ASD OIL PALM PAPERS IS A BIANNUAL PUBLICATION OF ASD COSTA RICA (Agricultural Services and Development)

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1 ASD OIL PALM PAPERS

2 ASD OIL PALM PAPERS IS A BIANNUAL PUBLICATION OF ASD COSTA RICA (Agriulturl Servies nd Development) Numer EDITOR: Crlos Chinhill EDITORIAL BOARD: Amnio Alvrdo, Emmnuel Ary, Frniso Perlt, Rirdo Esor. MAILING ADDRESS ASD OIL PALM PAPERS ASD Cost Ri P.O. Box 3-1 Sn José, Cost Ri Ph.(56) , Fx (56) E-mil: sles@sd-r.om We site: http// CONTENT 1. Seed germintion in oil plm (Eleis guineensis): effet of seed storge time efore nd fter het tretment for reking dormny 1. Germinión de semills de plm eiter (Eleis guineensis): lmenmiento previo y posterior l trtmiento lor pr romper el reposo Rmiro Alizg, Jorge Herrer nd Amnio Alvrdo. 19. Reovery of low-grde (wek) oil plm rmets during the hrdening period: use of nti-stress produts nd ntgonist nd symioti miroorgnisms 26. Reste de Rmets de plm eiter on desrrollo suóptomo durnte el periodo de endureimiento: uso de ntitrnspirntes y miroorgnismos simiótios y ntgonists Pul Gde, Crlos Chinhill, Nidi Guzmán. Cover pge Brotes otenidos de tejido emriogénio multiplido en suspensión líquid. (Shoots otined from emryogeni tissue multiplied in liquid suspension.) To ll our reders: ASD Oil Plm Ppers is open to ontriutions (ppers) relted to the oil plm gro-industry. A todos nuestros letores: l puliión ASD Oil Plm Ppers, está iert ontriuiones (rtíulos) reliondos on el ultivo e industri de l plm eiter

3 Oil Plm Ppers, N 38, 12 Seed germintion in oil plm (Eleis guineensis): effet of seed storge time efore nd fter het tretment for reking dormny Rmiro Alizg, Jorge Herrer nd Amnio Alvrdo Astrt Het tretment is the proedure used ommerilly to overome seed dormny in oil plm (Eleis guineensis). However there is no informtion regrding the omined effet of different periods of het tretment on the germintion of seed stored efore or fter suh tretment. Seeds of the Deli x Ekon vriety tht were not stored or hd een stored for 6 dys, were sujeted to, 1,, 3, 4, 45 nd 5 dys of heting (4 C). In nother experiment, the seeds were sujeted to the following omintions of prior storge (in dys) nd het tretments (in dys): -5, 1-4, -3, 3-, 4-1, 5-, 6-5, 7-4, -3, 9-, 1-1 nd 11-. Het tretment for 1, nd 3 dys inresed the perentge of germinted seeds nd norml seedlings; espeilly when pplied to seeds stored previously for 6 dys, lthough these perentges were redued when the het tretment ws extended to 45 or 5 dys. It ws found tht prior storge redued the intensity of seed dormny nd heting periods of 45 or 5 dys negtively ffeted seed physiologil qulity. A positive effet of storge following het tretment on germintion ws lso oserved in seeds, even with het tretment of only 1 dys. Furthermore, in seeds with no prior storge, no negtive effet ws oserved due to the longer heting periods (45 nd 5 dys). 1 2 Centro pr Investigiones en Grnos y Semills, Universidd de Cost Ri, rmiro.lizg@ur..r ASD de Cost Ri,.lvrdo@sd-r.om

4 2 Introdution Plm seeds (Areee) ommonly show extended dormny periods nd do not germinte soon fter ripening nd dethed from unhes (Ellis et l. 1985). Aording to Tomlinson (199), not less thn one fourth of plm speies require 1 or more dys to germinte, nd even fter tht period, germintion n e s low s %. The dormny period is nuisne for the ommeril prodution of germinted plm seeds, sine most speies re seed propgted. Germintion of oil plm seeds under nturl onditions is very low (Murugesn et l. 5), nd dormny is due to physiologil nd morphologil impediments (Bskin nd Bskin 1998). Breeding progrms nd ommeril seed produers normlly use het tretment to rek dormny nd elerte nd inrese germintion. The most ommon proedure is dry het tretment: 4 ºC for 4-7 dys (Corrdo nd Wuidrt 199, Osfo et l. 1988). Other tretments re not s effiient, suh s immersing the seeds in hydrogen ynmid solution (CHN N : 2%) for hours (Herrer et l. 1998). The dry het method of Rees (1959), lter modified y Mok nd Hor (1977) nd Corrdo nd Wuidrt (199), hs een used to promote germintion of oil plm seeds regrdless of their origin. This pper presents informtion on the influene of storge on oil plm seeds efore nd fter the norml het tretment for reking dormny (or vrition of this tretment). Mterils nd Methods All experiments were performed on reently hrvested seeds of the tener vriety Deli x Ekon otined from the ASD Cost Ri reeding grden in Coto, in Cost Ri s southern Pifi region. The experiments were onduted t CIGRAS (Grin nd Seeds Reserh Center of the University of Cost Ri). Seeds from different unhes hrvested the sme dy were mixed in order to get enough mteril for ll experiments, nd three homogeneous seed su-lots for the three experiments were otined. Seeds were kept t 18-ºC, with moisture ontent of 18% (dry se) during storge efore nd fter the het tretment for reking dormny (4 ºC). During this period, seeds were kept in polyethylene gs (.17 mm, flexoprint) tht were hermetilly losed to mintin seed moisture ontent. For first experiment, seeds tht were fresh or tht hd een stored for 6 dys were used in omintion with het tretment nd susequent storge for totl of 5 dys in ll ses. The dys of het tretment-dys of susequent storge omintions were: -5, 1-4, -3, 3-, 4-1, 45-5 nd 5-. In seond experiment, seeds tht were fresh or tht hd een stored for 6 dys were then exposed to het tretments for, 1,, 3, 4, 45 (ommeril) or 5 dys. In the finl experiment, seeds reeived the following omintions of tretments (dys of prior storge-dys of het tretment): -5, 1-4, -3, 3-, 4-1, 5-, 6-5, 7-4, -3, 9-, 1-1 nd 11-. After pplying the tretments, the seeds were soked in tp wter for seven dys nd then ir dried for pproximtely eight hours. After this, seeds were divided into groups of 1 (21-22% moisture ontent, dry sis), treted with ommeril fungiide (Vitvx 4: roxin % + thirm %), nd put into polyethylene gs tht were pled in the germintion room where the verge temperture ws 29 C during the dy nd 25 C t night. There were four replitions of 1 seeds eh.

5 3 The vrile evluted ws the perentge of germintion (sensu strito: t 7, 14, 21 nd 28 dys fter inititing the tests). During the lst evlution (28 dys), the perentge of norml nd norml plntlets (loss of geotropism, wek plntlets, nd lk of rdile or plumule) ws determined. An nlysis of vrine ws performed with dt for perentge of germintion (7, 14 nd 28 dys (umulted)), nd tht of norml plntlets. Mens were seprted y Tukey test. Results nd Disussion First experiment Seed dormny is n dptive solution of plnts to gurntee their survivl in time nd spe. The intensity nd durtion of dormny is determined y geneti ftors, whose expression is influened y the environment efore nd fter the seed rehes its physiologil ripeness (Bethke et l. 4, Bskin nd Bskin 1998). In oil plm, dormny is interrupted y het tretment (4ºC) during vrile period of time (Adde-Kgyh et l. 1988, Mok nd Hor 1977). The min ojetive is to otin the lrgest perentge of germintion in the shortest period. Dt from the first experiment showed signifint positive effet on germintion (p.1) of the 6-dy storge period, even with or 1 dys of susequent het tretment, s ssessed t 14 dys. By ontrst, germintion ws signifintly redued (p.5) when the seed ws previously stored for 6 dys nd then sujeted to het tretments of 45 or 5 dys (Fig. 1). Inresing the durtion of the het tretment etween 1 nd 5 dys promoted etter germintion when the seed ws not previously stored fter hrvesting. When seeds were stored for 6 dys, germintion t seven dys ws higher in those tretments with the following omintions: 1-4, -3 nd 3- (dys of het tretment nd prior storge) (Fig. 2). Fresh seeds or stored for 6 dys Non-stored seeds Dys of previous storge Germintion (%) f f f ef ef ef def f ef d def Dys of het (4 ºC) + storge dys fter het Fig.1. Perent germintion (t 14 dys) of oil plm seed with no prior storge or 6 dys of storge prior to het tretment (4 ºC). Seeds were grouped to reeive one of severl omintions of dys of het nd posterior storge period. Columns with the sme letters do not differ (Tukey: p.5). Oil Plm Ppers, N 38, 12

