCR TAMIZAJE multiplex POR PCR MULTIPLEX Materia fecal (suspensión) Separación Inmunomagnética E. coli O157 Agar MacConkey Sorbitol (SMAC) CTS SMAC 37ºC x 18 h 37ºC x 18 h CT-CTS 37ºC x 6 h 37ºC x 6 h SMAC 37ºC x 18 h Seroagrupamiento presuntivo STEC Tamizaje PCR Multiplexstx1/stx2/rfbO157 zona de confluencia y colonias sorbitol (-) PCR (-) PCR (+) Descartar Aislamiento Identificación bioquímica Fenotipo enterohemolítico Sorbitol en tubo β- glucuronidasa Biotipificación Serotipificación Sensibilidad a ATB Caracterización por PCR eae, EHEC-hlyA, flich7 Centro Nacional de Referencia Citotoxicidad especifica células Vero Subtipificación de STEC Genotipo de variantes de Stx e Intimina Fagotipificación PFGE 32

33 Técnicas diagnósticas utilizando cultivo celular Citotoxicidad específica de cultivos bacterianos Detección de toxina Shiga libre en Materia Fecal (StxMF) Detección de Anticuerpos anti-toxina Shiga (Acs anti-stx) Estas técnicas son laboriosas, lentas y de alto costo. Requerimientos: Tejido celular-células Vero Estufa CO 2 Monoclonales anti-stx1 / anti-stx2 33

34 Métodos de Subtipificación de STEC Fagotipificación de Escherichia coli O157:H7 Genotipificación de Stx y de intimina PFGE 34

35 Tipificación por fagos de Escherichia coli O157:H7 TECNICA Fagotipificación de la cepa de E. coli O157:H7 se establece según el patrón de lisis obtenido luego de inocular a la bacteria con 16 fagos. Estandarizada por Ahmed y col. y ampliada por Khakhria y col. (CDC Canada) Escherichia coli O157:H7 Fagotipo 4 35

36 Variantes genotípicas de stx Variante genotípica Origen aislamientos Metodología Referencia stx1 Humano / Alimento stx1c Humano / Animal Ovino PCR-RFLP Zhang W. (2002) stx1d Animal bovino PCR Burk C. (2003) stx2 Humano / Alimento stx2c (stx2vh-a) Humano PCR-RFLP Tyler SD. (1991) stx2c (stx2vh-b) Humano stx2c (stx2d-o118 / stx2-ox3) Humano PCR-RFLP Piérard D. (1998) stx2d mucus-activable stx2d1 (stx2v-ha) Humano PCR-RFLP Jelacic JK. (2003) stx2d2 (stx2v-hb) stx2f Humano / Animal heces paloma PCR Schmidt H. (2000) stx2g Animal bovino PCR Leung PHM. (2003) stx2e Animal edema porcino PCR Johnson WM. (1990) 36

37 Figura bp 385 bp PCR a stx2 b stx2 variante A. Productos de amplificación por PCR de 285-bp y 385-bp, para la detección de los genes stx2 y variantes de stx2, respectivamente. La PCR fue realizada con los primers Stx2 (a) y Stx2v (b). Calles: 1, cepa A80/98; 2, cepa CF63/98; 3, E. coli 933 O157:H7 (stx2); 4, E coli O157:H7 (stx2vh-a); 5, E. coli O113:H21 (stx2vh-b); 6, control negativo (muestra sin templado); 7, Marcador de Peso Molecular 100-bp DNA Ladder Metodología según Tyler stx2 stx2+2vha stx2 stx2vha stx2vhb RFLP a b c a b c a b c a b c a b c B. Genotipos de stx2 por análisis de RFLP después de la digestión usando las enzimas de restricción HaeIII (a), RsaI (b) y NciI (c) de los productos de amplificación por PCR con los primers Stx2 (a). Calles: 1, 2, 3 cepa A80 /98; 4, 5, 6 cepa CF63/98; 8, 9, 10 E. coli 933 O157:H7 (stx2); 12, 13, 14, E. coli O157:H7 (stx2vh-a); 15, 16, 17 E. coli O113:H21 (stx2vh-b); 7, 11 Marcador de Peso Molecular 100-bp DNA Ladder 37

38 VARIANTES DE INTIMINA EHEC EPEC Colonizan la mucosa intestinal Lesión A/E Isla de patogenicidad LEE eae Proteína Intimina 94 a 97 KDa N-terminal 670 aa Región conservada C-terminal 280 aa Región variable 38

39 VARIANTES DE INTIMINA PCR-RFLP Ramachandran et. Al. J Clin. Microbiol : PCR: 4 primers (1 forward y 3 reverse) Producto de amplificación : pb RFLP: corte con RsaI, AluI, CfoI 14 Subtipos de intimina: α1, α2, β,γ, ε, ζ, η,θ, ι κ, λ, µ, ν, ξ 39

40 VARIANTES DE INTIMINA PCR-RFLP Corte con RsaI y AluI γ ε β β ε β β 40

41 VARIANTES DE INTIMINA Subtipo de Intimina β γ ε θ Serotipo O26:H11, O145:H25 O157:H7, O145:NM O121:H19, O103:H2 O111:NM, O103:H25 41

42 Patrones XbaI-PFGE de cepas STEC aisladas en Argentina

43 LABORATORIO NACIONAL DE REFERENCIA PARA SUH Y DIARREAS POR Escherichia coli PRODUCTOR DE TOXINA SHIGA (STEC) Frecuencia de detección y perfiles de virulencia de STEC O157 y no-o157 en muestras de diferentes orígenes. Epidemiología molecular por PFGE aplicada a la vigilancia y al estudio de brotes. Estudio de excreción prolongada. 43

