XVI Congreso Uruguayo de Patología Clínica Alteraciones moleculares en las leucemias agudas. Nov, 2016.
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- Marta Marina Juárez Ramos
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2 XVI Congreso Uruguayo de Patología Clínica Alteraciones moleculares en las leucemias agudas. Nov, Dra. M.N.Zubillaga.
3 GRACIAS POR SU ATENCION
4 Enfoque diagnóstico/ patología clínica *Aspectos moleculares de leucemias agudas (LA). * Leucemias Linfoblásticas Agudas (LAL ) *Leucemias Mieloblásticas Agudas (LAM) *Proyecto de Investigación ASESP-Fac.de Medicina. ANII
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7 EHA 2015
8 Cell, 2011 Cell144, March 4, 2011ª2011 Elsevier Inc Leucemias agudas: Bloqueo de la diferenciación Proliferación incontrolada
9 EHA, 2013
10 Diagnóstico Estratificación de riesgo Pronóstico Decisiones terapéuticas Control evolutivo
11 Cómo definir una terapia dirigida? Elegir una estrategia terapéutica de acuerdo al riesgo del perfil genético del paciente. Seleccionar drogas especificas que tengan como blanco las anormalidades genéticas. Ajustar el tratamiento de acuerdo a la Enfermedad Mínima residual (MDR). Modificada. Torsten Haferlach en Congreso de ASH (American Society of Hematology) Artículo completo en Hematology 2008:
12 Múltiples genes afectados. Base molecular compleja y heterogénea, Proceso multi-step con activación de vias de señalización proliferativas e inhibición de vias supresoras. Alteraciones genéticas marcadoras Biomarcadores / seguimiento Técnicas con sensibilidad 1 x 10-5
13 Citomorfologìa (% blastos) Citogenética ( ISCN) Inmunofenotipo DIAGNOSTICO Y CONTROL EVOLUTIVO Histología/anat pat FISH Estudios moleculares
14 Metodología PCR ( reacción en cadena de la polimerasa ) ( RT-PCR, tiempo real, ASO-PCR ) Secuenciación Método de Sanger Secuenciación masiva, de última generación (NGS ) ( dirigida, exoma, genoma )
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20 LAL Proliferación de precursores : linfoblastos (80-85 % B) ( 15-20% T) 75 %< 6 años. Pronóstico muy favorable en niños (95% remisión OMS) / hab/año OMS OMS 2008
21 Linaje T LAL T rearreglos IgH, receptor T ( TCR) genes factores de transcripción: HOX 11 (TLX1) HOX 11L2 (TLX3 ) MYC,TAL1,RBTN1 Delecciones que afectan genes supresores OMS 2008
22 Linaje B Rearreglos clonales de IgH gen, también de receptor T hasta 70% de los casos. Progenitor B o stem cell afectada. Entidades definidas con anomalías genéticas recurrentes Otras: (t 17,19) E2A-HLF amplificación de AML1 OMS 2008
23 NCCN 2016
24 t ( v, 11q23)
25 Ensayo Multiplex PCR Real time: t( 9,22)(q34;q11.2) BCR-ABL1 t ( 4,11 ) (4q21,11q23;)MLL-AF4 t (1,19 )( q23,p13.3) TCF3-PBX1 t (12,21) (p13;q22)etv6-runx1 Sensibilidad: 1 en 1 x 10 5 células
26 Grupos de riesgo ( niños, adolescentes y adultos jóvenes ( AYA), adultos ) Riesgo standard Riesgo alto BCR-ABL confiere alto riesgo.
