BD Modified CNA Agar BD Modified CNA Agar with Crystal Violet

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1 INSTRUCCIONES DE USO MEDIOS EN PLACA LISTOS PARA USAR PA Rev.: Junio de 2003 BD Modified CNA Agar BD Modified CNA Agar with Crystal Violet USO PREVISTO BD Modified CNA Agar (agar CNA modificado BD) es un medio selectivo para el aislamiento de bacterias gram positivas a partir de muestras clínicas. BD Modified CNA Agar with Crystal Violet (agar CNA modificado BD con cristal violeta) se utiliza para el aislamiento de estreptococos y enterococos e inhibe los estafilococos y las bacterias gram negativas. PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO Método microbiológico. Dada su composición nutritiva, el agar de soja Trypticase (TSA) se ha convertido en un medio de uso muy extendido, ya sea sin suplementos o como base de medios con sangre 1. El agar de soja Trypticase II (TSA II) es una versión mejorada, con factores de crecimiento para proporcionar zonas hemolíticas más definidas que el agar de soja Trypticase (TSA) cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%. Suministra crecimiento y hemólisis excelentes de estreptococos beta-hemolíticos y otros organismos. Ellner y colegas descubrieron que un medio con colistina y ácido nalidíxico en una base de agar Columbia enriquecido con sangre de carnero al 5% favorecía el crecimiento de estafilococos, estreptococos hemolíticos y enterococos, a la vez que inhibía las especies de Proteus, Klebsiella y Pseudomonas 2. La base de agar Columbia tiene un contenido de carbohidratos relativamente alto y, por consiguiente, los estreptococos beta-hemolíticos pueden producir una reacción hemolítica verdosa, que se puede confundir con alfa-hemólisis. El agar de soja Trypticase II presenta reacciones hemolíticas más definidas pero con colonias habitualmente de menor tamaño. En BD Modified CNA Agar y en BD Modified CNA Agar with Crystal Violet, el agar de soja Trypticase II es el medio base que proporciona nutrientes y se suplementa con colistina y ácido nalidíxico para suministrar selectividad para las bacterias gram positivas. La sangre de carnero y suero de ternero adicional favorecen el crecimiento y permiten la detección de las reacciones hemolíticas. Además de estos elementos, BD Modified CNA Agar with Crystal Violet contiene violeta cristal, que es un inhibidor eficiente de estafilococos. Por tanto, este medio se utiliza para el aislamiento de estreptococos y enterococos, a los que no inhibe este colorante. REACTIVOS Fórmulas* por litro de agua purificada BD Modified CNA Agar Digerido pancreático de caseína Digerido papaico de harina de 14,5 g 5,0 soja Cloruro sódico 5,0 Agar 14,0 Factores de crecimiento 1,5 Colistina 0,01 Acido nalidíxico 0,01 Suero de ternero 50,0 ml Sangre de carnero, desfibrinada 5% ph 7,3 ± 0,2 BD Modified CNA Agar with Crystal Violet, además de los elementos enumerados anteriormente, contiene 2 mg de cristal violeta por litro de medio. PA

