Aportaciones. Dra Inés Fuentes Noriega Lab 113, conjunto E, Facultad de Química UNAM
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- Pilar Sevilla Torres
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1 Aportaciones Dra Inés Fuentes Noriega Lab 113, conjunto E, Facultad de Química UNAM
2 Introducción En el proyecto del desarrollo de un fármaco, actualmente se está dando importancia prioritaria al fármaco con propiedades específicas como un elemento integral del proyecto, estas propiedades de interés primordial incluyen: - Propiedades estructurales: Uniones hidrógeno, lipofilicidad, peso molecular, pka, área superficial polar, forma y reactividad. - Propiedades fisicoquímicas: Solubilidad, permeabilidad y estabilidad química. - Propiedades bioquímicas: Metabolismo (fase I y II), uniones a tejido y proteínas y transporte (salida, eflujo). - Farmacocinética y toxicidad: Depuración, vida media, biodisponibilidad, interacción fármaco-fármaco y LD50.
3 La estructura determina las propiedades del compuesto. Cuando esta estructura interactúa con el ambiente físico es a causa de sus propiedades fisicoquímicas (ejemplo, solubilidad). Cuando esta estructura interactúa con las proteínas, es por causa de sus propiedades químicas (ejemplo, metabolismo). A un nivel más alto, cuando las propiedades fisicoquímicas y bioquímicas interactúan con sistemas vivos es por causa de su farmacocinética y toxicidad, y se puede controlar estas propiedades del compuesto al modificar su estructura.
4 Se tendrá una mejor planeación, ejecución e interpretación de los experimentos a nivel de la clínica. Se reducirá el tiempo de investigación al conocer estas propiedades en relación a su actividad y estructura. El desarrollo farmacéutico será mas rápido y menos costoso, una vida de patente mas larga y una mejor aceptación hacia el paciente y mayor confianza en la seguridad y eficacia
5 Laboratorio de Biofarmacia En preclínica Se realizan estudios de: Validación de metodología analítica (métodos espectrofotométrico y CLAR). NOM 177, FDA y OMS. Perfil de solubilidad ph Determinación de pka por el método espectrofotométrico Determinación del coeficiente de determinación octanol/sol. Amortiguadora de ph 7.4 Cinética del compuesto in vitro: plasma/sangre total Unión a proteínas por el método de ultrafiltración y diálisis al equilibrio. Disolución intrínseca del compuesto a estudiar, por el método de Wood. Estudios de permeabilidad en células MDCK y CaCo2. Colaboración con Dra Lena Ruiz Farmacocinética preclínica. Colaboración con UNEXA.
6 Productos comerciales Perfiles de disolución aparente. Estudios en colaboración con empresas farmacéuticas.
7 Determinación de pka
8
9 DIALISIS AL EQUILIBRIO
10 Condiciones de diálisis al equilibrio Preparación de soluciones Solución amortiguadora de fosfatos M ph=7.4 Solución de albumina Solución de alfa-glicoproteína Solución patrón del fármaco Solución del fármaco en plasma Celda de menor grosor: solución amortiguadora 0.064M ph=7.4, Celda de mayor grosor: muestra del f rmaco en plasma (humano o rata) o solución de albúmina al 4% o sol de alfa glicoproteína Extracción en plasma. Cuantificación por algún método analítico
11 Método por ultrafiltración Se preparan soluciones del fármaco en albumina (45 mg/ml), en -glicoproteína (1 mg/ml) y en plasma humano por triplicado cada una. - Se colocan 0.5 ml de cada una en los cartuchos de ultrafiltración Nanospin 10,000 MWCO, se centrifugan por 30 minutos a rpm y se toman 100 ul del ultrafiltrado para analizarlos por CLAR. - Se corre una curva en el fluído correspondiente y se calculo la concentración del fármaco libre, de tal forma que la unida se calculó por: Cunido = Ct - Clibre.
12 Técnica de ultrafiltración Mezcla Introducción dentro de la unidad de filtrado Aplicación de vació a sequedad Macrosoluto ligando y Obtención del ligando permeable a la membrana
13 ESTUDIOS DEPERMEABILIDAD: Concentración inhibitoria 50 (CI50) Proliferación celular Inocular células en placas tipo ELISA Administrar Casiopeína III-ia Extraer el colorante Teñir con sulforrodamina B Fijar células Analizar con un lector de microplacas a 564 nm
14 Estudios de permeabilidad Proliferar células Inocular en celdas Transwell Medir resistencia transepitelial Verificar integridad de la membrana Muestrear en intervalos de 15 minutos Según la dirección del ensayo, colocar la Casiopeína IIIia
15 Control de calidad de la membrana Colocar en la parte apical Lucifer yellow Exponer el tiempo total del experimento en las mismas condiciones Muestrear Si el paso del lucifer yellow es mayor al 1% se rechaza Leer en fluorometro A 485nm de excitación y 538 nm de emisión
16 Métodos para determina la disolución intrínseca Método de la tableta suspendida Método del disco rotatorio Método del disco estático MÉTODO DE WOOD
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18 Perfil general de disolución Intrínseca
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