RIDASCREEN siga. Ref. G09035
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- Carla Cuenca Sosa
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1 RIDASCREEN siga Ref. G09035 R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, D Darmstadt, Alemania Tel.: +49 (0) / Fax: +49 (0)
2 1. Uso previsto Para diagnósticos in vitro. RIDASCREEN siga es un inmunoensayo enzimático para la determinación cuantitativa de IgA secretora humana (siga) en muestras de heces. 2. Resumen y descripción del ensayo IgA es la más heterogénea de todas las inmunoglobulinas humanas. Los anticuerpos IgA están presentes en fluidos corporales externos y constituyen una importante barrera defensiva contra patógenos. La concentración de siga en las heces permite sacar conclusiones sobre el estado de defensa autoinmune de la mucosa intestinal. La IgA está presente en forma monomérica (miga), polimérica (piga) y secretora dimérica (siga). La IgAsecretora (siga) consiste en dos moléculas monoméricas de IgA, una cadena J y un componente secretor (SC). El componente secretor es un polipéptido con una masa molecular de 70 kda. El componente secretor es sintetizado por las células epiteliales de la mucosa del tracto gastrointestinal, respiratorio y urogenital y por las glándulas salivares, lacrimales y mamarias. Las células plasmáticas del espacio subendotelial de la mucosa segregan un complejo compuesto de dos moléculas IgA enlazadas a través de la proteína J. Este complejo se liga al componente secretor situado en la superficie de la célula epitelial. Después de ligarse, la siga es transportada selectivamente a través de la célula epitelial por acción de receptores epiteliales y liberada por exocitosis en la superficie de la mucosa. De este modo, la IgA secretora (siga) es transportada en grande cantidades, p. ej., a la superficie de la mucosa intestinal. La IgA secretora puede encontrarse también en otras secreciones corporales como, p. ej., leche materna, saliva, lágrimas y mucosidad nasal y traqueobronquial. La determinación de las concentraciones de siga en heces puede proporcionar información sobre el estado funcional del tejido linfoide asociado tubo digestivo (GALT), el sistema inmune del intestino. siga es un indicador del rendimiento secretor y del nivel de estimulación de las células plasmáticas en la submucosa intestinal. La deficiencia de siga es un reflejo de una baja actividad del sistema inmune de la mucosa intestinal, mientras que niveles altos de siga indican un aumento de la actividad del sistema inmune intestinal. Habida cuenta de la potente acción antiinflamatoria de la IgA, el aumento de las concentraciones fecales de siga sugiere la presencia de respuestas inflamatorias locales en la mucosa intestinal. RIDASCREEN siga
3 RIDASCREEN siga para detección rápida y fiable: Estado funcional del tejido linfoide asociado al tubo digestivo. o niveles de siga bajos: actividad reducida del sistema inmune de la mucosa, o niveles de siga altos: aumento de la actividad del sistema inmune de la mucosa. Signos de función defensiva inmunológica mermada de la mucosa intestinal (mayor susceptibilidad a infecciones, enfermedades alérgicas). Inflamación local de la mucosa intestinal. Enfermedades autoinmunes. 3. Principio de ensayo RIDASCREEN siga utiliza anticuerpos específicos según un método tipo sándwich.. Los anticuerpos policlonales contra epitopos de siga humana se aplican a la superficie de los pocillos de la placa. Se pipetea en los pocillos de la placa una suspensión de la muestra de heces del paciente objeto del ensayo, y se incuba. Tras el paso de lavado, se realiza una segunda fase de incubación junto con un anticuerpo monoclonal que se conjuga con peroxidasa de rábano picante. En presencia de siga, se forma un complejo sándwich formado por los anticuerpos inmovilizados, siga y anticuerpos conjugados. Los anticuerpos marcados con enzima no unidos se eliminan durante una siguiente fase de lavado. Tras añadir el sustrato, la enzima unida cambia el color de la solución (incolora hasta ese momento) en los pocillos de la placa de pocillos, tornándose azul si el ensayo es positivo. Al añadir el reactivo de parada, el color cambia de azul a amarillo. La absorbancia es proporcional a la concentración de siga presente en la muestra. RIDASCREEN siga
