PROCEDIMIENTO CONTROL ESTERILIDAD DE SANGRE Y HEMODERIVADOS PROCEDENTES DEL BIOTERIO
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- Encarnación Soto Piñeiro
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1 PRT Página 1 de 5 1. OBJETIVO Determinar la exclusión de contaminación microbiológica en muestras de hemoderivados procedentes de la Sección de Bioterios del Instituto de Salud Pública de Chile. 2. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE Este procedimiento es aplicable a las muestras de sangre obtenidas de animales de la Sección de Bioterios y a sus productos de hemoderivados respectivos. 3. FUNDAMENTO Las muestras de sangre y hemoderivados para uso microbiológico deben ser estériles y para verificar que esta substancia biológica cumple con los requisitos de una correcta técnica de extracción, procesamiento de la sangre y almacenamiento determinado, es sometida a cultivo aeróbico y anaeróbico en medios específicos para este fin e incubadas a temperaturas apropiadas por un tiempo determinado. 4. REFERENCIAS 4.1 Documento Organización Mundial de la Salud: General Requirements for the Sterility of Biological Substances. (Annex 4). 4.2 TGA Guidelines for sterility testing of therapeutic goods. Australian Government, department of Health and Ageing Therapeutic Goods Administration Health Sciences Authority: Regulatory Guidance, Sterility Testing. December Netherlands Society for Microbiology. Sterility Testing TERMINOLOGÍA No Aplica 6. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS 6.1 Materiales e Insumos Tubos 18 x 180 mm Tubos 16 x 160 mm Pipetas parciales estériles de 1mL, 2 ml, 5 ml
2 PRT Página 2 de Propipetas Caldo soya tripticasa Medium tioglicolato fluido 6.2 Equipos Incubadora regulada en rango de temperatura entre 20ºC a 25ºC Incubadora regulada en rango de temperatura entre 30ºC a 36ºC 7. DESARROLLO 7.1 Preparación de la muestra: Antes de realizar el test de esterilidad en el producto, determinar si el material contiene alguna propiedad que elimina o inhibe el desarrollo de los microorganismos, o contiene preservantes u otra substancia que produzca estos efectos. Si la muestra a ensayar contiene algún elemento que afecte el desarrollo de los microorganismos realizar la prueba pero aplicar un apropiado procedimiento para contrarrestar el efecto El efecto inhibidor en una preparación para la prueba de esterilidad puede ser superado o contrarrestado por el aumento del volumen de medio de cultivo utilizado, por lo que los inhibidores son ineficaces; o si la preparación se puede filtrar, los inhibidores son removidos por el filtro de membrana. El volumen del medio necesario para superar el efecto inhibidor debe ser determinado. Una vez establecido, esta cantidad se puede utilizar para las pruebas posteriores, salvo que se realice un cambio en la composición de del producto. 7.2 Control de medios de cultivo y controles ambientales al sembrar las muestras Realizar control de esterilidad al medio tioglicolato fluido y caldo soya tripticasa en paralelo con la incubación de las muestras y en las mismas condiciones de tiempo y temperatura. Registrar en RG Realizar control de ambiente en mesón de trabajo y/o cámara de flujo laminar por método de sedimentación en placa con agar Plate Count. Registrar en RG Realizar control de temperaturas de incubadoras y registrar en RG
3 PRT Página 3 de Inoculación: Si se trata de material a granel o en gran volumen, inocular con al menos 5 ml del hemoderivado, cada uno de los medios de cultivo correspondientes: medio tioglicolato fluido y caldo soya tripticasa Para el estudio de esterilidad de un lote final de contenedores producidos, los cuales contienen no más de 20 ml, un volumen de 1mL debe ser inoculado para cada uno de medios de cultivo correspondientes: medio tioglicolato fluido y caldo soya tripticasa Si el volumen final de cada contenedor del lote producido contiene una cantidad menor a 1mL, utilizar todo el volumen para inocular cada uno de los medios de cultivo correspondientes: medio tioglicolato fluido y caldo soya tripticasa Si el volumen final de cada contenedor del lote producido es mayor a 20 ml pero menor a 100 ml, utilizar un volumen de al menos 5 ml para inocular cada uno de los medios de cultivo correspondientes: medio tioglicolato fluido y caldo soya tripticasa Realizar las siembras en duplicado. 7.4 Incubación: Incubar el medio tioglicolato fluido entre 30 ºC a 36 ºC por 7 a 14 días. Del rango seleccionar una temperatura de incubación Incubar el caldo soya tripticasa entre 20 ºC a 25 ºC por 7 a 14 días. Del rango seleccionar una temperatura de incubación Examinar periódicamente los tubos incubados para registrar la evidencia de algún desarrollo Opcionalmente si es requerida para los fines de análisis, puede incluir alguna temperatura para microorganismos psicrofílicos, siendo la óptima de desarrollo entre 15 ºC a 20 ºC y termofílicos, con una temperatura óptima de desarrollo entre 43 ºC a 65 ºC Si se observa una floculación en el medio que dificulta diferenciar si es desarrollo microbiano o no, realizar subcultivos con al menos 1 ml entre los días tercero y séptimo después de incubación. Tanto el tubo original como el cultivo de traspaso deben incubarse y observarse por no menos de 14 días.
4 PRT Página 4 de Registros e Informes de los resultados: Registrar los resultados con el calificativo de Hubo desarrollo o No hubo desarrollo correspondiente a los medios de cultivo respectivos Si en el caldo soya tripticasa no hubo desarrollo informar como: No hubo desarrollo de microorganismos aerobios mesófilos Si en el caldo soya tripticasa hubo desarrollo informar como: Hubo desarrollo de microorganismos aerobios mesófilos Si en el medio tioglicolato fluido no hubo desarrollo informar como: No hubo desarrollo de microorganismos anaerobios mesófilas Si en el medio tioglicolato fluido hubo desarrollo informar como: Hubo desarrollo de microorganismos anaerobios mesófilos Anotar resultados en registro RG Registro Control de esterilidad Hemoderivados 8. REGISTROS 8.1 Registro Control de esterilidad Hemoderivados RG ANEXOS Anexo N 1 Registro Control de esterilidad Hemoderivados RG
5 PRT Página 5 de 5 Anexo N 1 Registro Control de esterilidad Hemoderivados Procedencia Fecha toma de muestra Fecha Solicitud Fecha inicio ensayo Tipo de muestras Hemoderivados y Control Ambiental Fecha término del ensayo Nº Solicitud Fecha informe Analista Informado por Análisis Control de Esterilidad de Hemoderivados Nº Muestra Destinatario Incubadora Nº Tº 30ºC Caldo Soya tripticasa (Aerobios mesófilos) Análisis Incubadora Nº Tº 35ºC Medio tioglicolato fluido (Anaerobios mesófilos) Observaciones Lectura Control Ambiental Cámara de Flujo laminar Bioterio Nº Muestra Fecha Hora inicio exposición Hora término exposición Ubicación placa Resultado Observaciones Lectura NHD: No hubo desarrollo NA: No aplica
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