ESTANDARIZACIÓN DE LA PREPARACIÓN DEL SEDIMENTO URINARIO Según la NCCLS (Comité Nacional para la Estandarización de Laboratorios Clínicos), todo sistema utilizado, debe estandarizar los siguientes factores específicos: 1. Volumen Urinario 2. Tiempo de centrifugación. 3. Velocidad de Centrifugación. 4. Factor de Concentración del Sedimento. 5. Volumen del sedimento examinado. 6. Formato de Reporte. Todas las personas en una institución quienes realizan la observación microscópica del sedimento urinario deben usar la misma terminología y el mismo formato de reporte, este debe ser claro, conciso y debe incluir el factor de concentración utilizado en la preparación del sedimento y los rangos de referencia. Algunos autores recomiendan el uso de una única escala de graduación establecida por el propio laboratorio, con pocas clases ya que de esta forma puede ser mejor adaptada a los sistemas de computación. La estandarización de el sedimento urinario y el uso de cámaras de recuentos (sistema KOVA) han permitido uniformar variables como el volumen de la orina a centrifugar, el volumen en el que se resuspende el sedimento y el tamaño de la gota que se observa al microscopio, sin embargo el alto costo de estos sistemas dificulta su disponibilidad en la mayoría de los laboratorios. La recomendación es uniformar las variables susceptibles de controlar como el volumen de la orina a centrifugar, el tiempo y la velocidad de
centrifugación, el factor de concentración del sedimento, cantidad de sedimento observada y el formato de reporte. A continuación se detallan los pasos a seguir para realizar una adecuada estandarización en el laboratorio: 1. Volumen Urinario. La literatura consultada refiere que puede utilizarse 10cc, 12cc o 15cc, indistintamente cual sea el volumen, todo el personal del laboratorio debe usar la misma cantidad, lo importante es que sea estandarizado. Colocar exactamente 15 ml de orina bien mezclada en un tubo preferiblemente de centrifuga transparente y graduado. Si se dispone de menos de 15 ml de orina utilizar 3cc, si la cantidad es menos de 3cc realizar la examinación microscópica con la orina sin centrifugar e indicarlo en el reporte. En este paso se deben observar las características físicas de la orina a través del tubo e introducir la tira reactiva y escurrirla en el borde del tubo para luego leer los aspectos químicos respectivos, en el tiempo estipulado por el fabricante. 2. Tiempo y Velocidad de Centrifugación. Centrifugar 5 minutos a 2000 rpm o 10 minutos a 1500 rpm. No se debe usar el freno para detener la centrifuga ya que esto causa resuspensión del sedimento y por ende falsos resultados bajos. 3. Factor de Concentración del Sedimento. (1:15) Decantar exactamente 14 cc del sobrenadante, realizarlo con una pipeta, y dejar 1 cc para resuspender el sedimento. En el caso que se use 3cc se extrae 2.7cc y se deja 0.3 cc para resuspender el sedimento. Si utiliza colorante, adicione 1 o 2 gotas, y mezcle muy suavemente hasta que sea homogéneo el sedimento.
4. Volumen del Sedimento Urinario. Colocar 20 ul con una pipeta en una lámina portaobjeto y cubrir con laminillas de 22x22 mm. Es muy importante el tamaño de la gota, ya que una mayor cantidad causara que flote la laminilla, causando flujo de los elementos y por ende error en el reporte. Colocar la preparación en el microscopio y ajustar la posición del condensador y del iris del diafragma, que permita el paso de luz amortiguada para dar un contraste adecuado. Esto se logra cerrado parcialmente el iris del diafragma y ajustando el condensador hacia abajo hasta lograr el contraste óptimo, si hay demasiada luz algunas estructuras pasaran desapercibidas. Enfocar con el objetivo de 10X. Se debe ser sistemático en la observación, comenzar observando alrededor de los cuatro lados de la laminilla y luego en el centro. Se debe observar un mínimo de 10 campos. 5. Formato de Reporte. Todos los elementos deben ser reportados usando los objetivos apropiados y dentro de la escala establecida por cada laboratorio. Lo ideal es expresar las cantidades en un rango de diferencia no mayor a 5 elementos. Examinación con el objetivo de bajo poder(10x): a) Cilindros: se reportan según la cantidad observada con este objetivo. Se debe observar en los extremos de la láminas y luego en el centro, cuando son observados cambiar al objetivo de 40X para identificarlos. b) Cristales anormales: observar estas estructuras igual que los cilindros. Los cristales son identificados más por la forma que por el tamaño, una combinación de observación de bajo (10X) y alto poder (40X) es necesaria en su observación e identificación. Se reportan según la cantidad observada con el objetivo de 10X, pero deben ser confirmados antes de reportarlos, tanto los de origen metabólico como los de origen iatrogénicos.