4 4. Reactivos suministrados Un kit es suficiente para 96 determinaciones. Plate 96 determinaciones Placa de pocillos, 12 tiras de pocillos (divisibles) en el portatiras; recubiertos con los anticuerpos policlonales (de conejo) contra siga humana Extract 10x 100 ml Tampón de extracción y dilución (concentración 10 x); para extracción y dilución inicial de muestras de heces; solución salina tamponada con fosfato; contiene Tween 0,1% y NaN 3 0,1% Diluent ml Tampón de dilución de muestra; solución salina tamponada con proteína; contiene NaN 3 0,1%; listo para usar; color rojo Wash 10x 100 ml Tampón de lavado (concentración 10 x); solución salina tamponada con fosfato; contiene timerosal 0,1% y 0,1% detergente Calibrador tapa transparente High control + 1 ml Calibrador (para calibración estándar); contiene NaN 3 0,1%; listo para usar 1 ml Control alto; contiene NaN 3 0,1%; listo para usar tapa roja Low control + 1 ml Control bajo; contiene NaN 3 0,1%; listo para usar tapa verde Conjugate 12 ml Anticuerpo monoclonal (de ratón) conjugado con peroxidasa contra siga humana en solución proteica estabilizada; listo para usar SeroSC 12 ml Sustrato; peróxido de hidrógeno / tetrametilbenzidina (TMB); listo para usar. Stop 12 ml Reactivo de parada, ácido sulfúrico 1 N, listo para usar Información detallada sobre sustancias peligrosas conforme a los requisitos de etiquetado. Para más información, consultar las hojas de datos de seguridad (MSDS) de RIDASCREEN siga
5 5. Instrucciones de almacenamiento Todos los reactivos deben almacenarse a 2 8 C y pueden utilizarse hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta. El tampón de lavado diluido puede utilizarse hasta 4 semanas como máximo si se conserva a 2-8 C. Evitar la contaminación microbiana. Una vez alcanzada la fecha de caducidad, no es posible garantizar la calidad. Debe abrirse la bolsa de aluminio que contiene las tiras de pocillos sin que se rompa el precinto de seguridad. Cualquier tira de pocillos que no vaya a utilizarse deberá retornarse inmediatamente a la bolsa de aluminio y almacenarse a 2-8 C. El sustrato incoloro debe protegerse también de la luz directa para evitar que se descomponga o se vuelva azul debido a la oxidación automática. No utilizar el sustrato si ha virado a color azul. 6. Reactivos adicionales y accesorios necesarios 6.1. Reactivos - Agua destilada o desionizada 6.2. Accesorios - Microbalanza - Mezclador de vórtice (opcional, ver 9.4.) - Micropipetas de l y 1 ml - Probeta (1000 ml) - Cronómetro - Equipo de limpieza de microplacas o pipeta multicanal (300 µl) - Lector de microplacas (450 nm, longitud de onda de referencia 620 nm) - Papel de filtro (toallas desechables) - Recipiente para residuos de laboratorio con solución de hipoclorito 0,5% 7. Precauciones para usuarios Para diagnósticos in vitro exclusivamente. Este ensayo debe realizarlo exclusivamente personal de laboratorio cualificado. Respetar las directrices para el trabajo en laboratorios médicos. Respetar el manual de instrucciones del procedimiento de ensayo. No pipetear muestras o reactivos con la boca. Evitar el contacto con hematomas de la piel o membranas mucosas. Llevar ropa de protección adecuada para manejar reactivos o muestras (guantes, bata de laboratorio y gafas de protección) y lavar las manos al término del procedimiento de ensayo. No fumar, comer o beber en las zonas en las que se estén utilizando las muestras o los reactivos. RIDASCREEN siga
6 Para más información, consultar las hojas de datos de seguridad (MSDS) en Las muestras de heces deben tratarse como potencialmente infecciosas y manejarse de acuerdo con lo establecido en las normativas de seguridad nacionales. El tampón de lavado contiene timerosal 0,1% como conservante. Esta sustancia no debe entrar en contacto con la piel o con las mucosas. El calibrador, el control alto, el control bajo, el tampón de extracción y el tampón de dilución de muestras contienen NaN 3 al 0,1% como conservante. Esta sustancia no debe entrar en contacto con la piel ni con la membrana mucosa. El peróxido de hidrógeno (sustrato) puede causar quemaduras. Manejar con