6 4 Regrdless of the durtion of the prior storge period, germintion t 7, 14 nd 28 dys ws lwys lower in groups of seeds tht reeived no het tretment nd were lter stored for 5 dys. Germintion did not inrese muh etween 14 nd 28 dys, sine it hd lredy een quite high t seven dys (Figs. 1, 2). Germintion improved in ll groups of seeds tht reeived the het tretment, ut the differenes were not lrge from prtil point of view. The positive effet of the het tretment for reking dormny in oil plm seeds hs een well doumented in the literture (Hussey 1958, Rees 1959, Mok nd Hor 1977, Zmrno 1991). A het tretment of only ten dys followed y 4 dys of storge ws enough to get 6 nd 78% germintion t seven nd 28 dys respetively (Fig. 2). With the exeption of the non-heted tretment (-5: 7% germintion t seven dys), no differenes were oserved in ll other tretments without prior storge (from 6 to 76% germintion). The sitution ws similr fter 28 dys, ut germintion rehed up to 9% in some tretments. Germintion (%) No prior storge - 7 dys 6 dys of prior storge -7 dys No prior storge - 28 dys 6 dys of prior storge - 28 dys d d d d Dys of het (4 ºC) + storge dys fter het Fig. 2. Perent germintion fter 7 nd 28 dys in seeds with nd without 6 dys of prior storge nd susequently exposed to severl omintions of het tretment nd posterior storge. Columns of the sme type with the sme letters do not differ (Tukey: p.5). Perent germintion ws very low for reently hrvested seeds (dormnt), ut fter storge for 6 dys, germintion ws 29% (Figs. 1, 2). The positive effets of storge hve een well doumented (Adkins W. et l. 2, Betke et l. 4, Hker J. 1984, Tiwri et l. 4). Results from the first experiment indited tht dormny in oil plm seeds n e interrupted y some period of storge efore nd fter het tretment. However, periods longer thn 45 dys in seeds previously stored for 6 dys pprently hd negtive effets nd germintion ws redued, t lest in the genotype studied. In these seeds, dormny ould hve lredy een prtilly roken; hene the het tretment pplied to seeds with longer storge periods hd rther severe effets on them. Atully, it ppers tht dormny in out one third of the seeds n e roken with even short period of storge.

7 5 The highest perentge of norml seedlings ws otined with seeds previously stored for 6 dys (p.1) nd het treted for 1, or 3 dys omined with deresing lengths of time in post-storge of 4, 3 or dys. With longer periods of heting (45 nd 5 dys) the perentge of norml plntlets ws redued (p.5). But for seeds with no prior storge, longer heting period of 45 or 5 dys ws needed to ttin similr high vlues, whih is n indition tht these seeds were in deeper dormny efore reeiving the het tretment (Fig. 3). No prior storge 6 dys of prior storge 1 ghi i ghi fghi fghi fghi Norml plntlets (%) 6 4 d de efg efg d Dys of heting + dys of storge fterwrd Fig. 3. Perentge of norml plntlets (7 nd 28 dys) otined from seeds with or without 6 dys of prior storge nd lter sujeted to different omintions of het tretment durtions nd susequent storge periods. Sme letters indite no differenes (Tukey: p.5). Seond experiment The informtion otined from the first experiment indited tht storge period efore the het tretment for reking dormny hd etter effet on posterior germintion of oil plm seeds thn storge fter the het tretment. This informtion ws tken s the sis for plnning seond experiment where the heting periods were studied further. One gin, it ws found tht prior storge of seeds (efore they were exposed to het to rek dormny) fvored posterior germintion. This ws ler from dt tken t seven nd 14 dys fter pling the seeds for germintion. In generl, the highest germintion ws otined with het tretments lsting 3 or more dys. With 4 or 45 dys of het tretment, mximum germintion ws otined in just two weeks (Fig. 4). Oil Plm Ppers, N 38, 12

8 6 Germintion (%) dys 28 dys d d d d e d e d Dys of heting (4 ºC) Fig. 4. Effet of het tretment periods on seed germintion regrdless of storge efore or fter heting. Columns with the sme letters re not different (Tukey: p.5). Prior storge tkes on more importne for heting periods shorter thn 3 dys, nd the inverse lso seems to e lso true, sine germintion deresed (p.5) with 6-dy prior storge tretment nd heting for 5 dys. As suggested efore, the effet ould e one of n exessively long heting period on seeds where dormny hd een lredy prtilly roken. When seed is previously stored for out two months, heting period of one month seems to e enough to rek dormny stisftorily to then get high perentge of germintion. Regrdless of the length of the storge period (efore or fter heting), germintion t 14 nd 28 dys ws improved y inresing the heting period to 3 or 45 dys (Fig. 5). Zmrno (1991) hd found tht germintion ws initilly rther low fter heting tretment of only dys, ut with time n eptle level ws rehed. A Germintion (%) No prior storge-14 dys No prior storge-28 dys d e e e e e e Dys of heting (4 ºC) d 6 dys of prior storge-14 dys 6 dys of prior storge-28 dys d de e e e e e de d B Fig. 5. Effet on seed germintion of severl heting periods to rek dormny fter 14 nd 28 dys, in seeds with nd without prior storge. Columns with the sme letters do not differ (Tukey: p.5).

9 7 Most seeds tht germinted hd norml morphology nd it ws gin oserved tht rpid germintion gve rise to more norml plntlets. The 5-dy het tretment in seeds stored previously showed more norml plntlets (Fig. 6). These oservtions lerly indite tht the het tretment should definitely onsider the prior storge history of the seeds. Conerning the perentge of norml plntlets, het tretments of, 1 nd dys were generlly not suitle for overoming seed dormny, from ommeril stndpoint. In ontrst, non-stored seeds heted for 4, 45 nd 5 dys nd stored seeds heted for 3, 4 nd 45 dys ttined higher perentges of norml plntlets (p.5) rnging from 85 to 9%. In ontrst, tretment with prior storge nd 5 dys of het tretment showed signifint derese in the perentge of norml plntlets (P.5) with respet to the est tretments (Fig. 6). This further strengthens the position tht the het tretment should not e done indisrimintely nd the history of the seed should e tken into ount. No prior storge 6 dys of prior storge 1 g g g fg Norml plntlets (%) 6 4 e d e g g f Dys of heting (4 C) Fig. 6. Perentge of norml plntlets t 28 dys otined from seed with nd without 6 dys of storge prior to heting. Numers with sme letter do not differ (Tukey: p.5). Third experiment This experiment ws onduted to evlute storge periods longer thn 6 dys prior to the heting tretment. The positive effet (p.1) of n pproprite omintion of prior storge nd the posterior het tretment ws orroorted. Within the rnge studied, the est tretments for stimulting germintion nd norml plntlets were those where the prior storge period lsted 7 to 9 dys omined with 4 to dys of het tretment. Of similr mgnitude ws the germintion otined from heting the seeds for 5, 4 nd 3 dys, ut with shorter periods of prior storge (, 1 nd dys). These results gree with those oserved in previous experiments. One gin, the est tretment for germintion lso gve rise to higher qulity plntlets (Fig. 7). Oil Plm Ppers, N 38, 12

10 8 Germintion 28 dys Norml plntlets 28 dys Porent Prior storge + Het tretment (4 C) Fig. 7. Germintion nd norml plntlets (28 dys) from seeds tht reieved different omintions of prior storge nd dys of het tretment for reking dormny. Dt with the sme letters do not differ (Tukey: p.5). Most seeds tht germinted in ll three experiments were morphologilly norml nd the smll perentge of dnormlities were not relted to ny tretment in prtiulr. It ws ler tht those seed lots tht germinted fster fter soking in wter produed higher numers of norml plntlets. When germintion rehed 85% or more fter seven dys, the plntlets otined were more vigorous. On the ontrry, more dnormlities were found in those seeds tht germinted lter. Fster germintion my e onsequene of higher seed vigor (Assoition of Offiil Seed Anlysis 2, Tekrony nd Egli 1991) or the result of prtilly roken dormny or omintion of oth ftors. 5-6 dys nd then exposed to prolonged period of heting (4 C: 45-5 dys), t lest for the seed vriety used in these experiments. A similr sitution ws found y Beugré et l. (9), how noted negtive effet of the heting tretment on germintion in oil plm seeds tht were stored for inresing periods of time. There re other possiilities tht ould help redue the dormny period in oil plm seeds, ut they hve not een widely epted. For exmple, Myint el l. (1) determinted tht y removing the operulum, germintion ould reh up to %, omprle to the results otined with the heting method. A period of storge prior to the het tretment for reking dormny llowed redution in het exposure, fster germintion nd more plntlets with desirle hrteristis. All this redues time nd ost during seed proessing for gemintion. Corrdo nd Wuidrt (199) otined high germintion fter six months of storge nd y using het 39 C) for dys. However, our results indite tht there n e negtive effet on germintion if the seed is stored for Oil plm dormny seems to e the result of oth physil nd physiologil impediments for germintion, whih ws onfirmed y the work of Jiménez el l. (8), who found n importnt redution in sisi id onentrtion fter the het tretment. It is however possile tht seeds from different genotypes (Beugré et l. 9), ltitudes nd even ripeness my show differenes when exposed to prtiulr tretment to rek dormny.

