Experiencia en la Validación de Métodos Serológicos Cualitativos para el Laboratorio Clínico

Transcripción

1 Experiencia en la Validación de Métodos Serológicos Cualitativos para el Laboratorio Clínico TM Alan Oyarce F. Instituto de Salud Pública de Chile DECRETO N 158 NOTIFICACIÓN DE ENFERMEDADES TRANSMISIBLES DE DECLARACIÓN OBLIGATORIA CONFIRMACIÓN SEROLÓGICA DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS INMUNOFLUORESCENCIA ELISA WESTERN BLOT 1

2 UNIVERSO POBLACION APARENTEMENTE SANA ( - ) ( + ) + PRUEBA TAMIZAJE + + ( - ) + + PRUEBA CONFIRMACION ( + ) Personas libres de la condición en estudio (falsos positivos del tamizaje) Personas confirmadas de padecer el factor de riesgo Punto de corte Diagnóstico N individuos Pacientes Sanos VN Pacientes Enfermos FN FP VP Rango Indeterminado FP Falso Positivo, VN Verdadero Negativo, FN Falso Negativo, VP Verdadero Positivo, 2

3 Coeficiente de Variación en ELISA IgG Chagas ISP %

4 Diagnóstico inicial año Sistema de gestión de calidad no implementado Metodologías sin control interno adecuado Procedimientos no estandarizados Equipamiento en distinto estado de mantención Personal sin entrenamiento /evaluación de competencia Métodos no validados/verificados Ausencia de CCE adecuado Inexistencia de cartas control Metodologías no acreditadas 1. IMPLEMENTACIÓN DE UN SGC EN EL LABORATORIO C L I E N T E S Políticas y objetivos Revisión por la dirección Asesoría jurídica PROCESOS ESTRATÉGICOS Y DE MEJORA PROCESOS OPERATIVOS Etapa Pre examen Gestión de indicadores Gestión de reclamos Satisfacción del cliente Etapa de examen No conformidades Acciones preventivas Auditorias internas Acciones correctivas Etapa Post examen C L I E N T E S Gestión Clientes Gestión Documental RRHH Compras Gestión Equipos Planta física Gestión Información Seguridad Bioseguridad PROCESOS DE APOYO 4

5 2.- INCORPORACIÓN DE UN CONTROL DE CALIDAD INTERNO Limitada disponibilidad de material de control comercial en serología Material de control interno de elaboración propia Incorporación de un material de control comercial 3.- ESTANDARIZAR DOCUMENTOS ELABORACIÓN DIFUSIÓN DISTRIBUCIÓN Que Quién Como Donde Cuando 5

6 4.- GESTIÓN DEL EQUIPAMIENTO DEL LABORATORIO Calificación de Equipamiento Proceso documentado por el cual se verifica la correcta instalación y operación de un equipo. 5.- GESTIÓN DEL PERSONAL Entrenamiento y evaluación de la competencia del personal 6

7 7.- VALIDACIÓN/VERIFICACIÓN DE MÉTODO Fabricante: Diseña metodología Validación Confirmación, mediante la aportación de evidencia objetiva, de que se han cumplido los requisitos para una utilización o aplicación específica prevista. NCh-ISO 15189:2013 Adquisición de un Kit comercial Verificación Confirmación, mediante la aportación de evidencia objetiva, de que se han cumplido los requisitos especificados. Laboratorio: Implementa metodología NCh-ISO 15189:2013 ETAPAS EN LA VALIDACIÓN / VERIFICACIÓN DE MÉTODOS A.- Definir parámetros de desempeño a evaluar B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar C.- Seleccionar los experimentos apropiados para evaluar D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos) E.- Análisis estadístico de los datos F.- Comparar mi valor obtenido con los requisitos de calidad definidos G.- Evaluar la aceptabilidad del método en base a su desempeño. 7

