JAA 2010/07 Español. BBL preparados en tubos para el crecimiento de microorganismos

Transcripción

1 JAA 2010/07 Español BBL preparados en tubos para el crecimiento de microorganismos BHI with 0.1% Agar, 10 ml Trypticase Soy Broth with 0.15% Agar, 9 ml USO PREVISTO Brain Heart Infusion (BHI) with 0.1% Agar (infusión de cerebro y corazón (BHI) con 0,1% agar) y Trypticase Soy Broth (TSB) with 0.15% Agar (caldo de soja Trypticase (TSB) con 0,15% agar) son medios de uso general utilizados en el cultivo de microorganismos exigentes y no exigentes, en especial las bacterias anaerobias. RESUMEN Y EXPLICACION BHI es un medio de infusión utilizado para el cultivo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos hongos, bacterias y levaduras 1. BHI with 0.1% Agar se utiliza para el cultivo de anaerobios debido a la menor tensión de oxígeno del medio. TSB es un medio nutritivo que favorece el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, incluidos los hongos y las bacterias aerobias, anaerobias y facultativas 1,2. La adición de agar mejora el cultivo de algunos microorganismos, en especial los anaerobios a partir de muestras de tratamientos de conducto radicular y otras muestras clínicas 1. PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO El caldo BHI es un medio de cultivo nutritivo tamponado que contiene infusiones de tejido de cerebro y corazón y peptonas para suministrar proteína y otros nutrientes necesarios para favorecer el crecimiento de microorganismos exigentes y no exigentes. TSB contiene digeridos enzimáticos de caseína y harina de soja para proporcionar sustancias nitrogenadas. La dextrosa es una fuente de energía, y el cloruro sódico proporciona equilibrio osmótico. Es útil suplementar estos medios con agar para el cultivo de anaerobios. El agar en el medio demora la absorción de oxígeno reduciendo las corrientes de convección en el medio. REACTIVOS BHI with 0.1% Agar Fórmula aproximada* por litro de agua purificada Digerido pancreático de gelatina...14,5 g Infusión de cerebro y corazón (sólidos)...6,0 g Digerido péptico de tejido animal...6,0 g Dextrosa...3,0 g Cloruro sódico...5,0 g Fosfato disódico...2,5 g Agar...1,0 g *Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.

2 Trypticase Soy Broth with 0.15% Agar Fórmula aproximada* por litro de agua purificada Digerido pancreático de caseína...17,0 g Digerido papaico de harina de soja...3,0 g Dextrosa...2,5 g Cloruro sódico...5,0 g Fosfato disódico...2,5 g Agar...1,5 g *Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. Advertencias y precauciones Para uso diagnóstico in vitro. Los tubos con tapas ajustadas deben abrirse con cuidado para evitar lesiones por la rotura del vidrio. Emplear una técnica aséptica y seguir las precauciones habituales contra riesgos microbiológicos durante todo el proceso. Después de su utilización, los recipientes para muestras y otros materiales contaminados deben esterilizarse en autoclave antes de ser desechados. Instrucciones para el almacenamiento: En el momento de recibirlos, guardar los tubos en un lugar oscuro a una temperatura de 2 25 C. Evitar la congelación y el sobrecalentamiento. No abrir hasta que vayan a utilizarse. Reducir al mínimo la exposición a la luz. Los medios en tubos almacenados como se indica en sus etiquetas hasta momentos antes de su utilización pueden ser inoculados hasta la fecha de caducidad e incubados durante los períodos recomendados de incubación. Permitir que el medio llegue a temperatura ambiente antes de la inoculación. Deterioro del producto: No utilizar los tubos si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación o cualquier otro signo de deterioro. RECOGIDA Y MANIPULACION DE LAS MUESTRAS BHI y TSB con agar no son medios adecuados para uso directamente con muestras clínicas u otras fuentes con flora microbiana mixta, excepto como medio de reserva además de los medios de aislamiento primarios. Para más información, consultar los textos correspondientes 3-5. PROCEDIMIENTO Material suministrado: BHI with 0.1% Agar o Trypticase Soy Broth with 0.15% Agar Materiales necesarios pero no suministrados: Medios de cultivo auxiliar, reactivos, organismos para el control de calidad y el equipo de laboratorio que se requiere para llevar a cabo este procedimiento. Procedimiento del análisis: Emplear técnicas asépticas. Los medios líquidos para incubación anaerobia deben reducirse antes de la inoculación colocando los tubos, con las tapas flojas, en atmósfera anaerobia durante h. Una manera fácil y eficaz de obtener las condiciones anaerobias adecuadas es mediante el uso de sistemas anaerobios BD GasPak o GasPak EZ 6. Los organismos que se desea cultivar primero deben aislarse en cultivo puro en un medio en placa o agar inclinado apropiado. Con un asa o aguja de inoculación estéril, transferir crecimiento reciente de la placa o agar inclinado al medio en tubo para obtener la concentración deseada de organismos viables. Las especies que se conoce o sospecha que contienen anaerobios obligados deben inocularse cerca del fondo del tubo.