11 9 Literture Adde-Kgyh K. A., Osfo D. M., Olympio N. S., Atur O. K. (1988). Effet of seed storge, het pre-tretment nd its durtion on germintion nd growth of nursery stok of the idoltri plm, Eleis guineensis vr idoltri (Chevlier). Trop. Agri. (Trinidd) 65: Adkins S., Bellirs S., Loh D. 2. Seed dormny mehnisms in wrm seson grss speies. Euphyti 126: 13 Assoition of Offiil Seed Anlysts (AOSA). (2). Seed Vigor Testing Hndook. Contriution No. 32. Assoition of Offiil Seed Anlysts. New Mexio 83 Bskin C.C., Bskin J. M. (1998). Seeds. Eology, iogeogrphy, nd evolution of dormny nd germintion. Ademi Press, Sn Diego, 666p Bethke, P., Guler, F., Josen J., Rusell J. 4. Dormny of Aridopsis seeds nd rley grins n e roken y nitri oxide. Plnt 219(5): Beugré-Mnéhonon M., Koukou-Koukou L., Bognonkpé J.P., Konn- Koukou, E., Koukou-Tnoh H., Koudio-Ytty J. (9). Afrin J. of Agri. Res. 4(1): Corrdo F., Wuidrt W. (199). Germintion des grines de plmier à huile (Eleis guineensis) en s de polyéthylène. Méthode pr "hleur sèhe" Olégineux 45 (11) : Ellis R. H., Hong, T. D., Roerts E. H. (1985). Hndook of seed tehnology for genenks. Vol. II: Compendium of speifi germintion informtion nd test reommendtions, Interntionl Bord for Plnt Geneti Resoures, Rome, 456 p Hker J. B., Andrew M. H., MIvor J. G., Mott J. J Evlution in ontrsting limtes of dormny hrteristis of seed of Digitri milnjin. J. of Applied Eology 21(3): Herrer J., Alizg R., Guevr E. (1998). Use of hemil tretments to indue seed germintion in oil plm (Eleis guineensis Jq.). ASD Oil Plm Ppers 18: 1-1 Hussey G. (1958). An nlysis of the ftors ontrolling the germintion of the seed of oil plm, Eleis guineensis (jq.). Annls of Bot. 22: Jiménez, V., Guevr, E., Herrer, J., Alizg, R., Bngerth F. (8). Chnges in hormone onentrtions during dormny relese of oil plm (Eleis guineensis) seeds. Seed Siene nd Tehnology 6(3): Mok C. K. nd Hor Y. L. (1977). The storge of oil plm (Eleis guineensis) seed fter high temperture tretment. Seed Siene nd Tehnology 5: Murugesn P., Mthur R. K., Pilli R. S. nd Bu M. K. (5). Effet of elerted ging on seed germintion of oil plm (Eleis guineensis Jq. vr. dur Be.). Seed Tehnology 27(1): Murugesn, P., Bijimol G. nd Hseel H. 8. Effet of different sustrtes on growth of germinted oil plm hyrids seeds. Indin J. of Hort. 65(4) Myint, T., Chnprsert W., Srikul S. Germintion of seed of oil plm (Eleis guineensis Jq.) s ffeted y different mehnil srifition methods. Seed Si. nd Teh. 38 (3): Rees A. R. (1959). Germintion of oil plm seed: lrge sle germintion. J. of West Afrin Inst. for Oil Plm Res. 3:76-82 Tekrony D. M., Egli D. B. (1991). Reltionship of seed vigor to rop yield: A Review. Crop Si. 31: Tiwri, C.; Shrm, S.; Verm, R. 4. Effet of fungiide nd plnt growth hormones on germintion of tek (Teton grndis). J. of Trop. Forest Si. 16:25-34 Tomlinson P. B. (199). The struturl iology of plms. Oxford University Press, New York. 477 pp Zmrno R Influeni de períodos de lmenmiento y lentmiento sore l germinión de semill de plm frin. Tesis de grdo. F. Ing. Agron. Universidd Téni de Mni (Eudor). 7 p Oil Plm Ppers, N 38, 12

12 1 Germinión de semills de plm eiter (Eleis guineensis): lmenmiento previo y posterior l trtmiento de lor pr romper el reposo Rmiro Alizg, Jorge Herrer y Amnio Alvrdo Resumen El trtmiento térmio es el proedimiento utilizdo omerilmente pr superr el reposo en semills de plm eiter (Eleis guineensis). Sin emrgo no hy informión on respeto l efeto omindo de diferentes períodos de trtmiento térmio sore l germinión de semill lmend previ o posteriormente diho trtmiento. Semills del hírido Deli x Ekon (DXE) sin lmenmiento previo y lmends por 6 dís, se sometieron, 1,, 3, 4, 45 y 5 dís de lor (4ºC). Tmién se sometieron ls siguientes ominiones de lmenmiento previo por trtmiento térmio (en dís): -5, 1-4, -3, 3-, 4-1, 5-, 6-5, 7-4, -3, 9-, 1-1 y 11-. El trtmiento térmio por 1, y 3 dís umentó el porentje de semills germinds y de plántuls normles, en espeil undo se plió semills lmends previmente por 6 dís; unque dihos porentjes se redujeron undo el trtmiento térmio se plió por 45 o 5 dís. Tmién se oservó un efeto positivo del lmenmiento posterior ún on trtmiento térmio de sólo 1 dís. Se determinó que el lmenmiento previo redue l intensidd del reposo de ls semills, por lo que períodos prolongdos de lentmiento (45 o 5 dís) fetn negtivmente l lidd fisiológi de ls misms. Por el ontrrio, en semill sin lmenmiento previo no se oservó efeto negtivo de los períodos de lentmiento myores (45 y 5 dís). 1 2 Centro pr Investigiones en Grnos y Semills, Universidd de Cost Ri, rmiro.lizg@ur..r ASD de Cost Ri,.lvrdo@sd-r.om

13 11 Introduión Ls semills de plms (Areee) en generl presentn períodos de reposo extensos; por lo que reién osehds germinn en j proporión (Ellis et l. 1985). Según Tomlinson (199), l menos un urt prte de ls espeies de plms requieren un plzo myor de 1 dís pr germinr y durnte este período solo se otiene % de l germinión potenil. Est ondiión de reposo restringe o difiult l propgión omeril de ls diferentes espeies de plms, ls ules slvo muy pos exepiones, únimente se propgn por semill sexul. En ondiiones nturles ls semills de plm eiter germinn esporádimente y en j proporión (Murugesn et l. 5). El reposo se dee impedimentos fisiológios y morfológios (Bskin y Bskin 1998), y es un inonveniente que ls ompñís que omerilizn semill germind deen superr trvés de lgún trtmiento que elere l germinión. Comúnmente el reposo de ls semills se interrumpe on un trtmiento de lor (seo o húmedo: 4 ºC) durnte 4-7 dís (Corrdo y Wuidrt 199, Osfo et l. 1988). Otro trtmiento, unque no tn efiiente omo el nterior, es l inmersión de ls semills en un soluión de inmid hidrogend (CHN2N2) l 2% durnte 24 hors (Herrer et l. 1998). El método de lor seo propuesto por Rees (1959) y luego modifido por Mok y Hor, (1977) y Corrdo y Wuidrt (199) se h usdo en form indisrimind pr promover l germinión de l semill de l plm eiter de diferentes orígenes. Sin emrgo, no se dispone de informión reliond on l influeni de períodos de lmenmiento previos o posteriores l trtmiento trdiionl on lor o vriiones del mismo, sore l germinión de ls semills. El ojetivo de este trjo fue evlur l influeni de los períodos de lmenmiento previo y posterior l trtmiento usul de lor, o vriiones del mismo. Mteriles y Métodos Los experimentos se relizron on semills reién osehds de Eleis guineensis del tipo tener (Deli x Ekon) suministrds por ASD Cost Ri. Pr otener sufiiente semill pr los diferentes experimentos se mezlron rimos on l mism edd de oseh, y se otuvo tres sulotes representtivos y homogéneos. En un primer experimento, ls semills se lmenron previmente durnte ero o 6 dís, y luego se hiieron ls siguientes ominiones según el trtmiento térmio y el lmenmiento posterior; de tl mner que siempre sumrn 5 dís: -5, 1-4, -3, 3-, 4-1, 45-5 y 5-. En los experimentos en que se lmenó semill previo y posterior l trtmiento térmio (lor seo), ls misms se mntuvieron 18- ºC, on un ontenido de humedd de 18% en se se. Pr los trtmientos térmios, ls semills se lmenron 4 ºC on 18 % de ontenido de humedd (se se), en olss de polietileno de.17 mm de espesor (Flexoprint) hermétimente errds pr mntener el ontenido de gu de ls semills. En un segundo experimento, ls semills se lmenron por ero o 6 dís, y en d so se sometieron trtmientos térmios de, 1,, 3, 4, 45 (trtmiento omeril) y 5 dís. En un terer experimento, ls semills se sometieron ls siguientes ominiones de lmenmiento previo por trtmiento térmio (en dís): -5, 1-4, -3, 3-, 4-1, 5-, 6-5, 7-4, -3, 9-, 1-1 y 11-. Oil Plm Ppers, N 38, 12

