Malassezia : un género emergente en micología cl ínica Bioq. Silvana Ramadán CEREMIC Fac. Cs. Bioq. y Farmacéuticas UNR Malassezia Pared celular multilaminada Brotes enteroblásticos Reino: FUNGY División: BASIDIOMYCOTA Clase: USTILAGINOMYCETES Orden: MALASSEZIALES Género: MALASSEZIA (1889) (1990) ( 1996) (1996) M.sloffiae (1996) (1996) M.pachydermatis (1935) M. dermatis (2002) M. equi (2002) M. japónica (2003) M.nana (2004) M.yamatoensis (2004) M. cuniculi sp nov. (2010) LIPOFÍLICAS NO LIPOFÍLICA LIPOFÍLICAS Malassezia COMENSAL tronco miembros superiores Factores predisponentes espalda frente lóbulo retroauricular nuca Infección superficial crónica, benigna con hipo o hiperpigmentación de la piel Patologías cutáneas Foliculitis Dermatitis seborreica Dermatitis atópica Psoriasis Pustulosisneonatal Onicomicosis Otitis Papilomatosisconfluente o reticulada Patología sistémica Factores predisponentes:? susceptibilidad genética? enf. de base debilitantes? desnutrición? aumento del cortisol plasmático? altas temperaturas y humedad Edad: pubertad, jóvenes y adultos Patogenicidad de Malassezia: Actividad queratolítica: ruptura mecánica o química de la queratina de las células Producción de enzimas : lipooxigenasas, producción de lipoperóxidos que dañan las membranas celulares 1
Foliculitis Probables mecanismos de la despigmentación de la piel: Bloqueo en la transferencia del melanosoma al queratinocito Producción de productos indólicos que bloquean la luz UVA, UVB Inhibición de la producción de melanina por la presencia de ác. azelaico, inhibidor por competición de la Tirosinquinasa Características clínicas: pápulas pruriginosas y pústulas que se localizan en tronco, brazo, cuello y cara. Factores predisponentes: embarazo, leucemias, SIDA, diabetes, pacientes transplantados, corticoterapia, antibi óticoterapia, estrés. Patogenia: crecimiento exacerbado de las levaduras en el folículo y liberación de metabolitos que producen inflamación e irritación Características clínicas Dermatitis seborreica/ Caspa Descamación e inflamación de regiones del cuerpo rica en glándulas seb DS: descamación e inflamación en áreas del cuerpo ricas en glándulas sebáceas. Caspa: forma menos severa, descamante pero no inflamatoria Patogenia: * aumento del crecimiento de Malassez en la zona afectada * respuesta inmunológica del hospedero Dermatitis atópica (Eczema Atópico/ Sme. Dermatitis) Enfermedad multifactorial con inflamación crónica disparada por varios alergenos con ciclos de exacerbación y remisión Factores predisponentes: factores genéticos, defectos en el SI, daño en la inte de la piel como barrera defensora, estr és emocional. Las levaduras de Malassezia estarían actuando como alergenos. Especies más frecuentemente asociada: M. sympodialis (Canadá, Suecia M. restricta, M. globosa (Japón) M. sympodialis, M. globosa, M. furfur (Arg.) Enfermedad sistémica Neonatos prematuros o no Adultos inmunosuprimidos alimentación parenteral Extracci ón de la muestra Piel: Con cinta scotch Raspado con bisturí estéril y recuperación en portas flameados Sangre: Extracción para hemocultivo Procesamiento de la muestra Especies más frecuentemente relacionadas: M. furfur M. pachydermatis Escamas, secreciones 1º Examen microscópico con Azul de Lactofenol e Hidróxido de potasio al 20% + calor Hemocultivos 1º Examen microscópico con May Grünwald-Giemsa 2
PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA (continuación) Examen microscópico directo 2º Siembra en los medios de cultivo : * Sabouraud-Glucosa + Ac. de oliva estéril * Agar Dixon modificado * Leeming y Notman Filamentos 32ºC- 5-7 días CULTIVO POSITIVO Examen macroscópico Examen microscópico con A. de Lactofenol Preservación y almacenamiento de la cepa Identificaci ón Fenotípica Genotípica Levaduras CULTIVO POSITIVO EXAMEN DIRECTO DE LA COLONIA Azul de Lactofenol-400 X Azul de Lactofenol-1000 X Caracterización fenotípica de las cepas de Malassezia 80 20 Malassezia spp. Sub-cultivo en Sb-Glucosa 1) Reacción de la catalasa 2) Utilización de compuestos Tween 60 40 M.pachydermatis (-) 80 20 Utilización de Tweens 60 40 3) Desdoblamiento de la esculina 4) Test de termotolerancia 5) Asimilación de Aceite de Ricino + - Aceite de ricino (-) Pba. de la esculina (-) - + - - - - M.slooffiiae Catalasa (-) Pba. de la esculina (-) 3
CHROMagar Candida- modificado CHROMagar Malassezia- Tween 40 M.japonica M. pachydermatis BILIS DE BUEY GLICEROL MONOESTEARATO DE GLICEROL TWEEN 60 M.dermatis Kaneko et al., Med Mycol, 2005 Kaneko et al., Med Mycol, 2006 ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN CHROM-MALASSEZIA MODIFICADO AGAR ESCULINA-TWEEN 60 AGAR SABOURAUD GLUCOSA REACCIÓN DE LA CATALASA Presencia de pp. Morfología PRODUCCIÓN PP. Sub-cultivo en SBG + M.pachydermatis D + ALGORITMO DE TRABAJO Cultivo en CHROMagar-Malassezia mod. _ Esculina-tween 60 Catalasa - D- AUSENCIA DE PP. Grande Rosa p. rugosa M.japonica Esculinatween 60 D- M.dermatis Kaneko et al., Med Mycol, 2007 Kaneko et al., Med Mycol, 2007 Caracterizaci ón genotípica de las cepas de Malassezia Nested-PCR (Sugita et al., 2001) PCR anidada. Se trabaja desde la MUESTRA CLÍNICA PCR-REA (Guillot et al., 2000// Giusiano et al., 2003) Análisis de restricción enzimática PCR-RFLP (Gupta et al., 2000// Guillot et al., 2000//Mirhendi et al., 2005) Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción. PCR-FINGERPRINTING Modificación del método RAPD Cebador único : M 13 (5 -GAGGGTGGCGGTTCT -3 ) Amplifica regiones minisatélites Estable y reproducible 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 bp 9 10000 3000 1500 1000 750 500 250/500 Calle 1: 1kb ladder, calle 2: M. sympodialis, Calle 3: M. pachydermatis Calle 4: M,furfur,Calle 5: M. slooffiiae, Calle 6: 1 Kbladder, Calle 7: M. restricta Calle 8:, Calle 9:, Calle 10:, Calle 11: 1 kbladder 4
INFORME ESCRITO Examen directo: Se observan elementos levaduriformes y/o filamentos compatibles con Malassezia spp. Cultivos: Se obtuvo desarrollo de Malassezia spp. 5