2 *Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. PRECAUCIONES. Solamente para uso profesional. No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro. Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y desecho del producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO. ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 8 C, en su envase original hasta momentos antes de su utilización. Evitar la congelación y el sobrecalentamiento. Las placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la etiqueta del paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados. Las placas de pilas abiertas de 10 unidades pueden utilizarse durante una semana cuando se almacenan en un área limpia a una temperatura de 2 8 C. CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, véase el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar a una temperatura de 35 ± 2 C durante un período de 18 a 24 horas, preferiblemente en un ambiente aerobio enriquecido con dióxido de carbono. Cepas BD Modified CNA Agar BD Modified CNA Agar with Crystal Violet Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 de color Crecimiento de regular a de color Streptococcus pyogenes ATCC Staphylococcus aureus ATCC Enterococcus faecalis ATCC Proteus mirabilis ATCC gris verdoso; alfa-hemólisis blancuzcas pequeñas con beta-hemólisis de blancas a amarillas, de tamaño mediano, con o sin beta-hemólisis blancuzcas con zona grisácea; sin hemólisis Inhibición parcial o completa; ausencia de proliferación gris verdoso; alfa-hemólisis pequeñas de color gris azulado; beta-hemólisis Inhibición completa Crecimiento de regular a azuladas pequeñas; sin hemólisis Inhibición parcial o completa; ausencia de proliferación Sin inocular Rojo (de color sangre) Rojo (de color sangre), tono azulado PROCEDIMIENTO Materiales suministrados BD Modified CNA Agar o BD Modified CNA Agar with Crystal Violet, ambos suministrados en placas Stacker de 90 mm. Controladas microbiológicamente. Materiales no suministrados Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera. Tipos de muestras BD Modified CNA Agar es un medio selectivo para numerosas bacterias gram positivas en bacteriología aerobia y puede emplearse para todos los tipos de muestras bacteriológicas. PA

3 BD Modified CNA Agar with Crystal Violet es un medio selectivo para estreptococos y enterococos e inhibe los estafilococos. Se utiliza principalmente para detectar estreptococos en muestras de zonas corporales en las que estos organismos desempeñan un papel muy importante como agentes infecciosos, por ejemplo, para la detección de estreptococos del grupo A (=Streptococcus pyogenes) en muestras de las vías respiratorias superiores. Asimismo, se puede utilizar para detecta estos y otros estreptococos y enterococos a partir de otras muestras clínicas. Para obtener información adicional acerca de estos medios, consultar CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO. Procedimiento de análisis Después de recibir la muestra en el laboratorio, extenderla tan pronto como sea posible en BD Modified CNA Agar o BD Modified CNA Agar with Crystal Violet. La placa de extensión se utiliza principalmente para aislar los cultivos puros de las muestras con flora mixta. Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en una sección pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta área inoculada. Para poder detectar todos los patógenos en la muestra, se deben incluir BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood y (según el tipo de muestra) medios selectivos adicionales 3,4. Dado el alto número de patógenos que requieren dióxido de carbono para su aislamiento primario, las placas deben incubarse en una atmósfera que contenga aproximadamente de 3 a 10% de CO 2. Incubar las placas a una temperatura entre 35 y 37 C durante un período de 18 a 24 horas o más si es necesario. Resultados La morfología de colonias característica en BD Modified CNA Agar es la siguiente: Estreptococos (diferentes del Pequeños, de color de blanco a gris Posiblemente grupo D) hemolíticos, según la especie Enterococos (grupo D) De tamaño de pequeño a mediano, pero más grande que los estreptococos del grupo A; de color gris Estafilococos De tamaño mediano, de color de blanco a gris o de crema a amarillo Posiblemente hemolíticos, según la especie Micrococos Grandes, de color entre blanco y gris o amarillo y naranja Corinebacterias De pequeños a grandes, de color entre blanco y gris o amarillo Candida spp. Pequeños y de color blanco Listeria monocytogenes Pequeños, grises, con beta-hemólisis Bacterias gram negativas Inhibición de parcial a completa En BD Modified CNA Agar with Crystal Violet, los estafilococos y bacterias gram negativas presentarán una inhibición de parcial a completa, mientras que los estreptococos y enterococos producirán las mismas reacciones de crecimiento que en BD Modified CNA Agar. No obstante, existe una tendencia de las colonias a adquirir una coloración azulada debido a la acumulación del cristal violeta. Es posible que crezcan o no otras bacterias gram positivas, según su sensibilidad a los inhibidores. Para obtener detalles acerca de la interpretación del crecimiento en placas de aislamiento primario, consultar las referencias 4-7. CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO BD Modified CNA Agar se utiliza para el aislamiento de bacterias gram positivas, por ejemplo, estreptococos, estafilococos, corineformes, Listeria spp y otros 2. BD Modified CNA Agar with Crystal Violet se utiliza para el aislamiento de estreptococos y enterococos. Los estafilococos son inhibidos en este medio. En este medio es posible que crezcan o no otras bacterias gram positivas, según la especie y su sensibilidad a los inhibidores. La mayoría de las bacterias gram negativas tales como Enterobacteriaceae presenta inhibición en este medio. Resultados de rendimiento PA