14 12 Un vez relizdos los trtmientos, ls semills se sumergieron en gu orriente durnte siete dís y se oloron l ire miente durnte proximdmente oho hors; luego de lo ul se hiieron grupos de 1 semills (21-22 % de humedd, se se), se trtron on el fungiid omeril Vitvx 4 (roxin % + thirm %), se introdujeron en olss de polipropileno, y se oloron en urtos de germinión, donde l tempertur promedio fue de 29 ºC durnte el dí y de 25 ºC durnte l nohe. Cd trtmiento tuvo utro repetiiones de 1 semills d un. Ls vriles evluds fueron el porentje de germinión (sensu strito: los 7, 14, 21 y 28 dís después de iniid l prue), el porentje de plántuls normles (28 dís) y el porentje de plántuls normles (pérdid de geotropismo, plántuls rquítis y flt de rdíul o plúmul). Se relizó luego un nálisis de vrinz pr d experimento, on ls vriles semill germind (7, 14 y 28 dís (umuldo), y pr el porentje de plántuls normles. L seprión de medis se hizo medinte l prue de Tukey. Primer experimento Resultdos y Disusión El reposo en ls semills es un soluión dpttiv de ls plnts pr grntizr su soreviveni en el tiempo y el espio. L intensidd y permneni del mismo está determind por ftores genétios que l vez son influenidos por el miente ntes y después de l mdurez fisiológi de ls semills (Bethke et l. 4, Bskin y Bskin 1998). Pr romper el reposo y estimulr luego l germinión de ls semills, normlmente se utiliz un trtmiento térmio (4ºC) durnte períodos de tiempo vriles (Adde-Kgyh et l. 1988, Mok y Hor 1977). El ojetivo es logrr el myor porentje de germinión en el menor tiempo posile. En el primer experimento se enontró un inremento signifitivo (p.1) en l germinión deido l lmenmiento previo (6 dìs) l lentmiento los 14 dís de iniid l prue en los trtmientos de -5 y 1-4. Por el ontrrio, l germinión se redujo signifitivmente (p.5) undo l semill se lmenó previmente por 6 dís y posteriormente se sometió l trtmiento térmio de 45 y 5 dís. No se oservó efeto en los trtmientos -3, 3- y 4-1 (Fig.1). El inremento en los dís de lor entre 1 y 45 se soió on un umento en l germinión undo no se lmenó l semill previmente. Semills fress o lmends durnte 6 dís Almenmiento previo dís Almenmiento previo 6 dís. Germinión (%) f f f ef ef ef def f ef d def Dís de lor (4 ºC) + dís lmenmiento posterior Fig. 1. Porentje de germinión (14 dís) de semills de plm eiter sin y on 6 dís de lmenmiento previo l trtmiento de lor (4 ºC). Ls semills se grupron pr reiir diferentes ominiones de dís de trtmiento térmio y tiempo de lmenmiento posterior. Columns on igul letr no difieren entre sí (Tukey: p.5). En el eje x, el primer número denot los dís de lor y el segundo dís de lmenmiento posterior.

15 13 L germinión los siete dís fue myor undo l semill se lmenó previmente durnte 6 dís on ls ominiones 1-4, -3 y 3- (dís de lor y lmenmiento posterior respetivmente) (Fig. 2). Independientemente del lmenmiento previo, l germinión los 7 y 28 dís de iniid l prue fue menor en los grupos de semills que no reiieron el trtmiento de lor y que luego fueron lmends durnte 5 dís (p.5). Tmién es evidente el efeto positivo (p.1) del lmenmiento previo sore l germinión, y que no umentó muho entre los 14 y 28 dís (finl de l prue) deido los ltos porentjes que hín sido lnzdos previmente. L germinión mejoró en todos los grupos de semills que reiieron lor, pero ls diferenis, unque signifitivs, no se onsiderron importntes desde el punto de vist prátio. El efeto positivo del trtmiento térmio fue signifitivo (p.1) en mos grupos de semills que reiieron o no un lmenmiento previo (Figs. 1 y 2). El efeto del lor pr romper el reposo de l semill de l plm eiter está mplimente doumentdo en l litertur (Hussey 1958, Rees 1959, Mok y Hor 1977, Zmrno 1991). Un periodo de lentmiento de solo 1 dís, seguido de 4 dís de lmenmiento 18 ºC fue sufiiente pr otener 6% y 78% de germinión los siete y 28 dís respetivmente (Fig. 2) Con l exepión del trtmiento sin lor (-5: 7% de germinión los siete dís), no se enontró diferenis signifitivs en los demás trtmientos sin lmenmiento previo (6 y 76% de germinión). A los 28 dís l situión se mntuvo, pero l germinión lnzó 9% en lgunos trtmientos. Sin lmenmiento previo - 7 dís 6 dís lmenmiento previo - 7 dís Sin lmenmiento previo -28 dís 6 dís lmenmiento previo -28 dís Germinión (%) d d d d Dís de trtmiento térmio (4 ºC) + dís lmenmiento posterior Fig. 2. Porentje de germinión los 7 y 28 dís en semills sin y on 6 dís de lmenmiento previo y posteriormente sometids diferentes ominiones en l durión del trtmiento térmio y el lmenmiento posterior. Columns del mismo tipo on igul letr no difieren entre sí (Tukey: p.5). Oil Plm Ppers, N 38, 12

16 14 L semill reién osehd tuvo un germinión muy j deido su reposo, pero undo se lmenó por 6 dís, l germinión se inrementó hst lnzr 29% (Figs. 1 y 2). El efeto positivo del lmenmiento está tmién doumentdo en l litertur (Adkins W. et l. 2, Bethke et l. 4, Hker J. 1984, Tiwri et l. 4). Los resultdos de este primer experimento indin que l germinión de l semill de plm eiter puede umentr si est se lmen por un periodo ntes o después del trtmiento de lor pr romper el reposo. No ostnte, periodos myores 45 dís de lor en semills previmente lmends durnte 6 dís, redujeron l germinión en el genotipo estudido. En este so podrí herse presentdo un superión pril del reposo, por lo que el trtmiento térmio plido en los períodos myores pudo fetr l lidd de ls semills. El myor porentje de plnts normles se otuvo on semills previmente lmends durnte 6 dís (p.1) y on los trtmientos on dís reientes de lor (1, y 3), omindos on ntidd dereiente de dís en pos-lmenmiento (4, 3 y ). Con los myores periodos de lentmiento (45 y 5 dís) se redujo (p.5) el porentje de plántuls normles (Fig. 3). Los myores porentjes de plántuls normles (p.5) se otuvieron on semill lmend previmente por 6 dís on los trtmientos de 1-4, -3 y 3- (dís de lor y lmenmiento posterior); sin emrgo en los trtmientos de 45-5 y 5- el porentje de plántuls normles mostró un disminuión (p.5), posilemente deido que sufrió deterioro por el trtmiento térmio. Por otr prte, en l semill sin lmenmiento previo (6 dís), los trtmientos de -5 y 1-4 presentron los menores porentjes de plántuls normles (p.5), mientrs que los myores vlores se otuvieron on los trtmientos de 45-5 y 5-, deido que presentn myor reposo por lo que el trtmiento térmio no fetó negtivmente el porentje de plántuls normles. Sin lmenmiento previo 6 dís de lmenmiento previo Plántuls normles (%) ghi d i de ghi efg fghi fghi fghi efg d Dís de trtmiento térmio + dís lmenmiento posterior Fig. 3. Porentje de plántuls normles (7 y 28 dís) provenientes de semills sin y on 6 dís de lmenmiento previo, y que luego fueron sometids diferentes ominiones en l durión del trtmiento térmio y lmenmiento posterior. Resultdos on igul letr no difieren entre sí (Tukey: p.5).