3 Los medios en tubo destinados al aislamiento y cultivo de anaerobios deben incubarse en atmósfera anaerobia durante un máximo de 7 días. Control de calidad del usuario: 1. Examinar si el medio presenta signos de deterioro (como se describe en Deterioro del producto ). 2. Evaluar el rendimiento mediante inoculación de una muestra representativa de tubos con cultivos puros de organismos de control estables que dan reacciones esperadas y conocidas. Para ello se recomienda utilizar las siguientes cepas de prueba: CEPA DE PRUEBA Bacteroides fragilis ATCC Streptococcus pyogenes ATCC RESULTADO PREVISTO Crecimiento Crecimiento El control de calidad debe llevarse a cabo conforme a la normativa local y/o nacional, a los requisitos de los organismos de acreditación y a los procedimientos estándar de control de calidad del laboratorio. Se recomienda consultar las instrucciones de NCCLS y normativas de CLIA correspondientes para obtener información acerca de las prácticas adecuadas de control de calidad. RESULTADOS El crecimiento en los tubos se indica por la presencia de turbidez en comparación con un control sin inocular. Si aparece crecimiento, los cultivos deben examinarse mediante tinción de Gram y subcultivarse en medios apropiados, por ejemplo, placa de agar sangre y/o agar chocolate II, placa de agar EMB o agar MacConkey II, etc. Si se sospecha la presencia de anaerobios, los subcultivos deben incubarse en atmósfera anaerobia, como en un sistema anaerobio GasPak o GasPak EZ. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO La presencia de agar en estos medios produce una leve turbidez que podría confundirse con crecimiento. Debe examinarse una tinción de Gram y prepararse un subcultivo para determinar la presencia de crecimiento microbiano. Para su identificación, los organismos deben encontrarse en un cultivo puro. Pueden realizarse pruebas bioquímicas y otras pruebas de identificación para lograr una identificación completa. Para obtener información adicional, deben consultarse los textos correspondientes 3,7-9. CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO BHI with 0.1% Agar Antes de su lanzamiento al mercado, todos los lotes de Brain Heart Infusion with 0.1% Agar se analizan para determinar sus características de rendimiento. Las muestras representativas se analizan con suspensiones de células de Bacteroides fragilis ATCC y Streptococcus pyogenes ATCC 19615, diluidas en solución salina normal para lograr una concentración de 1 x 10 3 a 1 x 10 4 UFC. Los tubos se incuban con las tapas flojas en atmósfera anaerobia a ºC durante un máximo de siete días en un frasco BBL GasPak. Se observa crecimiento de medio a denso con ambos organismos. DISPONIBILIDAD Nº de cat. Descripción BBL BHI Agar with 0.1% Agar, 10 ml, caja de 100 tubos de tamaño D BBL Trypticase Soy Broth with 0.15% Agar, 9 ml, caja de 100 tubos de tamaño K

4 REFERENCIAS 1. MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria, vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 2. Fredette, V., A. Auger, and A. Forget Anaerobic flora of chronic nasal sinusitis in adults. Can. Med. Assoc. J. 84: Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld Bailey & Scott's diagnostic microbiology, 10th ed. Mosby, Inc., St. Louis. 4. Miller, J.M., and H.T. Holmes Specimen collection, transport, and storage, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. Isenberg, H.D., F.D. Schoenknecht, and A. von Graevenitz Cumitech 9, Collection and processing of bacteriological specimens. Coordinating ed., S.J. Rubin. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. Seip, W.F., and G.L. Evans Atmospheric analysis and redox potentials of culture media in the GasPak system. J. Clin. Microbiol. 11: Murray, P.R., E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Engelkirk, P.G., J. Duben-Engelkirk, and V.R. Dowell, Jr Principles and practice of clinical anaerobic bacteriology. Star Publishing Co., Belmont, Calif. 9. Summanen, P., E.J. Baron, D.M. Citron, C.A. Strong, H.M. Wexler, and S.M. Finegold Wadsworth anaerobic bacteriology manual, 5th ed. Star Publishing Co., Belmont, Calif.

5 = _bkbu=iáãáíéç =_ÉÅíçåI=aáÅâáåëçå=~åÇ=`çãé~åó= =_ÉåÉñ=iáãáíÉÇ= T=içîÉíçå=`áêÅäÉ _~ó=h=n~lçi=pü~ååçå=fåçìëíêá~ä=bëí~íé = T=içîÉíçå=`áêÅäÉ= = oáåé~åå~=eçìëé= pé~êâëi=j~êóä~åç=onnro=rp^ pü~ååçåi=`çìåíó=`ä~êéi=fêéä~åç = pé~êâëi=ja=onnro=rp^= UMMJSPUJUSSP = qéäw=prpjsnjqtjovjom pü~ååçå=cêéé=wçåé= = UMMJSPUJUSSP= = c~ñw=prpjsnjqtjorjqs pü~ååçåi=`çìåíó=`ä~êéi=fêéä~åç= = ïïïkäçkåçãlçë= = ^q``=áë=~=íê~çéã~êâ=çñ=^ãéêáå~å=qóéé=`ìäíìêé=`çääéåíáçåk= _ai=_a=içöçi= ii=d~ëm~â=~åç=qêóéíáå~ëé=~êé=íê~çéã~êâë=çñ=_éåíçåi=aáåâáåëçå=~åç=`çãé~åók=«=omnm=_ak=