precaución. El reactivo de parada contiene ácido sulfúrico 1 N. Evite el contacto con piel y ropa. Si se contamina la piel con el reactivo, aclárela con agua. Todos los reactivos y materiales que entren en contacto con muestras potencialmente infecciosas deben tratarse con desinfectantes adecuados o esterilizarse a 121 C en el autoclave durante por lo menos una hora. PRECAUCIÓN: para evitar la formación de gases tóxicos, neutralizar cualquier residuo líquido que contenga reactivo de parada antes de eliminarlo en solución de hipoclorito. Eliminar correctamente todos los reactivos y materiales usados. Consultar las normativas nacionales aplicables en materia de eliminación de residuos. 8. Obtención y almacenamiento de muestras Las muestras de heces deben transportarse refrigeradas siempre que sea posible y conservarse a 2-8 C antes de realizar el ensayo. Recomendamos la preparación inmediata de la muestra o conservarla como mínimo a 20 C. Evitar congelar y descongelar la muestra innecesariamente. No guardar las muestras de heces en recipientes de transporte que contengan materiales con conservantes, sueros animales, iones metálicos, agentes oxidantes o detergentes porque pueden interferir con el ensayo RIDASCREEN siga. RIDASCREEN siga
7 9. Procedimiento de ensayo 9.1. Información general Los reactivos y la placa de pocillos deben adquirir temperatura ambiente (20-25 C) antes de la utilización. No sacar las tiras de pocillos de la bolsa de aluminio hasta que hayan alcanzado temperatura ambiente. Mezclar a fondo los reactivos inmediatamente antes de usarlos. Tras su uso, las tiras de pocillos (en bolsas selladas) y los reactivos deben almacenarse a 2-8 C. Una vez usadas, las tiras de pocillos no podrán usarse de nuevo. No utilizar los reactivos y las tiras de pocillos si el envase está dañado o los viales tienen pérdidas. Para evitar la contaminación cruzada, las muestras no deben entrar en contacto directo con los componentes del kit. No realizar el ensayo en condiciones de luz solar directa. Recomendamos cubrir la placa de pocillos o colocar encima una película plástica para evitar pérdidas por evaporación Preparación del tampón de lavado Mezclar 1 parte de tampón de lavado concentrado Wash 10x con 9 partes de agua destilada (1:10). Vierta 100 ml de concentrado en una probeta de 1000 ml y rellene el resto con agua destilada. Calentar previamente el concentrado en baño maría a 37 C para disolver los posibles cristales presentes Preparación del tampón de extracción Mezclar 1 parte de tampón de extracción concentrado Extract 10x con 9 partes de agua destilada (1:10). Vierta 100 ml de concentrado en una probeta de 1000 ml y rellene el resto con agua destilada. Calentar previamente el concentrado en baño maría a 37 C para disolver los posibles cristales presentes Preparación de las muestras Pesaje y suspensión de muestras Recomendamos conservar la muestra a -20 C hasta el momento de la preparación. Dejar que las muestras congeladas adquieran paulatinamente temperatura ambiente. Pesar exactamente 100 mg de muestra de heces en un tubo de ensayo etiquetado y añadir con pipeta exactamente 5 ml de tampón de extracción diluido (dilución 1:50). Alternativamente es posible pesar 80 a 130 mg de muestra de heces y suspenderla en un volumen proporcionalmente menor o mayor (ver tab. 1) de tampón de extracción diluido (para garantizar que se mantiene la proporción (1:50)). RIDASCREEN siga
8 Tab. 1: Datos sobre las cantidades requeridas de tampón de extracción diluido en función de la cantidad de heces pesada (factor de dilución constante de 1:50) Peso [ mg ] Volumen [ ml ] 80 4, , , , , , , , , , ,50 Si la muestra de heces se suspende nuevamente en un volumen constante de 5 ml de tampón de extracción, debe tenerse en cuenta el factor de dilución variable en la evaluación (ver tab. 2). Tabla 2: Especificación del factor de dilución para adición de un volumen constante de tampón de extracción diluido (5 ml) en función de la cantidad de heces pesada Peso [ mg ] Factor de dilución 80 62, , , , , , , , , , ,46 Independientemente del método utilizado para pesar la muestra de heces, la suspensión de heces se homogeneiza enérgicamente en un mezclador de vórtice. Si las heces tienen consistencia líquida, utilizar una pipeta para extraer exactamente 100 µl y suspender la muestra en exactamente 5 ml de tampón de extracción diluido. La suspensión homogeneizada debe centrifugarse a más de 3000 g durante 10 minutos para que sedimenten las partículas fecales gruesas. El sobrenadante del extracto debe volver a diluirse para utilizarlo inmediatamente en el ensayo. Se recomienda conservar el sobrenadante alicuotado como mínimo a -20 C. RIDASCREEN siga
