Nombre: Eduardo Pincheira Tapia Docentes: Marcelo Castillo N. Juan Luis Castillo N. Fecha: 01/06/2006
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1 Nombre: Eduardo Pincheira Tapia Docentes: Marcelo Castillo N. Juan Luis Castillo N. Fecha: 01/06/2006
2 Introducción El sistema inmune es un complejo sistema donde se mezclan acabados procesos físicos, químicos y bioquímicos. Del correcto funcionamiento de estos procesos depende una respuesta inmune eficaz y completa. Al fallar cualquiera de estas procesos, se producen fallas que desencadenan en anormalidades en la respuesta inmune, con nefastas consecuencias para los afectados.
3 Enfermedad granulomatosa crónica (EGC) La EGC es una inmunodeficiencia primaria poco frecuente que afecta a los fagocitos. Es un desorden intracelular donde los fagocitos son incapaces de eliminar los microorganismos fagocitados. Corresponde a una falla en el estallido respiratorio de los fagocitos. Tiene una tasa de 1/ nacimientos.
4 Estallido respiratorio El estallido respiratorio tiene por objetivo generar ERDO`s que actúan como sustancias microbicidas, entre estas tenemos: - Anión superóxido: O2 O - Peróxido de hidrogeno: H2O2H - radical hidroxilo: (-OH) - Ácido hipocloroso (HOCl) La generación de estas especies reactivas microbicidas esta mediada por un complejo enzimático denominado adenina dinucleótido fosfato oxidasa (NADPH oxidasa)
5 Estallido respiratorio Fuente:
6 NADPH oxidasa Es un sistema multicomponente formado por: elementos de membrana: (flavocitocromo b588) elementos citosólicos: (p40, p47, p67, rac 1 y 2)
7 NADPH oxidasa inactiva Fuente:
8 Activación de la NADPH oxidasa Cuando los microorganismos se adhieren a los receptores de membrana estos componentes se ensamblan en la membrana celular o de la vacuola fagocítica. Cuando los fagocitos son activados, los componentes citosólicos se transfieren a la membrana e inducen la actividad enzimática por un cambio conformacional en el flavocitocromo. La activación de NADPH oxidasa provoca la translocación de las subunidades p47-phox, phox, p40-phox, phox, p67-phox phox y los componentes rac a la membrana del flavocitocromo.
9 Activación de la NADPH oxidasa 2 Fuente:
10 Proceso bioquímico La NADPH oxidasa cataliza la siguiente reacción: Se produce el superóxido, y con reacciones ulteriores se producen los otros derivados del O2 O que terminan por cumplir su función microbicida.
11 Activación NADPH oxidasa Fuente:
12 Enfermedad granulamatosa crónica La EGC es una patología de carácter genético que se presenta con una deficiencia en el estallido respiratorio por parte de las células fagocíticas. La EGC se clasifica dependiendo el modo de herencia: Recesiva ligada al cromosoma X (60%) Autosómica recesiva (40%)
13 Patrón de herencia de EGC Fuente:
14 Clasificación de la EGC Según el subcomponente del complejo NADPH-oxidasa afectado: Ligada al cromosoma X: (60%) gp91-phox. phox. (60%) Forma autosómica recesiva: p47-phox phox (30%) p67-phox phox (5%) p22-phox phox (5%)
15 Base molecular de la enfermedad EGC ligada a X: Se debe a mutaciones en el gen CYBB que codifica para la subunidad gp91-phox. phox. Este gen se localiza en el locus p21 del cromosoma X. Se trata de una deleción. Se a investigado y se encontraron sustituciones de bases. Cromosoma X Fuente:
16 Cromosoma X EGC Fuente:
17 EGC p47-phox phox deficiente Es la alteración autosómica recesiva más común. El gen que codifica para esta subunidad es el gen NCF-1, localizado en el cromosoma 7 (7q11.23) Este gen está constituido por pares de bases. La mayoría de los pacientes que padecen de esta deficiencia, presentan una deleción del dinucleótido Delta GT.