44 STEC O157 y no-o157 DE ORIGEN CLINICO ORIGEN SUH Diarrea sanguinolenta Diarrea Asintomáticos Sin diagnóstico Otros Total Cepas STEC O157 Nº (%) 271 (47,1) 148 (25,7) 90 (15,7) 5 (0,9) 59 (10,3) 2 (0,3) 575 (100) no-o157 Nº (%) 104 (56,2) 24 (13) 30 (16,2) 16 (8,7) 10 (5,4) 1 (0,5) 185 (100) 44

45 STEC O157 y no-o157 DE ORIGEN CLINICO El 82 % de las cepas STEC O157 presentaron el genotipo stx2+stx2c(2vh-a), eae, ehxa. El fagotipo 49 y los patrones de XbaI-PFGE AREXHX y AREXHX , fueron los predominantes. El 71% de las cepas de STEC no-o157 correspondieron a los siguientes perfiles prevalentes O145:NM,stx2,eae, ehxa; O26: H11 stx1, eae, ehxa; O121:H19 stx2, eae, ehxa y O111, stx1, eae, ehxa. Entre los serotipos restantes que se detectaron con menor frecuencia cabe destacar aquellas cepas de los serotipos O174:H21, O171:H2 y O91:H21, todas eae y ehxa negativas aisladas tanto de casos clínicos severos como SUH y DS y de muestras de alimentos. 45

46 EPIDEMIOLOGIA MOLECULAR APLICADA AL SISTEMA DE VIGILANCIA Diversidad genética y relación clonal Base de datos Nº de cepas: 1127 Nº de patrones XbaI-PFGE: 495 XbaI-PFGE patrones prevalentes (18%): AREXHX (118 cepas) AREXHX (83 cepas) En tiempo real Estudio de brotes Detección de clusters Brotes difusos 46

47 BROTE DE DIARREA SANGUINOLENTA San Martín de los Andes, Neuquén 2007 Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-98.3%] PFGE-XbaI PFGE-XbaI XbaI PFGE Diagnóstico Lugar de Origen Brote Nº Paciente Edad A-M Sexo Inicio Síntomas AREXHX BD San. Martin de los Andes07NQEXH-3 Salazar Guadalup. 2-3 F Sin Dato AREXHX BD San. Martín de los Andes07NQEXH-3 Paschioni Logan I M /07 AREXHX HUS San. Martin de los Andes07NQEXH-3 Laborda Benjamín 3-6 M /07 AREXHX BD San. Martín de los Andes07NQEXH-3 Tomas Boaknin 1-3 M /07 AREXHX HUS Neuquén. Arcidiago Gabriel 1-8 M /07 47

48 SUH ASOCIADO A LA INFECCION POR E. coli O145 ESTUDIOS DE CONTACTOS ASINTOMATICOS Caso SUH : Niña 20 meses criterios diagnósticos negativos Contacto hermana: 13 años Contacto padre: 38 años Contacto hermana: 15 años E. coli O145:NM Stx2, Int-γ, EHEC-Hly Contacto hermana: 4 meses Dice ( Opt :1.50%) (Tol 1.5% -1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0% -98.3%] PFGE -XbaI PFGE -XbaI 100 N Cepa Patr ó n Xba I PFGE Serotipo Origen Procedencia 1104/06 AREXSX E. coli O145:NM Contacto/hermana Htal. Prov. Heller Neuqu én 1105/06 AREXSX E. coli O145:NM Contacto/hermana Htal. Prov. Heller Neuqu én 1106/06 AREXSX E. coli O145:NM Contacto/padre Htal. Prov. Heller Neuqu én 48

49 ESTUDIOS DE CONTROL DE EXCRECION DE STEC EN BROTES OCURRIDOS EN JARDINES MATERNALES 1º Evento (11/02) en CABA 1 caso de DS 1 asintomático E. coli O157:H7 Stx2+Stx2c, Int-γ EHEC-Hly, PT47 (excreción por 23 días) (excreción por 30 días) 2º Evento (10/03) en Mar del Plata 14 casos de D 1 SUH 3º Evento (01/04) en Paraná 4 casos de DS 1 caso de SUH 1 asintomático 1 asintomático 4º Evento (01/05) en Rosario 4 casos de SUH 2 casos de D 1 asintomático E. coli O26:H11 Stx1, Int-β EHEC-Hly (excreción por 37 días) E. coli O103:H2 Stx1, Int-ε EHEC-Hly E. coli O157:H7 Stx2+Stx2c, Int-γ EHEC-Hly, PT4 E. coli O26:H11 Stx1, Int-β EHEC-Hly (excreción por 31 días) E. coli O145:NM Stx2, Int-γ EHEC-Hly (excreción por 18 días) E. coli ONT:HNT eae, Stx2d2, EHEC-Hly 49

50 CONCLUSIONES El Rol fundamental del Laboratorio Bacteriológico, como componente del Sistema de Vigilancia, es el diagnóstico rápido del agente etiológico. La derivación de especímenes al LNR es importante para completar los criterios diagnósticos y para realizar epidemiología molecular aplicada a la vigilancia. Para todo caso de SUH, es necesario el estudio de convivientes o contactos institucionales. La eliminación de STEC es prolongada e intermitente. Es importante determinar la finalización de la excreción para disminuir el riesgo de transmisión del patógeno. 50

51 SERVICIO FISIOPATOGENIA DEPARTAMENTO BACTERIOLOGÍA INEI-ANLIS Dr. C. G. Malbrán Marta Rivas Isabel Chinen Natalia Deza Eduardo Manfredi Gerardo Leotta Ariela Baschkier Carolina Carbonari Lucía Galli Beatriz D astek Elisabet Vilacoba Juliana Raina Sofía Lopez Natalia Martinez 51