Validación del método analítico por cromatografía líquida de alta presión, para la determinación de Montelukast, 5mg tabletas.

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1 Validación del método analítico por cromatografía líquida de alta presión, para la determinación de Montelukast, 5mg tabletas. Autores: Luis Felipe Murillo Bolaños y PhD.Eduardo Arguedas Chaverri Resumen El presente trabajo se realizó con el fin de validar un método analítico por cromatografía líquida de alta presión, para la determinación de Montelukast, 5mg tabletas basado en la monografía oficial de la farmacopea Británica Los parámetros de validación evaluados incluyen: especificidad ante la matriz, linealidad y precisión del sistema, linealidad y precisión del método y estabilidad de las soluciones de prueba. Estos criterios de validación se aplicaron para las determinaciones de: valoración, uniformidad, disolución y sustancias relacionadas. Las pruebas realizadas se efectuaron mediante la determinación por cromatografía líquida de alta presión, los datos obtenidos para las diferentes preparaciones de prueba realizadas permitieron obtener resultados que se evaluaron contra criterios establecidos, logrando así garantizar la validación del método de análisis. Palabras claves: Validación, Montelukast, cromatografía liquida de alta presión, análisis químico. Abstract: The present work was carried out in order to validate an analytical method by high pressure liquid chromatography, for the determination of Montelukast 5mg tablets, based on the official monograph of the British Pharmacopoeia The validation parameters evaluated include: specificity of the matrix, linearity and precision of the system, linearity and precision of the method and stability of the test solutions. These validation criteria were applied for the determinations of: assay, uniformity, dissolution and related substances. The tests were carried out by determination using high pressure liquid chromatography, the data obtained for the different test preparations allowed us to obtain results that were evaluated against established criteria, which ensure the validation of the method of analysis. Key Words: Validation, montelukast, high performance liquid cromatography, chemical analysis.

2 Introducción La industria farmacéutica día con día se vuelve más exigente, esto debido a que posee en sus manos el bienestar de gran parte de la población, por lo aquellos métodos que se empleen para garantizar la calidad de sus productos, deben cumplir con todos los requerimientos vigentes. La presente investigación busca validar un método de análisis capaz de determinar la cantidad y el desempeño de la formulación de Montelukast. Una de las técnicas de análisis con la que se cuenta hoy día en la industria farmacéutica es la cromatografía líquida. La técnica de HPLC es probablemente el tipo más universal de procedimiento analítico; Ha logrado esta posición como resultado de la evolución constante del equipo utilizado para proporcionar mayores eficiencias a un tiempo de análisis más rápido con una incorporación constante de nuevos empacados de columnas. (1) Una vez definida la técnica y los diferentes parámetros a emplear para la cuantificación es necesario validarla. La validación proporciona un alto grado de confianza y seguridad del método analítico y se realiza con carácter obligatorio cuando se desarrolla un nuevo procedimiento, ya que permite asegurar que el método propuesto hace lo que tiene que hacer. (2) La validación de un procedimiento analítico es el proceso que estable, mediante estudios en laboratorio, que las características de desempeño del procedimiento cumplen los requisitos para las aplicaciones analíticas prevista. (3) Permitiendo de esta forma obtener datos confiables, dentro de un rango de trabajo determinado. Implica además la demostración de las fuentes de variabilidad, el error sistemático y el azar de un procedimiento, no solo dentro de la calibración sino en el análisis de muestras reales, como bien menciona el reglamento de validación de métodos analíticos. (4) Los análisis realizados en la industria farmacéutica tienden cada vez más a emplear métodos muy selectivos, en donde la influencia que puedan presentar otros componentes sea lo más escasa posible a la hora de emitir un resultado. De esta manera los métodos cromatográficos presentan un gran interés, pero aun empleando estos es muy

3 difícil asegurar que no se presentan interferencias, porque siempre existe la posibilidad de encontrar alguna sustancia hasta el momento desconocida que logre interferir. (5) El Montelukast es un antagonista selectivo del receptor de leucotrieno que inhibe el receptor cisteinil de leucotrieno. La ocupación del receptor de leucotrieno y cisteinil de leucotrienos se ha relacionado con la fisiopatología del asma que incluye edema de las vías respiratorias, contracción del musculo liso y actividad celular alterada relacionada con el proceso inflamatorio, el cual contribuye a los signos y síntomas del asma. Los cisteinil leucotrienos también se liberan en la mucosa nasal después de la exposición a alérgenos lo cual provoca los síntomas relacionados con la rinitis alérgica. (6) El método de análisis para Montelukast debe cumplir con todos los parámetros de validación requeridos por la legislación vigente, tanto a nivel nacional como se solicita en la guía de validación de métodos analíticos del Ministerio de salud, así como a nivel internacional basado en las exigencias de la Farmacopea Británica. Materiales y métodos - La técnica analítica utilizada se basó en la farmacopea británica 2017, según su monografía para: Montelukast tabletas masticables. - Los criterios y técnicas de validación fueron establecidos de acuerdo a las Farmacopeas americana y británica. Resultados y discusión El método de análisis presentó especificidad ante la matriz de su formulación, para todas las determinaciones evaluadas: Valoración, sustancias relacionadas, disolución y uniformidad. En las siguientes imágenes se muestra los cromatogramas obtenidos para cada determinación. Imagen 1. Especificidad para: Valoración y Sust. Relac. Fuente Propia.