17 15 Segundo experimento Los dtos del primer experimento indiron que el periodo de lmenmiento previo l lentmiento pr romper el reposo tuvo un efeto myor sore l germinión, que el lmenmiento posterior l trtmiento térmio. Con est informión se plneó un segundo experimento vrindo el periodo de lentmiento. El lmenmiento previo l lentmiento fvoreió signifitivmente l germinión (p.1) en los reuentos hehos los 7 y 14 dís, pero no los 28 dís. En generl, los mejores resultdos de germinión se otuvieron on un periodo de lentmiento de 3 dís o más. Con un lentmiento igul o superior los 4 dís se logró l máxim germinión en solo dos semns (Fig. 4). Semill germind (%) dís 28 dís d Dís de trtmiento térmio (4 ºC) Fig. 4. Efeto del período de trtmiento térmio sore el porentje de semills germinds, sin onsiderr lmenmiento previo o posterior. Columns del mismo tipo on igul letr no difieren entre sí (Tukey: p.5). d d d e d e d Se enontró que undo no se utilizó lmenmiento previo (6 dís), períodos de lentmiento menores 3 dís no produjeron un germinión lt. Zmrno (1991) enontró que l germinión fue lent on un trtmiento de lor de solo dís, unque eventulmente se otuvo un germinión eptle. Además, on o sin lmenmiento previo los vlores myores de germinión se otuvieron on 4 y 45 dís de lor (p.5). Se oservó un desenso en l germinión on el trtmiento de 5 dís de lor undo l semill se lmenó previmente por 6 dís (Fig. 5). Esto refirm l oservión de que el lmenmiento previo redue l intensidd del reposo de l semill y l he más sensile periodos prolongdos on lts temperturs. Por l mism rzón, on un lmenmiento de dos meses, result sufiiente un mes de lentmiento pr logrr un lt germinión. Oil Plm Ppers, N 38, 12

18 16 A Semill germind (%) Sin lmenmiento previo -14 dís sin lmenmiento previo -28 dís d e e e e e e Dís de trtmiento térmio (4 ºC) d 6 dís de lmenmiento previo -14 dís 6 dís de lmenmiento previo -28 dís d de e e e e e de d B Fig. 5. Durión del trtmiento de lor pr romper el reposo y porentje de semills germinds, on o sin un periodo de lmenmiento previo. Columns del mismo tipo on igul letr no difieren entre si (Tukey: p.5). Con respeto l porentje de plántuls normles, en generl los trtmientos térmios de, 1 y dís no fueron deudos, desde un punto de vist omeril, pr superr el reposo de ls semills. Por el ontrrio, semills sin lmenmiento previo on 4, 45 y 5 dís de lor y semills on lmenmiento previo lentds por 3, 4 y 45 dís lnzron porentjes de plántuls normles superiores (p.5) que vriron entre 85 y 9%. En ontrposiión el trtmiento on lmenmiento previo y 5 dís de lor, mostró un disminuión signifitiv en el porentje de plántuls normles (p.5) on respeto los mejores trtmientos (Fig. 6). Lo que refuerz l posiión de que el trtmiento térmio no dee relizrse indisrimindmente y que dee onsiderrse el historil de l semill. sin lmenmiento previo 6 dís de lmenmiento previo Plántuls normles (%) g g g g g fg e f e d Dís de trtmiento térmio (4 ºC) Fig. 6. Porentje de plántuls normles los 7 y 28 dís otenids de semills sin y on 6 dís de lmenmiento previo l lentmiento y luego sometids diferentes ominiones de trtmientos térmios y de lmenmiento posterior. Números on igul letr no difieren entre sí (Tukey: p.5).

19 17 Terer experimento En este experimento se evluron periodos de lmenmiento myores 6 dís previos l trtmiento de lor. Se orrooró el efeto positivo (p.1) del lmenmiento previo en ominión on el lentmiento, y que en ls tres evluiones de germinión (7, 14 y 28 dís), los mejores trtmientos fueron quellos donde l durión del lmenmiento previo fue de 7, o 9 dís on periodos de lentmiento de 4, 3 y dís respetivmente. En todos los sos, el efeto fue similr en lo que se refiere plántuls normles (Fig. 7). De similr mgnitud fue l germinión otenid on los trtmientos de 5, 4 y 3 dís de lor pero on ortos períodos de lmenmiento previo (, 1 y dís), resultdos que oiniden on lo oservdo en los experimentos nteriores. Se oserv que los trtmientos térmios de y 1 no son sufiientes pr superr el reposo (Figs. 5, 6 y 7), ún on lmenmientos previos tn prolongdos omo 1 o 11 dís. Semill germind 28 dís Plántuls normles 28 dys Porentje Almenmiento previo + trtmiento térmio (4 C) Fig. 7. Porentje de semills germinds y de plántuls normles los 28 dís en semills on diferentes períodos de lmenmiento previo y luego sometids diferentes periodos de trtmiento térmio. Columns y resultdos on igul letr no difieren entre sí (Tukey: p.5). Durnte los experimentos, en generl se oservó un j proporión de plántuls normles (pérdid de geotropismo y plántuls rquítis) y el porentje oservdo no se relionó on ningún trtmiento en prtiulr. Tmién fue evidente que ls semills on l germinión más temprn (7 dís) presentron los porentjes más jos de plántuls normles, espeilmente undo l germinión fue 85% o myor. Ls normliddes umentron en ls semills de más lent germinión, lo ul posilemente se relione on el vigor de l semill (Assoition of Offiil Seed Anlysts 2, Tekrony y Egli 1991). El lmenmiento previo de ls semills (18- ºC) luego de l oseh ontriuye superr el reposo y permite entones utilizr periodos de lentmiento más ortos pr otener ltos porentjes de germinión y de plántuls normles; lo ul horr tiempo, filit l entreg de semills germinds los lientes y grntiz un myor porentje de plnts normles luego de l siemr en el previvero. Corrdo y Wuidrt (199) otuvieron un lt germinión en semill de Eleis guineensis luego de seis meses de lmenmiento y un trtmiento térmio de dís 39 ºC. Por el ontrrio, los resultdos otenidos en este trjo indin que l germinión puede verse fetd en form negtiv si se lmen l semill por 5-6 dís y luego se expone un periodo de lentmiento (4ºC) de 5 dís, l menos en l vriedd utilizd en estos experimentos. Un respuest similr fue otenid por Beugré et l. (9), quienes determinron un efeto negtivo del trtmiento térmio sore l germinión de semills de E. guineensis onforme umentó el tiempo de lmenmiento. Oil Plm Ppers, N 38, 12

20 18 Myint et l. (1) determinron que l remoión del opérulo en semills de E. guineensis produjo porentjes de germinión myores de % y omprles on los otenidos on l pliión de lor seo, mientrs que Jiménez et l. 8 midieron un importnte reduión en l onentrión de áido ísio posterior l trtmiento térmio, lo que sugiere que l lteni en est espeie es un fenómeno físio y fisiológio. Tmién es posile que semills de diferentes genotipos (Beugré et l. 9), de diverss ltitudes, e inluso de diferentes períodos de oseh puedn omportrse de mner diferente nte un determindo trtmiento de lor pr romper su lteni. Litertur itd Adde-Kgyh K. A., Osfo D. M., Olympio N. S., Atur O. K. (1988). Effet of seed storge, het pre-tretment nd its durtion on germintion nd growth of nursery stok of the idoltri plm, Eleis guineensis vr idoltri (Chevlier). Trop. Agri. (Trinidd) 65: Adkins S., Bellirs S., Loh D. 2. Seed dormny mehnisms in wrm seson grss speies. Euphyti 126: 13 Assoition of Offiil Seed Anlysts (AOSA). (2). Seed Vigor Testing Hndook. Contriution No. 32. Assoition of Offiil Seed Anlysts. New Mexio 83 Bskin C.C., Bskin J. M. (1998). Seeds. Eology, iogeogrphy, nd evolution of dormny nd germintion. Ademi Press, Sn Diego, 666p Bethke, P., Guler, F., Josen J., Rusell J. 4. Dormny of Aridopsis seeds nd rley grins n e roken y nitri oxide. Plnt 219(5): Beugré-Mnéhonon M., Koukou-Koukou L., Bognonkpé J.P., Konn- Koukou, E., Koukou-Tnoh H., Koudio-Ytty J. (9). Afrin J. of Agri. Res. 4(1): Corrdo F., Wuidrt W. (199). Germintion des grines de plmier à huile (Eleis guineensis) en s de polyéthylène. Méthode pr "hleur sèhe" Olégineux 45 (11) : Ellis R. H., Hong, T. D., Roerts E. H. (1985). Hndook of seed tehnology for genenks. Vol. II: Compendium of speifi germintion informtion nd test reommendtions, Interntionl Bord for Plnt Geneti Resoures, Rome, 456 p Hker J. B., Andrew M. H., MIvor J. G., Mott J. J Evlution in ontrsting limtes of dormny hrteristis of seed of Digitri milnjin. J. of Applied Eology 21(3): Herrer J., Alizg R., Guevr E. (1998). Use of hemil tretments to indue seed germintion in oil plm (Eleis guineensis Jq.). ASD Oil Plm Ppers 18: 1-1 Hussey G. (1958). An nlysis of the ftors ontrolling the germintion of the seed of oil plm, Eleis guineensis (jq.). Annls of Bot. 22: Jiménez, V., Guevr, E., Herrer, J., Alizg, R., Bngerth F. (8). Chnges in hormone onentrtions during dormny relese of oil plm (Eleis guineensis) seeds. Seed Siene nd Tehnology 6(3): Mok C. K. nd Hor Y. L. (1977). The storge of oil plm (Eleis guineensis) seed fter high temperture tretment. Seed Siene nd Tehnology 5: Murugesn P., Mthur R. K., Pilli R. S. nd Bu M. K. (5). Effet of elerted ging on seed germintion of oil plm (Eleis guineensis Jq. vr. dur Be.). Seed Tehnology 27(1): Murugesn, P., Bijimol G. nd Hseel H. 8. Effet of different sustrtes on growth of germinted oil plm hyrids seeds. Indin J. of Hort. 65(4) Myint, T., Chnprsert W., Srikul S. Germintion of seed of oil plm (Eleis guineensis Jq.) s ffeted y different mehnil srifition methods. Seed Si. nd Teh. 38 (3): Rees A. R. (1959). Germintion of oil plm seed: lrge sle germintion. J. of West Afrin Inst. for Oil Plm Res. 3:76-82 Tekrony D. M., Egli D. B. (1991). Reltionship of seed vigor to rop yield: A Review. Crop Si. 31: Tiwri, C.; Shrm, S.; Verm, R. 4. Effet of fungiide nd plnt growth hormones on germintion of tek (Teton grndis). J. of Trop. Forest Si. 16:25-34 Tomlinson P. B. (199). The struturl iology of plms. Oxford University Press, New York. 477 pp Zmrno R Influeni de períodos de lmenmiento y lentmiento sore l germinión de semill de plm frin. Tesis de grdo. F. Ing. Agron. Universidd Téni de Mni (Eudor). 7 p