8 A.- Definir parámetros de desempeño a evaluar METODOS CUANTITATIVOS CUALITATIVOS PARAMETRO DE DESEMPEÑO VALIDACIÓN VERIFICACIÓN VALIDACIÓN VERIFICACIÓN SENSIBILIDAD SENSIBILIDAD VERACIDAD VERACIDAD ESPECIFICIDAD ESPECIFICIDAD LINEALIDAD LINEALIDAD TASA FALSOS POSITIVOS INTEFERENCIAS LIMITE INFERIOR TASA FALSOS NEGATIVOS LIMITE INFERIOR INTERVALOS REFERENCIA INTERVALOS REFERENCIA B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar VALIDACIÓN SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD TASA FALSOS POSITIVOS TASA FALSOS NEGATIVOS REQUISITO FUENTE 8

9 B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar Ref. Validación de métodos analíticos no cuantitativos. Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas, vol. 41, núm. 2, abril-junio, 2010, pp Recommendations for the Bioanalytical Method Validation of Ligand-binding Assays to Support Pharmacokinetic Assessments of Macromolecules. Pharmaceutical Research, Vol. 20, No. 11, November 2003 ( 2003) B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar VALIDACIÓN REQUISITO FUENTE SENSIBILIDAD 95% ESPECIFICIDAD TASA FALSOS POSITIVOS 95% 5% Ref. Validación de métodos analíticos no cuantitativos.revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas, vol. 41, núm. 2, abril-junio, 2010, pp TASA FALSOS NEGATIVOS 5% PRECISIÓN INTRAENSAYO INTERMEDIA 20% 20% Recommendations for the Bioanalytical Method Validation of Ligand-binding Assays to Support Pharmacokinetic Assessments of Macromolecules. Pharmaceutical Research, Vol. 20, No. 11, November 2003 ( 2003) 9

10 C.- Seleccionar los experimentos apropiados para evaluar Existen guías claramente definidas para validar métodos cuantitativos Las guías CLSI no son la única alternativa C.- Seleccionar los experimentos apropiados para evaluar MÉTODOS CUALITATIVOS PARAMETRO DE DESEMPEÑO VALIDACIÓN GUÍA VERIFICACIÓN GUÍA SENSIBILIDAD CLSI EP12 SENSIBILIDAD CLSI EP12 ESPECIFICIDAD CLSI EP12 ESPECIFICIDAD CLSI EP12 TASA FALSOS POSITIVOS CLSI EP12 CLSI EP15 TASA FALSOS NEGATIVOS CLSI EP12 CLSI EP5 10

11 D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos) D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos) 1.- Procesar un panel de desempeño tal como lo establece el inserto o instructivo de trabajo. 2.- Incluir siempre el control interno en cada corrida. 3.- Analizar los datos obtenidos y comparar con el valor de referencia 11

12 D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos) Selección del Panel de desempeño - Uso de paneles de desempeño comerciales. - Paneles conformados con muestras de tercera opinión (intercomparación o control de calidad externo). - Paneles de muestras confirmadas con método de referencia o por más de una metodología. Calculo tamaño mínimo de muestras Muestras positivas {S (1- S) C 2 } / X 2 = (0.95 (1-0.95)*(1.96) 2 /(0.1) 2 Muestras Negativas {E (1- E) C 2 } / X 2 = (0.95 (1-0.95)*(1.96) 2 /(0.1) 2 S= Sensibilidad E= Especificidad C= Intervalo de confianza estimado (1.96 para un 95% de confianza) X= % error permitido (habitualmente 5-20%). D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos) 12

13 E.- Análisis estadístico de los datos D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos) Cantidad de material control necesario: ideal 2 a 6. El material de control debe ser lo más semejante a una muestra de rutina Procesar cada material de control por duplicado, dos veces al día durante 20 días y de acuerdo a las recomendaciones del fabricante Total de 80 determinaciones por nivel procesado. 13

14 D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos) DIA 20 FUERTE MEDIO Cut off DEBIL SUEROS NEGATIVOS SUEROS POSITIVOS D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos) 14