9 Dilución manual de muestras Diluir 50 µl del sobrenadante clarificado (ver 9.4.1) en 950 µl de tampón de extracción diluido (1:20) y homogeneizar la muestra en el mezclador de vórtice. A continuación se realiza una nueva dilución pipeteando 100 µl de la primera dilución en 900 µl de tampón de dilución de muestras Diluent 3 RIDASCREEN (1:10) y homogeneizando la muestra en el mezclador de vórtice. Esta dilución final de la muestra de heces (1:10000) es la que se utilizará en el ensayo. Un método alternativo adecuado para procesar y homogeneizar el material de la muestra descrito anteriormente es el sistema de preparación de muestras suministrado por la empresa Roche Diagnostics, Mannheim (cat. n.º ). R-Biopharm AG proporciona bajo demanda instrucciones de uso especiales para este método Dilución automática de muestras Si el ensayo se realiza con un sistema DSX-ELISA automático suministrado por Dynex, R-Biopharm AG proporciona el registro de medidas requerido e instalará la aplicación en el sistema. La muestra se diluirá automáticamente según se describe a continuación. El sistema ELISA automático pipetea 25 µl de volumen del sobrenadante clarificado en una placa DeepWell y lo diluye con 975 µl de tampón de extracción diluido (1:40). Siguen dos ciclos de mezclado. El número de tiras de microtitulación requerido se introduce en el bastidor de la placa de microtitulación Plate RIDASCREEN siga. Seguidamente se transfieren volúmenes de 20 µl de la muestra diluida de la placa DeepWell a la placa de microtitulación Plate RIDASCREEN siga y se diluyen nuevamente con 80 µl de diluyente de muestras Diluent 3 RIDASCREEN (1:5; dilución final 1:10,000). Contactar con R-Biopharm AG para instrucciones sobre el desarrollo del ensayo en otros sistemas ELISA de pipeteo automático Primera incubación Después de colocar un número suficiente de pocillos en el soporte, añadir 100 µl de calibrador Calibrator (por duplicado), de tampón de dilución de muestras Diluent 3 (= control negativo), de control alto Control + y de las suspensiones de heces analizadas en los pocillos correspondientes. En caso de utilizarlo, añadir asimismo 100 µl del control positivo bajo Low control + en los pocillos correspondientes. Incubar la placa a temperatura ambiente (20-25 C) durante 1 hora. RIDASCREEN siga
10 9.6. Primer lavado Es fundamental realizar un lavado exhaustivo si quieren obtenerse resultados correctos y, en consecuencia, deben respetarse rigurosamente los pasos de lavado especificados en las instrucciones. Vaciar las sustancias incubadas en los pocillos en un recipiente de residuos que contenga solución de hipoclorito para su desinfección. Golpear la placa (volteada) enérgicamente sobre papel absorbente para garantizar la total eliminación de líquido en los pocillos. A continuación, lavar la placa cinco veces con 300 µl de tampón de lavado diluido cada vez.(véase 9.2). Golpear la placa (volteada) enérgicamente sobre papel absorbente para garantizar la total eliminación de líquido en los pocillos. Al usar un equipo de limpieza de microplacas, asegúrese de que la máquina esté ajustada correctamente al tipo de placa de pocillos que se use. Además, una suspensión de heces que presente alguna partícula antes del primer lavado debería eliminarse manualmente mediante centrifugación para evitar que se bloqueen las boquillas de lavado. Verificar asimismo que se ha aspirado completamente el líquido en cada fase de lavado. Tras el último lavado, golpear la placa (volteada) enérgicamente sobre papel absorbente para garantizar la total eliminación de líquido en los pocillos Segunda incubación Añada 100 µl de conjugado Conjugate en cada pocillo. Incubar la placa a temperatura ambiente (20-25 C) durante 1 hora Segundo