4 uniformidad. Los resultados obtenidos se resumen a continuación. Especif. Prueba de Prueba Prueba de Prueba de valoración de disolución sust. unifor. relacionadas Imagen 2. Especificidad para: Uniformidad. Fuente propia. I R> R 2 >0.98 0, O F.calc. > F. Critico Es mayor Es mayor Es mayor Es mayor Tabla 1. Determinación de la linealidad del sistema. Imagen 3. Especificidad para: Disolución. Fuente propia. La especificidad es la capacidad de un método para determinar el analito en presencia de otros componentes potenciales. (7). En todos los casos evaluados el sistema analítico fue capaz de ser específico. La linealidad de un procedimiento analítico es la capacidad para obtener resultados de prueba, que son proporcionales ya sea por medio de transformaciones matemáticas bien definidas o en forma directa a la concentración del analito en la muestras en un intervalo determinado. (4) Se evaluó la linealidad para Valoración, sustancias relacionadas, disolución y La evaluación de la linealidad demostró que para cada una de las pruebas indicadas por el método de análisis de la BP 2017 para Montelukast se cumple con la linealidad estipulada para las preparaciones del estándar. La linealidad del método presentó de igual forma un comportamiento totalmente lineal. La precisión del sistema para valoración, uniformidad y disolución fue determinada a diferentes niveles de concentración. Concentración RSD Valoración RSD uniformidad RSD disolución Tabla 1. Determinación de la precisión del sistema.

5 La especificación para la precisión del sistema se estableció en menor a 2.0%, en los datos obtenidos para la precisión del sistema según tabla anterior evidencian que el sistema es preciso para todas las concentraciones de trabajo, por tanto la variación obtenida al realizar evaluaciones repetitivas se considera aceptable. La repetitividad y precisión intermedia para la uniformidad y para disolución, se realizó mediante la preparación de dos grupos de tres muestras preparados por dos analistas, durante dos días. La evaluación se realizó por medio de los coeficientes de variación de la repetitividad (CVr) y el coeficiente de precisión intermedia (CVR), para ambos la especificación se considera conforme al ser menores a 2%. Las sustancias relacionadas para Montelukast 5mg tabletas se determinan en la misma preparación realizada para valoración, pero a diferencia de la valoración las respuestas a considerar son los picos secundarios que se encuentran en concentraciones muy bajas, estos picos poseen máximos de especificación en dependencia de si la impureza se considera especifica de acuerdo a tiempos relativos o inespecífica. El límite de detección se establece para asegurar que el sistema cromatográfico es capaz de detectar estas impurezas de concentración muy baja. La concentración a la cual se determinó el límite de detección fue de mg/ml, esta concentración es inferior al límite de descarte establecido por el método BP 2017 Conclusiones El estudio de las moléculas, antes de iniciar el desarrollo analítico es de vital importancia para determinar cuidados especiales con la preparación de las muestras, así en el caso del Montelukast es de critico la protección a la luz de todas las preparaciones. Las industrias farmacéuticas deben contar con métodos de análisis confiables, que garanticen la calidad de los productos, por lo que es necesario realizar la validación de estos. El método de análisis es específico, ya que no hay interferencias en la cuantificación del Montelukast en todas

6 las pruebas de control de calidad a realizar al producto. Se considera exacto el método de análisis para Montelukast, ya que los porcentajes de recuperación se encuentran ente 98 y 102%. El amplio rango de trabajo utilizado para las linealidades (60% a 140%) evidencia que el método es apto para trabajar dentro de las especificaciones para el producto que presentan rangos inferiores. El método para la cuantificación de Montelukast es preciso, ya que las desviaciones estándar relativas, en las respectivas pruebas son menores al 2%. Las determinaciones para valoración, uniformidad, disolución, y sustancias relacionadas para Montelukast son lineales, obteniéndose un coeficiente de correlación lineal mayor o igual a El método validado cumplió con todos los parámetros descritos para el análisis de Montelukast según la farmacopea Británica ya que no se realizó modificación alguna en las condiciones cromatográficas. Recomendaciones Para el análisis de precisión, sería conveniente el análisis interlaboratorial el cual fortalecería aún más la validación del método de análisis. Realizar pruebas de efecto de la filtración con filtros de otros materiales ante problemas de existencias del insumo solicitado. Aplicar al análisis de datos más pruebas estadísticas que permitan obtener mayor control de los resultados obtenidos. Incluir en el proceso de validación del método analítico la prueba de robustez la cual evaluaría el desempeño del método ante variaciones que pueden ocurrir. Considerar Valorar la colocación de filtros para el sistema de iluminación que disminuyan posibles efectos sobre moléculas fotosensibles. Bibliografía 1. Samanidou, V., y Karageorgou, E. (2010). Monitoreo de Medicamentos por HPLC: Desarrollos Recientes. Nueva York: Nova Science Publishers, Inc. 2. Fernández, A y otros. (2002 enero-abril).revista cubana de

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