21 19 Reovery of low-grde (wek) oil plm rmets during the hrdening period: use of nti-stress produts nd ntgonist nd symioti miroorgnisms Pul Gde, Crlos Chinhill, Nidi Guzmán Astrt Severl nti-stress produts nd miroorgnisms were used in n ttempt to inrese the survivl rte of oil plm rmets showing suoptiml development when they were removed from the tissue ulture lortory. Most rmets with suoptiml growth in the lortory my die premturely when tken to ex vitro onditions, sine they dehydrte nd re unle to form roust root system. Additionlly, mny of them my suum to ttk from soil-dwelling pthogens using dmping-off. However, onsidering tht the desired genes of superior plms (ortets) re still present, ttempts to reover portion of suh rmets were onsidered worthwhile. Produts tested were surose (tle sugr), rssinosteroid (phytohormone), two nti-trnspirnt gents (Vpor Grd 98% pinolene nd Frutier ), hydrogented triylglyerol), the fungus Trihoderm spp. (s n ntgonisti orgnism) nd two ommeril myorrhizl fungi (Eomi nd Eofungi ). Drenhing the plnting sustrte with the fungiide Bnrot ws used s ontrol to eliminte soil-dwelling pthogens. Tretments were pplied on rmets of three ompt lones tht were onsidered to hve suoptiml vegettive growth for ommeriliztion. The survivl rte of treted rmets of two lones (Frn nd Conte) did not inrese when ompred with the ontrol, ut in Zeus, survivl rte improved with the pplition of surose, Frutier 1% nd Bnrot. Lef turgidity improved in plnts treted with Trihoderm fungi nd when the fungiide Bnrot ws used to drenh the plnting sustrte. Trihoderm spp. inresed y % the numer of turgid plnts in Frn. The use of Bnrot, Eomi, Trihoderm spp. nd Eofungi ws ssoited with n inrese in lef emission rte in Frn lones, ut for Zeus the est results were otined with surose 1% nd Vpor Grd (1.25%). The mny inonsistenies found in the responses to the different tretments seem to indite tht there were other ftors tht hd stronger influene on determining the response of the vitro plnts during the limtiztion proess. Rmet qulity, prtiulrly in terms of the development of the root system (nd sl ul) when removed from the tissue ulture lortory, seemed to e determining ftor during limtiztion, nd s suh, it nnot e ovited y pplying ny of the tretments used, whether nti-stress produts or miroorgnisms. Key words: rmet, limtiztion, nti-stressing gent, myorrhiz M.S. student. Fultd de Cienis Agrolimentris, Universidd de Cost Ri Consultnt for ASD Cost Ri, mlhinhill@sd-r.om ASD de Cost Ri, n.guzmn@sd-r.om Oil Plm Ppers, N 38, 12

22 Introdution Plnts developed in vitro (known s rmets in oil plm) suffer severe stress while trying to redpt their physiology nd ntomy from heterotrophi (tissue ulture lortory) to n utotrophi ondition during the limtiztion proess (Serret nd Trills, Shultz 1). During this period, some rmets suum to dehydrtion or re killed y soil-dwelling pthogens, nd this prolem is more ommon in rmets presenting suoptiml development, prtiulrly poor root system or thin stem (sl ul). Besides this, miro propgtion is done under septi onditions, where oth enefiil nd hrmful miroorgnisms re exluded. There re mny produts tht re used to inrese survivl of stressed plnts (nti-trnspirnts, phytohormones, plnt extrts, et.) nd to redue losses used y soil-dwelling pthogens y inoulting the soil with enefiil (myorrhize) or ntgonisti (Trihoderm spp.) orgnisms (Chves M. et l. 1985, Nuñez M. nd Rodríguez C., Shultz C. 1). Surose (tle sugr) is not true nti-trnspirnt; it is n osmotilly tive sustne tht promotes wter uptke, serving s n nti-stressing produt. True nti-trnspirnts t y forming film on lef surfes reduing wter loss (Chves et l. 1985). Considering the ost of produing vitro plnts nd tht vlule genes re still present in eh rmet, it ws onsidered importnt to try to inrese the survivl rte during the hrdening proess y treting the rmets with the ove mentioned produts, regrdless of their spet. Mterils nd Methods The work ws done in the Coto lolity on the Pifi ost of Cost Ri in 6. Averge temperture during the period ws 26 ºC (mx. 33, min ºC) nd reltive humidity ws 91%. Rmets of three (Frn, Conte nd Zeus) ompt lones (Alvrdo et l. 6) produed in the tissue ulture lortory of ASD Cost Ri were limtized following the stndrd proedure t tht time. To strt the limtiztion proess, the rmets were plnted in lk polyethylene gs ontining lom soil s sustrte, nd pled under shde (srn fri, 7%) within plsti hmer (reltive humidity > 9%). The limtiztion hmer nd the shde were grdully removed to expose the plnts to lower reltive humidity nd to inrese the light intensity rehing the plnts. During this period, temperture, nutrition nd the sustrte (ertion) were refully monitored to mintin them within determined rnges. Previous experienes with these three lones hd shown tht low survivl rtes during limtiztion hd severl uses nd tretments were hosen ordingly. Myorrhizl produts (Eomi nd Eofungi ), the ntgonisti fungi Trihoderm sp. nd plnt extrt (Bromorex ) were used on the Frn lone, onsidered very suseptile to dmping-off. Eomi nd Eofungi re ommeril produts ontining the myorrhizl fungi Glomus fsiultum nd mixture of Glomus ggregtum, Glomus intrrdies nd Glomus mossee respetively. Eomi nd Eofungi were lso used on the Conte lone, whih hd prolems in estlishing funtionl root system fter plnting. These produts were used t doses of 1., 2.5 nd 5. g/plnt (Eomi ), nd.1,.2 nd.4 g/plnt (Eofungi ) pplied on the sustrte efore plnting the rmets. The fungiide Bnrot ws used s ontrol, pplied s soil drenh. Anti-trnspirnts (Vpor Grd, 98% pinolene nd Frutier, hydrogented triylglyerol) nd nti-stress produts (tle sugr, 1% p/v nd the phytohormone rssinosteroid, 2 ppm) were pplied on the lone Zeus, where losses were due minly to desition. Vpor Grd ws used t 1., 2.5 nd 5% (v/v) nd Frutier t 1, 12.5 nd 15% (v/v). The rmets were sumerged for seonds in wter solution ontining the produt. Other detils of the tretments pper in Tle 1.

23 21 Dt proessing Tretments nd doses were treted s independent vriles. Dependent vriles were rmet survivl rte, plnt qulity expressed s turgidity (determined t 15, 33 nd 45 dys fter plnting), time tken for 5% of the plnts to produe the first fully developed lef fter plnting, nd totl numer of leves t the end of the hrdening period. Tretments were rrnged in omplete rndomized lok design with six replitions of 1 plnts eh per tretment. Mens of numer of leves per plnt were seprted using LSD-Fisher, 5% (Infostt ver. 1.). The vriles with inomil nd multinomil distriutions (survivl rte nd turgidity) were nlyzed using ontrsts (logisti 2 regression test, type 3 of Chi (SAS ver. 9.1)). Survivl Results There were no sttistil differenes in survivl rte etween tretments t the end of the hrdening period for the lones Frn (Fig.1) nd Conte (Fig.1). For the lone Zeus, there ws etter survivl rte when surose nd Frutier 1% were used, ut still, results were not onsidered onlusive (Fig.1). Tle 1. Detils of tretments pplied to lone Frn rmets, whih were known for their suseptiility to soil-orne pthogens during the hrdening period Tretments Doses Time of pplition Form of pplition Trihoderm sp 2.8 g/plnt: 1x1 spores/g 7 dys efore plnting At plnting 7 dys fter plnting Soil Root immersion Soil 1 1 Eomi (Glomus fsiultum) 2.5 g/plnt At plnting At ottom of plnting hole Eofungi (Glomus ggregtum, Glomus intrrdies nd.2 g/plnt At plnting Immersion of roots Glomus mossee) Bromorex (oily plnt extrt: pepper, mustrd, grli) 2,5 /l One dy efore plnting 7 dys post plnting Soil 1 Control: Bnrot (etridizol 15%, methylthiofnte 25%),8g/l 2-3 dys efore plnting Oil Plm Ppers, N 38, 12

24 22 Turgidity Rmet turgidity ws lssified into three tegories: norml (plnts eret, hydrted nd with no signs of flidity), intermedite, nd not turgid (wilted) (Fig. 2). In generl, the use of the fungus Trihoderm sp. improved the pperne (turgidity) of rmets of the lone Frn (Fig. 3). However, the lone Conte seemed to respond etter to some doses of Eofungi while Zeus performne ws etter in the ontrol plnts treted with the fungiide Bnrot. At the end of the experiments it ws ler tht neither the myorrhizl tretments nor the nti-trnspirnts used improved rmet performne. ) Frn P Chi 2 =,.8256 ) Conte P Chi 2 =, Perentge Perentge Bnrot Bromorex Eofungi Eomi Trihoderm EF.1 EF.2 EF,2 EM 1 EM 2.5 EM 5 BANROT ) Zeus P Chi 2 <.1 Perentge Sugr Bnrot Brsinoes Frut 1% Frut 12,5% Frut 15% VG,5% VG 1,25% VG 2% Soreviveni Mortlidd Fig.1. Contrst tests (logisti regression), survivl (%) nd umulted mortlity t the end of the hrdening period for the lones Frn (), Conte () nd Zeus (), n=6.

