La mayor parte de las meningitis estan causadas por cepas no capsuladas y afectan a adultos con una mortalidad del 10%

Transcripción

1 La introduccion de la vacuna conjugada frente a H. influenzae produjo una desaparicion casi absoluta de portadores faringeos asintomáticos y de la incidencia de meningitis y otras enfermedades invasivas La mayor parte de las meningitis estan causadas por cepas no capsuladas y afectan a adultos con una mortalidad del 10%

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4 Detección de la presencia del microorganismo en el LCR mediante cultivo o detección de ADN bacteriano Cultivo LCR gold standard Agente causal Sensibilidad antimicrobiana Baja rentabilidad en pacientes que han recibido ATB Herramientas adicionales Pruebas rápidas PCR Hemocultivos Marcadores séricos de inflamación Antígenos urinarios

5 Muestra LCR LCR es la muestra clinica de mayor urgencia en el laboratorio de microbiología y debe ser procesado inmediatamente. La toma de la muestra debe realizarse en las máximas condiciones de asepsia. LCR debe obtenerse sin tratamiento antibiótico siempre que sea posible Otras muestras: pus de abscesos o biopsias

6 LCR se obtiene punción lumbar: limpiar una superficie de 10 cm 2 con iodopovidona, alcohol iodado o clorhexidina 0,5%, dejar actuar 1 minuto Recoger la muestra en tubo estérill Punción traumática o pacientes con hemorragia subaracnoidea la muestra de LCR puede coagularse, No usar muestra heparinizada para cultivo Derivaciones externas o internas : LCR se obtiene a través del catéter ventricular o lumbar aplicar antiséptico en la llave antes y después de obtener la muestra.

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8 Examen macroscópico: color- turbidez-presencia de coagulo. Meningitis bacteriana aspecto turbio o purulento con presión de salida elevada Recuento celular: Pleocitosis Leucocitos mm 3. con predominio de PMN (>90%) Excepción L. monocytogenes LCR claro, ligeramente opalescente células menos de 1000 mm 3 predominio mononuclear. Pacientes con recuento celular bajo peor pronóstico Proteinorraquia: elevada 1-1,5g/l Glucorraquia: disminuida menos del 40% de glucemia

9 Sensibilidad de distintas técnicas diagnósticas Calidad de la muestra Inoculo Rapidez en procesamiento Conservación Clin Microbiol Rev 2010,

10 Transportar inmediatamente y entregar en mano. Procesar de inmediato: en caso de no ser posible mantener a TA Criterios de rechazo: se reducen al máximo. No aceptar muestra no identificada muestras en recipientes no estériles ni con conservantes

11 Debido a la baja carga microbiana el volumen de muestra condiciona la sensibilidad de los diferentes métodos diagnósticos. Pero dada la dificultad de obtención de la muestra cualquier volumen debe ser aceptado Importante especificar las determinaciones que se solicitan Para el estudio de bacterias habituales y virus: 1 ml para cada uno hongos 2 ml micobacterias 2 ml Si no se dispone de volumen suficiente: priorizar en función de sospecha clínica

12 LCR Procesamiento Centrifugar Examen directo Fresco / giemsa Gram Ziehl Neelsen Tinta china Cultivo Incubar a 35 - Agar sangre ovina 37 C 5% CO 2 Agar chocolate Medios líquidos de enriquecimiento Simbras especiales (solicitud)

13 La manipulacion de la muestra debe llevarse a cabo en cabina de seguridad biológica Si se tiene previsto realizar pruebas moleculares reservar parte de la muestras en tubo estéril refrigerado La centrifugación en citocentrífuga tiene mayor sensibilidad que la convencional Centrifugación convencional: 1 ml 10 min 2000g. Reservar el sobrenadante para otros estudios resuspender el sedimento con vortex, no con pipeta ya que las células pueden quedar adheridas a las paredes del tubo

14 Sensibilidad coloracion de Gram % Inoculo bacteriano Directo positivo < 10 3 UFC/ml 25% UFC/ml 60% > 10 5 UFC/ml 97%

15 Microorganismo Sensibilidad S. pneumoniae 69-93% H. influenzae niños 50-65% H. influenzae adultos 25-33% N. meningitidis 89-49% L. monocytogenes 23-63% La observación de microorganismos en la coloración de Gram del LCR es la medida mas rápida y directa para orientar el diagnóstico. Por si solo no permite identificar inequívocamente el microorganismo Un resultado negativo no descarta el diagnóstico. La sensibilidad disminuye con el tratamiento antibiótico Clin Microbiol Rev 2010,

16 Test comerciales que contienen partículas de látex con anticuerpos dirigidos contra antígenos capsulares de H. influenzae, S. pneumoniae, N. meningitidis. Microorganismo Sensibilidad H. Influenzae b % S. pneumoniae % N. meningitidis 22-93% Clin Microbiol Rev 2010,

17 Utilidad paciente con fisicoquímico LCR patológico, Coloración de Gram no bacterias, cultivo negativo. Pacientes que han recibido antibióticos previos a la punción lumbar La sensibilidad disminuye cuando el paciente ha recibido antibióticos previos a la punción lumbar

18 Los métodos moleculares (PCR) no sustituye el cultivo, son complementarios Ventajas PCR en tiempo real permite identificar y cuantificar el producto amplificado. Rapidez de los resultados. PCR tiene mayor sensibilidad que el cultivo, su sensibilidad no se ve afectada por el uso de atb previos Desventajas Personal entrenado Falta de estandarización de los protocolos Elevado costo Contaminación en sistemas abiertos