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28 LAM OMS. >=20 % blastos en médula ósea o sangre *mediana al diagnóstico 67 años *Leucemia aguda más frecuente del adulto * anomalias genéticas recurrentes: t(15,17),t(8,21),t(16,16), inv16. Provisionalmente( t9,11),t(6,9),inv 3, inv3;3, t(1,22). CCAAT/CEBPa. 2016: AML con BCR-ABL1; AML con RUNX1. *Secundarias a Síndrome mielodisplásico *Leucemias de linaje ambiguo, bifenotípicas(mpal con BCR-ABL1; MPAL con KMT2A, MPAL con otros genes B, MPAL con genes T )
29 heterogéneo
30 NK NCCN 2016
31 MARCADORES GENÉTICOS OPTIMIZACIÓN DE LA MUESTRA AL DEBUT. FLT3. (FMS like tyrosin kinase 3) NPM1 ( nucleofosmina) ( 28-35% de AML y 50% NK ) CEBPa ( enhancer binding protein alpha) KIT (receptor transmembrana tirosinquinasa) IDH 1, IDH2 ( isocitratodeshidrogenasa)
32 FLT3 mutaciones activantes: ITD (30% AML) Confiere disminución de SLE y SG. Mal pronóstico. Mutación D835 (evidencia en ambos sentidos). NCCN 2016
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34 NPM1 ( % AML )( 48-53% NK) Mayor tasa de respuesta, mejora SLE y SG. CEBPa (7-11% AML ) ( 13-15% NK) Pronóstico favorable con mutación bialélica.(2016, OMS). IDH1 ( 6-9% AML) (8-16% NK) IDH 2 (8-12% AML ) (19% NK ) Excluyentes entre sí, evidencia pronóstica inconsistente. DNMT3A ( 18-23% AML) (29-34% NK) TET2, RUNX1 genes candidatos NCCN 2016
35 KIT ( 20% CBF AML ). Se asocian menor SLE y SG en pac con t (8,21) ( riesgo favorable) Importancia de analizar el impacto de las alteraciones genéticas secundarias en la clasificación pronóstica ( riesgo).
36 OMS 2008
37 OMS 2008
38 Algortimo. Cariotipo normal. OMS. MO/SP FLT3+ Desfavorable FLT3- - NPM1 CEBPa + NPM1+ Riesgo favorable ASESP 2011
39 Modificadores de cromatina FT Mieloides MLL ASXL1,EZH2, KDM6A 15-20% NPM % CEBPa, RUNX1 GATA % modificadores de ADN DNMT3A TET2,IDH1, IDH % FENOTIPO LEUCEMICO FLT3,RAS PTPN % traductores de señales cohesinas SMC3,RAD21 STAG2,SMC1A 15-20% SF3B1,SRSF2 U2AF % TP53,WT1 PHF % Genes supresores de tumores genes de spliceosomoas EHA 2015
40 Haematologica 2016
41 Asociación entre citogenética y marcadores moleculares - presentación oral de Torsten Haferlach en Congreso de ASH (American Society of Hematology) Artículo completo en Hematology 2008:
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44 LAM en URUGUAY Estudios en lab de ASESP y Fac de Medicina. Prospectivo. 3 años. Importancia epidemiológica. Reclutamiento multicéntrico ( 27 muestras ) Muestra al debut ( médula ósea/sangre) Consentimiento informado disponible
45 Secuenciación masiva dirigida ( NGS) panel de genes relacionados con LAM. Plataforma Illumina. ( PCR en puente). Confirmación por Sanger de variantes encontradas. Abi Estudios epigenéticos; PCR, análisis de genes Análisis de datos.cifras ROU. Etapa de conclusiones y planteo.
46 2014
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49 Perspectivas NGS Estrategias diagnósticas Alteraciones genéticas Genes afectados y sus variantes Medicina de precisión y predictiva Avance en el diagnóstico molecular del cancer Conocimiento de nuevos marcadores genéticos de LA
50 Proyecto Alianza LAM Equipo ASESP. Equipo Fac Med Boschi S Cappetta M Elizondo V Dell Occa N Manrique G Tort J Moro I Perez V Zubillaga MN Hematólogos tratantes y médicos patólogos clínicos.
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53 GRACIAS POR SU ATENCION!!! GRACIAS
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