25 23 Fig. 2. Aspet (turgidity) of oil plm rmets: A. norml, B. intermedite, C. wilted. Perentge ) Frn ) Conte Perentge Bnrot Bromorex Eofungi Eomi Trihoderm EF.1 EF.2 EF,4 EM 1 EM 2.5 EM 5 Bnrot Perentge ) Zeus Turgid Intermedite Wilted Azúr Bnrot Brsinoes Frut 1% Frut 12,5% Frut 15% VG,5% VG 1,25% VG 2% Fig. 3. Aspets (turgidity) of the rmets of three lones 45 dys fter plnting. Rmets were exposed to severl tretments to improve survivl nd qulity during the hrdening proess. Oil Plm Ppers, N 38, 12

26 24 New leves produed fter plnting Th5 (time tken for 5% of rmets to produe the first fully developed lef) ws similr in ll three lones studied. For Zeus nd Frn this period ws 95 nd 91 dys respetively. Conte hd poor spet t the end of the hrdening period, so no dt were olleted for this lone. There were no differenes due to tretments with respet to totl numer of new leves produed fter plnting, ut there ws tendeny for improvement when surose nd VG were used on Zeus, nd Trihoderm nd Eofungi on Frn (Fig. 4). ) Frn P =.1635 Promedio hojs 2,5 2 1,5 1,5 1,82 2,7 2,13 2,28 2,3 Bromorex Bnrot Eomi Trihoderm Eofungi 3 2,5 ) Zeus P =.2471 Promedio hojs 2 1,5 1,5 2,27 1,81 1,67 1,69 1,87 1,53 2,39 1,9 1,85 Sugr Brsino Frut 1% Frut12,5% Frut 15% V.G.,5% V.G.1,25% V.G.2% Bnrot Trtmientos Fig. 4. New leves produed during the hrdening proess in three lones ording to severl tretments imed to improve survivl rte. LSD Fisher (5%). n=6.

27 25 Conlusions Severl tretments were pplied to oil plm rmets tht were onsidered to hve suoptiml qulity for ommeril use when they left the tissue ulture lortory. The min ojetions to these rmets were the mount (few) nd pperne of the root system (olor). Besides this, these plntlets showed thin sl ul. It ws known tht when rmets like these were put into the limtiztion hmer, they normlly hd poor survivl rtes or produed under-developed plnts t the end of the prenursery phse. Most losses were normlly due to desition nd/or the ttk of soil-orne pthogens. However, theoretilly these plnts still rry the desired trits of the ortet (superior plm) from whih they were otined, nd ttempts to reover some of them through the pplition of prtiulr tretment were onsidered worthwhile. The results showed tht there ould e no ompromise with rmet qulity, sine this ws ruil spet for gurnteeing the suessful estlishment of the plntlets during the hrdening proess. Rmets showing underdeveloped root systems or eril prts were more suseptile to desition or to suffering ttks y soil-orne pthogens during limtiztion. The ttempts to improve performne during the hrdening of suh rmets through the pplition of reovery tretment suh s nti-trnspirnts, myorrhize, surose, or fungi like Trihoderm did not hieve onlusive results. Nevertheless, it my still e possile to otin etter response in these suoptiml rmets y pplying other tretments or even hnging the wy suh tretments re pplied. For exmple, the nti-trnspirnts lose effetiveness over time (Chvez et l. 1985) nd it is possile tht they lost their protetive tion fter some time onsidering tht the hrdening period is quite long. Produts suh s surose nd the fungus Trihoderm my hve some potentil to improve rmet performne during limtiztion. Literture Chves S., Hernández B., Gutiérrez Z Efeto de ntitrnspirntes y zúr utilizdos en el trsplnte de fetos en ríz desnud. Agronomí Costrriense 9 (1): Guzmán N., Perlt F. 1. Advnes in tissue ulture propgtion of ompt oil plm lones in Cost Ri. ASD Oil Plm Ppers (Cost Ri). 35:1-12 Núñez M., Roin C.. Brsinoesteroides: nuevos reguldores del reimiento vegetl on mplis perspetivs pr l griultur. Ed. MA Teixeir Zullo. (Doumentos Instituto Agronómio Cmpins,nº 68). Cmpins, BR. 83 p. Shultz C. 1. Effet of vesiulr rusulr myorrhiz on survivl nd post vitro development of miropropgted oil plms (Eleis guineensis Jq.). Tesis Ph. D. Fkultät für Agrrwissenshften, Universität Göttingen. GER. 151 p. Serret M., Trills M.. Effet of light nd surose levels on the ntomy, ultrstruture, nd photosynthesis of Grdeni jsminoides Ellis leflets ultured in vitro. Int. J.Plnt. Si. 161: Oil Plm Ppers, N 38, 12

28 26 Reste de rmets de plm eiter on desrrollo suóptimo durnte el periodo de endureimiento: uso de ntitrnspirntes y miroorgnismos simióntios y ntgonists Pul Gde, Crlos Chinhill, Nidi Guzmán Resumen Se proron vrios produtos nti-estrés y miroorgnismos enéfios en un intento pr umentr l ts de soreviveni de rmets de plm eiter que mostrn un desrrollo suóptimo l slir del lortorio de ultivo de tejidos. Estos rmets tienen un lt ts de mortlidd o ien produen plnts de po lidd durnte el periodo de limtión, ddo que sufren fuerte deseión o son tdos por ptógenos hitntes del suelo. No ostnte, si se onsider que estos rmets tmién llevn onsigo los genes deseles de l plnt superior (ortet) de donde se originron, es justifile intentr reuperr un proporión myor de ests plnts l finl del periodo de endureimiento. Con este fin en mente, se proó sros, un rsinosteroide (phytohormone), dos ntitrnspirntes (Vpor Grd, 98% pinolene y Frutier : triilglierol hydrogendo), el hongo Trihoderm spp. (ntgónio) y dos formuliones omeriles de miorrizs (Eomi y Eofungi ). Se utilizó un drenh on el fungiid Bnrot plido l sustrto de siemr omo trtmiento testigo pr eliminr los hongos ptógenos en el suelo. Los trtmientos fueron plidos sore rmets de tres lones omptos, los ules presentn un desrrollo onsiderdo suóptimo l slir del lortorio. L soreviveni durnte l limtizión de los lones Frn y Conte no fue myor que en el ontrol, pero en Zeus mejoró on l pliión de zúr, Frutier 1% y Bnrot. L turgeni de ls hojs mejoró en ls plnts trtds on el hongo Trihoderm y undo se utilizó el fungiid Bnrot. El uso de Trihoderm spp. se soió on un inremento de % en el número de plnts turgentes en el lon Frn l finl del periodo de limtión. El fungiid Bnrot, Eomi, Trihoderm spp y Eofungi se soió on un umento en l ts de emisión folir en Frn. No ostnte, en el lon Zeus, los mejores resultdos fueron on sros l 1% y Vpor Grd 1.25%. Ls muhs e importntes inonsistenis oservds en l respuest los trtmientos usdos preen indir que existieron otros ftores que tuvieron un influeni muy notori sore l hilidd de los rmets de superr on éxito l etp de endureimiento luego de ndonr ls ondiiones de lortorio. En prtiulr, l lidd de rmet, definid por l ntidd y prieni del sistem rdil (y posilemente en menor grdo por el grosor del ulo) preen her sido los ftores determinntes en el desempeño de l plnt, de mner que no puede her ompromiso on este ftor. Plrs lve: rmet, limtizión, endureimiento, gentes ntiestresntes, orgnismos enéfios, miorrizs M.S. student. Fultd de Cienis Agrolimentris, Universidd de Cost Ri Consultnt for ASD Cost Ri, mlhinhill@sd-r.om ASD de Cost Ri, n.guzmn@sd-r.om Oil Plm Ppers, N 38, 12