4 En una evaluación interna, se analizaron las cepas de las siguientes especies para determinar el crecimiento y las reacciones hemolíticas en este medio. Se utilizó BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood como referencia de crecimiento. Las placas se incubaron a C durante 20 h en una atmósfera aerobia enriquecida con CO 2. Los resultados se presentan en la Tabla 1. Limitaciones del procedimiento Aunque son bacterias gram positivas, los organismos aerobios formadores de esporas (Bacillus spp. y géneros relacionados) pueden presentar inhibición en dicho medio. Este medio no inhibe los hongos. Son altos el número y la variedad de especies bacterianas que se dan como agentes infecciosos. Por tanto, antes de utilizar sistemáticamente el medio para microorganismos de reciente descripción o raramente aislados, el usuario debe analizar su conveniencia mediante cultivos puros del microorganismo en cuestión. Ciertas pruebas diagnósticas pueden efectuarse directamente en este medio; no obstante, para lograr la identificación completa se necesitan pruebas bioquímicas, y (si así se indica), pruebas inmunológicas usando cultivos puros. Tabla 1: Resultados de rendimiento Especies BD Modified CNA Agar BD Modified CNA Agar with Crystal Violet Crecimiento, alfahemólisis Crecimiento, alfahemólisis BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood Crecimiento, alfa- Streptococcus pyogenes Streptococcus agalactiae Streptococcus pneumoniae Crecimiento, alfahemólisihemólisis Streptococcus sanguis Crecimiento, alfahemólisis Crecimiento, alfa- hemólisis Enterococcus faecalis Crecimiento Crecimiento Crecimiento Staphylococcus aureus Crecimiento, betahemólisihemólisis Sin crecimiento Crecimiento, beta- Staphylococcus epidermidis Crecimiento Sin crecimiento Crecimiento Listeria monocytogenes Sin crecimiento Crecimiento, beta- hemólisis muy Escherichia coli Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Proteus mirabilis Crecimiento muy Crecimiento muy, Crecimiento muy, proliferación proliferación inhibida, proliferación inhibida inhibida Pseudomonas aeruginosa Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento REFERENCIAS 1. Vera, H.D., and D.A. Power Culture media, p In: E.H. Lennette, A. Balows, W.J. Hausler, Jr., and J.P. Truant (ed.), Manual of clinical microbiology, 3rd ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Ellner, P.D., C.J. Stoessel, E. Drakeford, and F. Vasi A new culture medium for medical bacteriology. Am. J. Clin. Pathol. 45: Forbes, B.A. and P.A. Granato Processing specimens for bacteria. In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 4. Baron, E. J, L. R. Peterson, and S. M. Finegold Bailey & Scott s diagnostic microbiology, 9th ed., p Mosby-Year Book, Inc. St. Louis, MO. 5. Isenberg, H. D. (ed.) Interpretation of aerobic bacterial growth on primary culture media, Clinical microbiology procedures handbook, vol.1, p American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. Ruoff, K. L., R.A. Whiley, and D. Beighton Streptococcus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. PA

5 7. Teixeira, L.M., and R.R. Facklam Enterococcus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. ENVASE/DISPONIBILIDAD BD Modified CNA Agar with 5% Sheep Blood Nº de cat Medios en placa listos para usar, 20 placas BD Modified CNA Agar with Crystal Violet and 5% Sheep Blood Nº de cat Medios en placa listos para usar, 20 placas INFORMACIÓN ADICIONAL Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD. BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès Le Pont de Claix/France Tel: Fax: BD, BD logo, Trypticase and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection 2003 Becton, Dickinson and Company PA