Examinación con el objetivo de alto poder(40x): Con este objetivo se reporta e investiga lo siguiente: a) Hematíes. Se reportan según la cantidad observada, y deben reportarse los hematíes dismórficos si son observados b) Leucocitos. Se reportan según la cantidad observada, generalmente son neutrófilos, si observamos linfocitos o eosinófilos identificables morfológicamente por coloración. También se reportan los acumulos leucocitarios de igual forma. c) Cristales normales. Se reportan como escasos, moderados o abundantes por campo de alto poder para cada tipo de cristal encontrado. d) Identificación de cilindros. Son reportados en campo de bajo poder pero se deben identificar con el objetivo de alto poder (40 X). e) Células epiteliales. Tubular renal, transicionales y cuerpos ovales grasos, Se reportan según la cantidad observada. f) Fragmentos de epitelio Se reporta cualquier cantidad como presente. g) Misceláneos. Esta categoría incluye varias formas celulares y otras estructuras que pueden encontrarse en el sedimento urinario: células epiteliales planazas, levaduras, bacterias, tricomonas, glóbulos de grasas, muscina, células claves, insectos y parásitos. Identificadas las estructuras se reportan como escasas, moderadas o abundantes por campo de alto poder. Reporte la presencia de espermatozoides únicamente en hombres, este es considerado un contaminante en las muestras de orinas femeninas y no son reportadas. Si se observan células atípicas remitir para estudios especiales. SEDIMENTO NORMAL Y VALORES DE REFERENCIA. Normalmente la orina contiene sedimento en pequeña cantidad o no lo contiene, sin embargo pueden observarse pequeñas cantidades de algunos elementos en cualquier muestra de orina, generalmente son muy pocos hematíes, leucocitos, cilindros hialinos, células epiteliales y cristales. Cada laboratorio o
región debe establecer su propio rango de referencia para orinas normales basados en su metodología particular y población de pacientes. Los valores estimados por Schumann son los que se utilizan actualmente en el país, hasta que se hagan estudios suficientes y valederos que permitan el establecimientos de valores de referencia propios. Aunque por lo general se encuentra poca variación entre los valores publicados por diferentes autores. VALORES DE REFERENCIA DE SEDIMENTO URINARIO REFERIDOS POR SCHUMANN CONSTITUYENTE DEL SEDIMENTO VALOR CONSIDERADO ANORMAL HEMATIES LEUCOCITOS CELULAS RENALES TUBULARES CELULAS DE TRANSICION CELULAS ESCAMOSAS FRAGMENTOS DE EPITELIO CILINDROS HIALINOS CILINDRO GRANULAR CILINDRO PATOLOGICO CAP*= Campo de alto poder( objetivo de 40X) CBP**=Campo de bajo poder( objetivo de 10 X) Mayor a 5 /CAP* Mayor a 5 /CAP Mayor a 2 /CAP Mayor a 5/ CAP Raramente significantes Cualquier Mayor a 3 / CBP** Mayor de 1/CBP Cualquier Elaborado por la P.P de Bioquímica de la Escuela de Bioanálisis..