lavado Vaciar las sustancias incubadas en los pocillos en un recipiente de residuos que contenga solución de hipoclorito para su desinfección. Golpear la placa (volteada) enérgicamente sobre papel absorbente para garantizar la total eliminación de líquido en los pocillos. A continuación, lavar la placa cinco veces con 300 µl de tampón de lavado diluido cada vez. Golpear la placa (volteada) enérgicamente sobre papel absorbente para garantizar la total eliminación de líquido en los pocillos Tercera incubación Añadir 100 µl de sustrato SeroSC en cada pocillo. Incubar la placa a temperatura ambiente (20-25 C) durante 15 hora en condiciones de oscuridad. Después, frene la reacción añadiendo 50 µl de reactivo de parada Stop en cada pocillo. Tras mezclar con cuidado (golpeando ligeramente en el lateral de la placa), medir la absorbancia a 450 nm (longitud de onda de referencia 620 nm) en un lector de placas. Atención: muestras de pacientes con positivo alto pueden inducir la formación de un precipitado de sustrato de color negro. Estas muestras deberán volver a diluirse en RIDASCREEN siga
11 proporción 1:10 (dilución final de la muestra de heces: 1:100000) y analizarse de nuevo (ver 9.5). 10. Control de calidad, información sobre caducidad de reactivos Con fines de control de calidad, el calibrador Calibrator (por duplicado), el tampón de dilución de muestras Diluent 3 así como un control negativo y control alto Control + deben utilizarse cada vez que se realice el ensayo. No es obligatorio utilizar el control bajo Low control +. El ensayo se habrá realizado correctamente si la extinción (DO) del control negativo a 450 nm/620 nm es menor que 0.05 y la extinción (OD) determinada del calibrador está dentro del rango de lote específico indicado en la hoja de datos suministrada. El control alto ha de estar dentro del rango de concentración de lote específico indicado en la hoja de datos. En caso de que el test RIDASCREEN siga se ejecute con procesadores ELISA, el valor DO medido para el calibrador Calibrator puede diferir, según el instrumento utilizado, del valor indicado en la hoja de datos específica del lote. Por consiguiente, el control alto es decisivo para la validez de los resultados y debe procesarse siempre que el ensayo se ejecute en procesadores ELISA. No es obligatorio utilizar el control bajo Low control +. Si los valores difieren de los requeridos, si el sustrato está turbio o se ha puesto azul antes de añadirlo a los pocillos, puede que los reactivos hayan caducado. Si no se cumplen los valores especificados, deben comprobarse los siguientes puntos antes de repetir el ensayo: Fecha de caducidad de los reactivos utilizados Funcionamiento de los equipos utilizados (p. ej., calibración) Procedimiento de ensayo correcto Control visual de los componentes del kit para detectar contaminación o pérdidas; no utilizar soluciones de sustrato que hayan virado a color azul. Si los requisitos siguen sin cumplirse después de repetir el ensayo, póngase en contacto con el fabricante o el distribuidor local de R-Biopharm. 11. Evaluación e interpretación Cuantificación de un punto según el modelo logístico de 4 parámetros La concentración de siga en µg/g heces se determina con el test RIDASCREEN siga conforme al modelo logístico de 4 parámetros (4PL). RIDASCREEN siga
12 Para determinar los resultados se precisa el software de evaluación RIDA SOFT Win.net. Solicitar RIDA SOFT Win.net o una versión actualizada a R-Biopharm AG o al distribuidor local R-Biopharm. Los parámetros (A - D) de la curva estándar necesarios para el cálculo 4PL y el valor nominal del calibrador, control alto y control bajo figuran en la hoja de datos de lote específica que se suministra con el kit y deben compararse con los valores del software de evaluación antes de cada medición utilizando la información pertinente de esta hoja de datos. R-Biopharm AG ha determinado la curva estándar (incluidos los parámetros A - D), el valor nominal y el rango admisible del calibrador, del control alto y control bajo en condiciones óptimas para cada lote del kit en el marco del control de calidad final. El calibrados se analiza de forma rutinaria para compensar variaciones del ensayo y comprobar