15 E.- Análisis estadístico de los datos EP-5 Precisión en condiciones de repetibilidad Precisión Intermedia F.- Comparar mi valor obtenido con los requisitos de calidad definidos 15

16 G.- Evaluar la aceptabilidad del método en base a su desempeño. % CV 60,00 50,00 Implementac ión SGC 40,00 Elaboración CCI Entrenamiento personal 30,00 VALIDACIÓN CCE 20,00 VERIFICACIÓN Gestión de Equipos 10,00 0,00 16

17 A.- Definir parámetros de desempeño a evaluar METODOS CUANTITATIVOS CUALITATIVOS PARAMETRO DE DESEMPEÑO VALIDACIÓN VERIFICACIÓN VALIDACIÓN VERIFICACIÓN SENSIBILIDAD SENSIBILIDAD VERACIDAD VERACIDAD ESPECIFICIDAD ESPECIFICIDAD LINEALIDAD LINEALIDAD TASA FALSOS POSITIVOS INTEFERENCIAS LIMITE INFERIOR TASA FALSOS NEGATIVOS LIMITE INFERIOR INTERVALOS REFERENCIA INTERVALOS REFERENCIA B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar VERIFICACIÓN SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD REQUISITO FUENTE 17

18 B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar 18

19 B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar VERIFICACIÓN SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD REQUISITO 100% 99,3% Sr 0,07 ; St 0,3 FUENTE 19

20 C.- Seleccionar los experimentos apropiados para evaluar MÉTODOS CUALITATIVOS PARAMETRO DE DESEMPEÑO VALIDACIÓN GUÍA VERIFICACIÓN GUÍA SENSIBILIDAD CLSI EP12 SENSIBILIDAD CLSI EP12 ESPECIFICIDAD CLSI EP12 ESPECIFICIDAD CLSI EP12 TASA FALSOS POSITIVOS CLSI EP12 CLSI EP15 TASA FALSOS NEGATIVOS CLSI EP12 CLSI EP5 D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos) 20

21 D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos) 1.- Procesar un panel de desempeño tal como lo establece el inserto o instructivo de trabajo. 2.- Incluir siempre el control interno en cada corrida. 3.- Analizar los datos obtenidos y comparar con el valor de referencia 21

22 F.- Comparar mi valor obtenido con los requisitos de calidad definidos 22

23 D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos) - Seleccionar materiales con valores en el rango de interés clínico o cercanos a las concentraciones usadas por el fabricante para establecer las especificaciones de precisión. - 2 niveles al menos (+ fuerte, + débil) que imiten la matriz de la muestra del paciente. - Analizar cada muestra tres veces al día durante 5 días siguiendo exactamente los pasos del inserto o del instructivo de trabajo. - Siempre incluir el control interno en cada corrida. D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos) DIA 1 DIA 2 DIA 3 DIA 4 DIA 5 R1 R3 R1 R3 R1 R3 R1 R3 R1 R3 R2 R2 R2 R2 R2 FUERTE Cut off DEBIL SUEROS NEGATIVOS SUEROS POSITIVOS 23

24 F.- Comparar mi valor obtenido con los requisitos de calidad definidos G.- Evaluar la aceptabilidad del método en base a su desempeño. 24

25 % Implementación SGC Auditoria interna Elaboración CCI Entrenamiento personal ACREDITACION ISO VALIDACIÓN CCE Auditoria interna Auditoria interna 20 VERIFICACIÓN CCI comercial Auditoria interna Auditoria interna 10 Gestión de Equipos CCE VERIFICACIÓN CCE CCE VERIFICACIÓN CCE CCE VERIFIC 0 Estado al año Sistema de gestión de calidad no implementado Metodologías sin control interno adecuado Procedimientos no estandarizados Equipamiento en distinto estado de mantención Personal sin entrenamiento /evaluación de competencia Métodos no validados/verificados Ausencia de CCE adecuado Inexistencia de cartas control Metodologías no acreditadas 25

26 MUCHAS GRACIAS 26