29 27 Introduión Ls vitroplnts, onoids omo rmets en plm eiter, sufren un fuerte estrés mientrs trtn de redptr su fisiologí y ntomí desde un ondiión heterotrófi (en el lortorio de ultivo de tejidos) hi un utotrófi durnte el periodo de endureimiento (Serret y Trills, Shultz 1). Durnte este periodo, lgunos rmets se deshidrtn o ien son tdos por ptógenos hitntes del suelo, y este prolem es más freuente en quellos rmets on un desrrollo del sistem rdil onsiderdo suóptimo, y en menor grdo del ulo o se. Adiionlmente, el rmet es formdo en el lortorio en un miente séptio, en donde se exluyen miroorgnismos, tnto enefiiosos omo ptogénios. En el merdo se enuentrn vrios produtos que son utilizdos pr inrementr l soreviveni de plnts estresds (ntitrnspirntes, fitohormons, extrtos de plnts et.). Tmién se h trtdo de reduir l mortlidd usd por ptógenos en el suelo plindo orgnismos enéfios omo miorrizs y ntgonists omo Trihoderm spp. (Chves M. et l. 1985, Nuñez M. y Rodríguez C., Shultz C. 1). El zúr de mes (sros), no es verddero ntitrnspirnte, sino un gente ntiestresnte, puesto que es osmótimente tiv y promueve l tom de gu. Los verdderos ntitrnspirntes, formn un pelíul sore l superfiie de l hoj que redue l pérdid de gu (Chves et l. 1985). Si se onsider que el osto de produir un vitroplnt es lto omprdo on l semill sexul y que tods ls plnts provenientes de un plnt superior (ortet) llevn los genes deseles independientemente de su speto, es importnte entones intentr reuperr l myor proporión de los rmets pr ser utilizdos en siemrs omeriles. En este trjo se siguió est ide, pr lo ul se pliron vrios trtmientos sore rmets que presentn un desrrollo físio onsiderdo por dejo del óptimo. Mteriles y Metodos El estudio fue relizdo en l lolidd de Coto en el Pífio sur de Cost Ri durnte el 6. L tempertur promedio durnte este periodo fue de 26 ºC (Mx. 33, Min ºC) y l humedd reltiv de 91%. Se utilizron rmets de tres lones omptos (Frn, Conte y Zeus) produidos en el lortorio de tejidos de ASD Cost Ri (Alvrdo et l. 6), los ules fueron endureidos siguiendo el protoolo estándr de l ompñí en ese momento. En generl, el proedimiento onsistió en semrr los rmets en olss de polietileno negrs llens on suelo frno renoso y ponerlos en ámrs húmeds onstruids on plástio trnsprente pr mntener un lt humedd reltiv. Ests estruturs su vez, se onstruyeron jo otr que sostení un somr de srán de 7%. L ámr húmed y l somr fueron removids grdulmente pr permitir l exposiión de los rmets ls ondiiones externs. Durnte el periodo de limtizión, ls ondiiones de tempertur, humedd reltiv y nutriión de ls plnts fueron mntenids dentro de los prámetros estleidos. Experienis previs on estos tres lones indin que su soreviveni l periodo de endureimiento er j, lo ul se podí deer diferentes rzones, por lo ul los trtmientos plidos se esogieron tomndo esto en onsiderión. Los produtos on miorrizs (Eomi y Eofungi ), el hongo ntgonist Trihoderm sp. y un extrto de plnts (Bromorex ) se usron en el lon Frn, el ul hí mostrdo muh suseptiilidd los hongos del suelo usntes del ml del tlluelo (dumping-off). Eomi y Eofungi son produtos omeriles que ontienen el hongo Glomus fsiultum y un mezl de G. ggregtum, G. intrrdies y G. mossee respetivmente. Eomi y Eofungi tmién se usron en el lon Conte, el ul hí tenido prolems pr estleer

30 28 un sistem rdil funionl durnte l limtizión. Estos produtos se usron on dosis de 1., 2.5 y 5. g/plnt (Eomi ), y de.1,.2 y.4 g/plnt (Eofungi ), plidos sore el sustrto ntes de l siemr. El fungiid Bnrot se usó omo trtmiento testigo plido omo drenh l sustrto. Los ntitrnspirntes Vpor Grd (98% pinoleno) y Frutier (triglierol hidrogendo) y otros produtos ntiestrés (zúr de mes, 1% p/v y l fitohormon rsinosteroide, 2 ppm) se pliron en el lon Zeus, en donde ls pérdids durnte el endureimiento se soin priniplmente l deseión de ls plnts. El Vpor Grd se usó 1., 2.5 y 5 % (v/v) y el Frutier 1, 12.5 y 15% (v/v). Los rmets se sumergieron durnte segundos en un soluión uos que ontení el produto. Otros detlles se muestrn en el Cudro 1. Análisis de l informión Los trtmientos y ls dosis se onsiderron ls vriles independientes y ls dependientes fueron l ts de soreviveni de los rmets, l lidd de l plnt otenid expresd por su turgeni (determind los 15, 33 y 45 dís después de l siemr), el tiempo trnsurrido pr que 5% de ls plnts emitiern l primer hoj totlmente desrrolld y el número totl de hojs produids l finl del periodo de endureimiento. Los trtmientos se rreglron omo un DBCA on seis repetiiones de 1 rmets d un. Ls medis del número de hojs por plnt se seprron on LSD-Fisher, 5% (Infostt ver. 1.). Ls vriles on distriuión inomil y multinomil (ts de soreviveni y turgeni) se nlizron usndo ontrstes (logisti regression 2 test, type 3 of Chi (SAS ver. 9.1). Resultdos Soreviveni No se enontrron diferenis signifitivs en l En el so del lon Zeus, se oservó un mejor ts de soreviveni de los rmets de los lones en l soreviveni undo se utilizó zúr de Frn y Conte deids trtmientos (Fig.1). mes y el Frutier 1%. Cudro 1. Detlle de los trtmientos usdos sore rmets del lone Frn, onoido por su suseptiilidd l tque de hongos ptógenos hitntes del suelo durnte l limtizión Trtmientos Dosis Tiempo de pliión Form de pliión Trihoderm sp Eomi (Glomus fsiultum) 2.8 g/plnt: 1x1 espors/g 2.5 g/plnt 7 dís ntes de l siemr A l siemr 7 dís después de l siemr A l siemr Suelo Inmersión de ríes Suelo Al fondo del hoyo de siemr 1 1 Eofungi (Glomus ggregtum, Glomus intrrdies nd.2 g/plnt A l siemr Inmersión de ríes Glomus mossee) Bromorex (extrto de plnts: pimient, mostz, jo) 2,5 /l Un dí ntes de l siemr 7 dís después de l siemr Suelo 1 Control: Bnrot (etridizol 15%, methylthiofnte 25%),8g/l 2-3 dís ntes de l siemr

31 29 Turgeni L turgeni de los rmets fue lsifid en tres tegorí: norml (plnts erets on tejidos hidrtdos sin señles de flidez), intermedi y sin turgeni (fláidos) (Fig. 2). En generl, el uso del hongo Trihoderm sp. mejoró l prieni (turgeni) de los rmets del lon Frn (Fig. 3). No ostnte, el lon Conte preió ser más fvoreido on lguns de ls dosis de Eofungi, y el lon Zeus luió mejor en plnts en donde el sustrto hí sido trtdo on el fungiid Bnrot. Al finl de los experimentos fue lro que ni ls miorrizs, ni los ntitrnspirntes mejorron el desempeño de los rmets l finl de periodo de limtizión. ) Frn P Chi 2 =,.8256 ) Conte P Chi 2 =, Porentje Porentje Bnrot Bromorex Eofungi Eomi Trihoderm EF.1 EF.2 EF,2 EM 1 EM 2.5 EM 5 BANROT ) Zeus P Chi 2 <.1 Porentje Azúr Bnrot Brsinoes Frut 1% Frut 12,5% Frut 15% VG,5% VG 1,25% VG 2% Soreviveni Mortlidd Fig.1. Prue de ontrstes (logisti regression). Soreviveni (%) y mortlidd umuld l finl del periodo de endureimiento de los lones Frn (), Conte () y Zeus (), n=6. Oil Plm Ppers, N 38, 12

32 3 Fig. 2. Aspeto (turgeni) de los rmets A. norml, B. intermedio, C. sin turgeni Porentje ) Frn ) Conte Perentge Bnrot Bromorex Eofungi Eomi Trihoderm EF.1 EF.2 EF,4 EM 1 EM 2.5 EM 5 Bnrot Porentje ) Zeus Turgente Poo Turgente Sin Turgeni Azúr Bnrot Brsinoes Frut 1% Frut 12,5% Frut 15% VG,5% VG 1,25% VG 2% Fig. 3. Aspeto (turgeni) de los rmets de tres lones 45 dís después de l siemr (periodo de endureimiento). Los rmets fueron trtdos on vris sustnis y miroorgnismos pr mejorr l soreviveni y l lidd de ls plnts