la calidad de cada pasada. El control alto es decisivo para la validez de los resultados del ensayo. RIDA SOFT Win.net calcula internamente un factor de corrección F a partir del valor medio de la determinación por duplicado del control del calibrador y su valor nominal y lo concilia con la absorbancia de las muestras de heces. Dentro de los límites de la curva estándar puede realizarse una evaluación segura y fiable de los resultados del ensayo. En lugar de RIDA SOFT Win.net puede utilizarse otro software que trabaje con el modelo logístico de cuatro parámetros Resultados del ensayo El rango normal de siga es µg siga/g heces. Si los resultados son inferiores a 100 µg siga/g heces, los pacientes tienen niveles de siga reducidos. Si los resultados son superiores a 1200 µg siga/g heces, los pacientes tienen niveles de siga aumentados. Recomendamos que cada laboratorio fije un rango de valores estándar propio. 12. Limitaciones del método RIDASCREEN siga detecta epitopos de siga humana en muestras de heces. El diagnóstico debe basarse no solo en la determinación de la concentración de siga, sino también en la historia clínica y los síntomas. RIDASCREEN siga
13 13. Características de rendimiento Sensibilidad analítica La sensibilidad analítica se determinó mediante el análisis del límite del blanco (LoB) usando un total de 210 mediciones de un búfer, consistente en un búfer de extracción y diluyente, y el análisis del límite de detección (LoD) usando 70 mediciones de una muestra de control positivo. Los resultados se muestran en la tabla 3. Tabla 3: Resultados de la sensibilidad analítica MV [OD450/620] µg/g LoB 0,003 - LoD - 65, Precisión La reproducibilidad intraensayo de RIDASCREEN siga se estableció mediante la realización determinaciones múltiples en días diferentes. Los valores DO de estas medidas se utilizaron para determinar las concentraciones de siga. Se calculó el valor medio (MV), la desviación estándar (SD) y el coeficiente de variación (CV) de cada muestra. Los resultados se muestran en las tablas 3 y 4. Tab. 4: Reproducibilidad intraensayo (n=16) Intraensayo RIDASCREEN siga 1. Concentración [660 μg/g] 2. Concentración [1500 μg/g] MV (DO) SD 45,6 55,80 CV % 6,8 4,0 Tab. 5: Reproducibilidad interensayo (n=8) Interensayo RIDASCREEN siga 1. Concentración [660 μg/g] 2. Concentración [1500 μg/g] MV (DO) SD 79,7 85,5 CV % 11,8 5,9 RIDASCREEN siga
14 13.3 Linealidad Para comprobar la linealidad de RIDASCREEN siga se prepararon series de dilución seriada de varias muestras de heces que contenían siga. Los pesos y la suspensión de las muestras, así como la dilución inicial se determinaron según se describe en estas instrucciones (ver apartado 9.4.). Las diluciones seriadas se prepararon con el tampón de dilución de muestras Diluent 3 RIDASCREEN. Las concentraciones determinadas en el ensayo se compararon con las concentraciones esperadas. Los resultados se muestran en la tabla 5. Tab. 6: Linealidad Muestra Dilución Concentración determinada (µg/g) Concentración esperada (µg/g) Conc. determinada/ conc. esperada 1: ,00 1: ,00 403,50 101% 1: ,50 201,75 103% 1: ,25 100,88 103% 1: ,69 50,44 114% MV 105% 1: ,00 1: ,50 587,50 98% 1: ,25 293,75 95% 1: ,38 146,88 100% 1: ,69 73,44 102% MV 99% 1: ,00 1: ,50 189,00 107% 1: ,25 94,50 113% 1: ,75 47,25 124% 1: ,63 - MW 115% MV (total) 106% RIDASCREEN siga
15 14. Literatura 1. Brand S, Gerritzen A. Evaluation eines neuen Enzym-Immuno-Assays zum Nachweis von sekretorischem IgA im Stuhl. Poster DGKL Brandtzaeg P. Update on mucosal immunoglobulin A in gastrointestinal disease. Curr Opinion Gastroent 2010; 26: Goldblum RM. The role of IgA in local immune protection. J Clin Immun 1990; 10(6): 64S-71S. 4. Mestecky Y et al. Intestinal IgA: novel views on its function in the defence of the largest mucosal surface. Gut 1999; 44: Motegi Y et al. Role of secretory component, and eosinophils in mucosal inflammation. Int Arch Allergy Immunol 2000;122(suppl 1): Rüssmann H et al. IgA/IgM and secretory immunity. Sepsis 1999; 3: Russel MW et al. Molecular heterogeneity of human IgA antibodies during an immune response. Clin Exp Immunol 1992; 87: 1-6. RIDASCREEN siga
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