18 Cromosoma 7 NCF-1 Fuente:
19 EGC p22-phox phox deficiente Es de escasa prevalencia (5%). Consiste en una mutación del gen 16q24 del cromosoma 16. Corresponde al elemento redox del citocromo b588. Las principales mutaciones que caracterizan a este grupo son: inserciones de pares de bases. deleciones. mutaciones de codones sin sentido. mutaciones en sentido erróneo. Fuente:
20 EGC p67-phox deficiente Afecta al 5% de los enfermos de EGC. P67-phox esta compuesta por 526 aminoácidos. Es codificada por el gen NCF-2 2 localizado en el cromosoma 1. (1q25) Se han detectado 7 alelos mutantes que conducen a este trastorno. Estas mutaciones provocan una marcada inestabilidad del ARNm, de la proteína que provoca la inactividad de la NADPH oxidasa. Fuente:
21 p67-phox phox deficiente Fuente:
22 p67-phox phox deficiente Investigación 2 tipos de mutaciones donde el mutante es capaz de activar a la NADPH oxidasa in vitro a 25 C. Se ha descrito una deleción que elimina la interacción de la proteína p67-phox phox con rac 1, la cual afecta la translocación de la misma al citocromo b558. En pacientes que padecen de esta variante no solo la subunidad p67-phox phox de la enzima está deficiente, sino que la deficiencia o pérdida de la subunidad p40-phox phox también se hace presente en esta enfermedad.
23 P67-phox deficiente Fuente:
24 Manifestaciones clínicas. Esta enfermedad se caracteriza por: infecciones recurrentes causadas por gérmenes piógenos. Catalasa (+) linfoadenopatía marcada hepatoesplegnomegalia neumonía, rinitis conjuntivitis dermatitis diarrea crónica Obstrucción intestinal
25 Manifestaciones clínicas Se observan infecciones en piel, ganglios linfáticos, hígado, bazo, pulmones y huesos Se forman abscesos que requieren ser drenados quirúrgicamente. Las anormalidades en el tracto urinario son relativamente frecuentes. Generalmente las infecciones no son controladas por la invasión neutrofílica y pueden dar lugar a la formación de granulomas que producen obstrucciones a diversos niveles (uretral, pilórico, esofágico, etc.)
26 Formación de granulomas. Fuente:
27 Diagnóstico Prueba de nitroazul de tetrazolio (NBT). Consiste en aislar los neutrófilos de los pacientes y estimularlos en presencia de azul de tetrazolio. En los neutrófilos normales, el superóxido que se produce durante el estallido respiratorio reduce el colorante nitroazul de tetrazolio. En los neutrófilos de los enfermos con EGC, las partículas del colorante son fagocitadas, pero la reacción de reducción del colorante está ausente o notablemente disminuida.
28 NBT O2 Nitroazul de tetrazolio Fagocito normal Nitroazul de tetrazolio reducido O2 Nitroazul de tetrazolio Fagocito en EGC Nitroazul de tetrazolio no reducido
29 NBT Fuente: Genetic Correction of p67phox Deficient Chronic Granulomatous Disease
30 Diagnóstico Disminución de la captación de O2 O VHS, hemograma. Pruebas de función hepática. Mediante la biopsia de tejidos se pueden mostrar los granulomas presentes en los tejidos. También se estudian curva de destrucción de microorganismos.
31 Curva de destrucción de microorganismos
32 Inmunoelectroforesis Se pueden demostrar específicamente la proteína deficiente, por medio de inmunoelectroforesis e inmunodetección. Fuente:
33 Diagnóstico Actualmente se puede realizar el diagnóstico prenatal en pacientes que han perdido la expresión de la proteína p47-phox phox debido a la detección de un punto de mutación en el gen NCF-1. En el 2003, se introdujo un método diagnóstico molecular prenatal para detectar la EGC ligada al cromosoma X a través de un sistema de cromatografía líquida de alta resolución. El ensayo de dihidrorrodamina 123 (DHR) es una prueba efectiva, que sirve para determinar la producción de las especies reactivas derivadas del oxígeno.
34 Tratamiento Principalmente sintomático. Es necesario el tratamiento intenso de las infecciones con antibióticos y antifúngicos de amplio espectro. Actualmente se usa el interferón gamma. Terapia génica somática en el sistema hematopoyético. Múltiples reportes han demostrado la reconstitución de la actividad de la NADPH oxidasa por la transferencia génica a la médula de pacientes con EGC y cultivos de líneas celulares in vitro.
35 Tratamiento La transfusión de granulocitos se ha considerado una modalidad terapéutica para las infecciones bacterianas y micóticas recurrentes en pacientes con desórdenes funcionales en los neutrófilos. Se ha estudiado que la NADPH oxidasa 1 (Nox 1), un producto de las células epiteliales del colon, restauran la producción de superóxido en los neutrófilos diferenciados ex vivos a partir de células madre CD34(+) obtenidas de sangre periférica de pacientes con EGC ligada al cromosoma X.
36 Tratamiento En el año 2003 se reportó el primer caso de EGC trasplantado exitosamente con células madre obtenidas de sangre de cordón umbilical. Después de un año de trasplantado desaparecieron las manifestaciones clínicas y se normalizó la función de los neutrófilos con una integración completa de los linfocitos donados.
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