Vigilancia de Arbovirus en el Perú

Transcripción

1 Vigilancia de Arbovirus en el Perú Tadeusz Kochel Capitán de Corbeta, Marina de los Estados Unidos Jefe del Departamento de Virología, Instituto de Investigación de Enfermedades Tropicales de la Marina de los Estados Unidos NMRCD (Peru)

2 DEFINICIÓN Término ecológico que se emplea para describir una amplia gama de virus transmitidos (principalmente, pero no exlusivamente) al hombre y a los animales por la picadura de artrópodos hematófagos, incluyendo mosquitos, garrapatas, lutzomias y dípteros que pican Transmitido por Artrópodo = Arbovirus

3 Más de 500 Arbovirus CARACTERÍSTICAS ARBOVIRALES Alrededor de 100 están asociados con enfermedades en humanos/animales 4 Familias están asociadas con enfermedades en humanos: Togaviridae Flaviviridae Bunyaviridae Arenaviridae

4 ARBOVIRUS Asociados con Enfermedades Humanas Family Genus Associated Human Illness Togaviridae Alphavirus 1 VEE, EEE, WEE, Mayaro, Ross River, O nyong-nyong, Chikungunya Flaviviridae Flavivirus 2 Dengue, YF, SLE, WNV, JE, TBE Bunaviridae Bunyavirus 3 Hantavirus, Phlebovirus, Nairovirus, Undiff Febrile Illness, Hantaviral Syndromes, Sandfly fever, Ross River, CCHF, Oro Arenaviridae Arenavirus Lymphocytic Choriomeningitis, S.A.H.F.

5 CARACTERÍSTICAS ARBOVIRALES Muchas infecciones arbovirales se consideran Virus Emergentes debido a: Urbanización Creciente fi ExplosiónDemográfica Incremento en los viajes aéreos fi Diseminación de Virus / Vectores Cambios ambientales fi Deforestación Natural y por Mano Humana Incremento de la Resistencia a los insecticidas fi Control Químico

6 Fuente de Muestras Vigilancia Global de Infecciones Emergentes Estudio de Vigilancia de Febriles Investigaciones de Brote

7 Evidencia del Patógeno Aislar el virus de una muestra aguda Aumento de 4 veces más en los niveles de anticuerpo IgM o IgG, comparando las muestras agudas y convalecientes

8 Curso de la Infección Días Posteriores al Inicio de los Síntomas Viremia IgM IgG

9 Viremia (1~7 días) Formas para identificar el virus: PCR (Reacción en cadena de la polimerasa) Aislamiento por cultivo celular

10 PCR RT - - _ - PCR Copiar varias veces una parte del virus La especificidad de esta identificación depende de los cebadores (primers) de la síntesis de la cadena de ADN Visualizar el gel mediante electroforesis

11 Gel de Corrida de Productos de PCR

12 Aislamiento del Virus en Cultivo Principios: Virus en la muestra Celular El virus puede infectar la célula El virus se replica en las células Visualizar el efecto citopático en la célula Anticuerpos de diagnóstico contra el virus Visualizar la interacción del virus con los anticuerpos

13 Células Infectadas A B C D

14 Inmunoflorescencia de Células Infectadas A B C

15 Información de Anticuerpos Sin tener una muestra aguda de buena calidad, no podemos aislar el virus. Teniendo las muestras aguda y convalesciente, podemos realizar el diagnóstico por medio de los anticuerpos IgM e IgG.

16 Respuesta de los Anticuerpos Días Posteriores al Inicio de los Síntomas Viremia IgM IgG La Diferencia de 4 veces más en la respuesta de anticuerpos IgM e IgG, entre la muestra convalesciente y la aguda, indica una enfermedad reciente.

17 Principios Generales del ELISA Sustrato Enzima Enzima marcada con anticuerpos anti-humanos Muestra de suero Antígeno de lisado viral

18 Resultados del ELISA

19 Anticuerpos contra los Serotipos de Dengue La Prueba de Neutralización en placa (PRNT) es usada para tipificar los anticuerpos contra un determinado virus. En un cultivo celular, el virus puede infectar las células, expandirse a las células vecinas y hacer que éstas produzcan placas (muerte celular) Si el anticuerpo específico para el virus está presente, éste puede inhibir la infección viral y no producir placas.

20 Simulacro de PRNT V V V V V V V Y X V V

21 Prueba de PRNT

22 Resultados del Estudio de Febriles en el Perú Localidad Número de Muestras Aislamientos Seroconversión Elisa IgM DEN ORO YF EEV MAY Chiclayito DEN Salitral Cuzco Chanchamayo San Juan Grupo C 5 EEV Yurimaguas DEN TOTAL Grupo C 5 EEV 22 DEN

23 Brote de Dengue en Guayaquil Ecuador Aislamientos # DEN-1 1 DEN-2 Genotipo Americano 3 DEN-2 Genotipo Asiático 32 DEN-2 Sin genotipo 10 DEN-3 3 DEN-4 6 Negativos 607 TOTAL de Muestras Analizadas 662

24 Brote de Dengue en el Noreste Peruano Número de Muestras 1654 Aislamientos 18 DEN 59 DEN-1 31 DEN-2 1 DEN-2 American 104 DEN-2 Asian 18 DEN-3 2 DEN-4 Seroconversion Elisa IgM DEN ORO FA EEV MAY

25 SE IDENTIFICARON 11 ARBOVIRUS COMO CAUSANTES DE ENFERMEDADES HUMANAS, INCLUYENDO 8 QUE NUNCA SE HABIAN DESCRITO EN EL PERU ANTES DE 1993 (OCTUBRE FEBRERO 1999) (1995) DEN-1 & 2, MAYARO (1997) DEN-1 (1995) DEN-2 ( ) DEN-1 (1994) EEV ID (1995) DEN-1 & 2, GRUPO C, GUAROA, ORO, EEV ID (1996) DEN-2, MAYARO (1997) DEN-1, ORO, MAYARO, EEV ID (1998) DEN-1, ORO, MAYARO, EEV ID, FA (1999) DEN-1, ORO, GRUPO C (1994) EEV ID (1997) MAYARO (1996) DEN-2 (1995) DEN-1, MAY, YF (1998) DEN-2 (1995) FA (1999) DEN-2 (1995) DEN-1, ALFA, MAY,FA (1996) DEN-2 (1995) DEN-1 (1996) DEN-1 & 2, MAYARO (1997) DEN-1 & 2 (1998) DEN-2, MAGUARI, MAY (1994) ORO, GRUPO C (1995) FA (1998) MAYARO, FA, PHLEB ANTES DE 1993: FIEBRE AMARILLA, DEN I, OROPUCHE, ENCEFALITIS EQUINA VENEZOLANA 1 AB DESPUES DE 1993: ALPHAVIRUS, ALFAVIRUS, DEN 2, GRUPO C, GUAROA, MAGUARI, MAYARO, FLEBOVIRUS EEV ID

26 Conclusiones Las técnicas de laboratorio se emplean para aislar e identificar el virus Aislamiento: Cultivo celular y animales Identificación: PCR, Secuenciamiento y Respuesta de Anticuerpos Virus que pueden ser aislados en el NMRCD: Dengue, Mayaro, Fiebre Amarilla, Encefalitis Equina Venezolana y Oropuche Las técnicas de laboratorio requieren un mes a partir de la fecha en que recibimos la muestra