11 knúmero de publicación: kint. Cl. 6 : C12N 15/54 DE PATENTE EUROPEA

Transcripción

1 k 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 knúmero de publicación: kint. Cl. 6 : C12N 15/54 C12N 15/82, C12N 15/70 C12N 15/11, C12N 9/10 C12N 5/10, A01H 5/00 12 k TRADUCCION DE REIVINDICACIONES DE SOLICITUD T1 DE PATENTE EUROPEA 86 k Número de solicitud europea: k Fecha de presentación de la solicitud: k Número de publicación de la solicitud: kfecha de publicación de la solicitud: k 30 Prioridad: US P k 71 Solicitante/s: NORTH CAROLINA STATE UNIVERSITY 1 Holladay Hall, Box 7003 Raleigh, NC , US k 43 Fecha de la publicación de la mención BOPI: k 72 Inventor/es: Conkling, Mark A.; Mendu, Nandini y Song, Wen k 46 Fecha de publicación de la traducción de las reivindicaciones: k 74 Agente: Polo Flores, Carlos ES T1 k 54 Título: Regulación de la expresión de la quinolato fosforribosil transferasa. Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 1 ES T1 2 REIVINDICACIONES Una molécula aislada de ADN que contiene una secuencia seleccionada del grupo formado por: (a) SEQ ID NO:1, (b) secuencias de ADN que codifican una enzima con SEQ ID NO:2, (c) secuencias de ADN que hibridan con ADN aislado de los enunciados (a) o (b) anteriores y que codifican la enzima quinolato fosforribosil transferasa, y (d) secuencias de ADN que difieren de los enunciados (a), (b) o (c) anteriores debido a la degeneración del código genético. 2. Una construcción de ADN que contiene un vector de expresión, cuya construcción contiene, en la dirección de 5 a 3, un promotor que funciona en células vegetales y un fragmento de ADN de acuerdo con la reivindicación 1 situado cadena abajo de dicho promotor y asociados de forma funcional. 3. Una construcción de ADN que contiene un vector de expresión, cuya construcción contiene, en la dirección de 5 a 3, un promotorde plantasy un fragmento de ADN de acuerdo con la reivindicación 1 situado cadena abajo de dicho promotor y asociados de forma funcional, teniendo dicho fragmento de ADN una orientación antisentido. 4. Una construcción de ADN que contiene, en la dirección de 5 a 3, un promotor que funciona en células vegetales y un ADN que codifica la quinolato fosforribosil transferasa de plantas, dicho ADN asociado de forma funcional con dicho promotor. 5. Una construcción de ADN que contiene, en la dirección de 5 a 3, un promotor que funciona en células de plantas y un ADN que codifica la quinolato fosforribosil transferasa de plantas, teniendo dicho ADN una orientación antisentido y estando asociado de forma funcional con dicho promotor. 6. Una construcción de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 ó5,cuyopromotores activo de forma constitutiva en células vegetales. 7. Una construcción de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 ó 5, en la que dicho promotor es activo de forma selectiva en células de tejidos de las raíces de plantas. 8. Una construcción de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 ó 5, en la que dicho promotor es activo de forma selectiva en células de tejidos de la corteza de las raíces de plantas. 9. Una construcción de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 ó 5, en la que dicha construcción comprende además un plásmido. 10. Una construcción de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 ó 5 incluida en un vector de transformación de plantas. 11. Una construcción de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 ó 5 incluida en un vector de transformación de plantas donde el vector de transformación de plantas es un vector deagrobacterium tumefaciens Una célula vegetal que contiene una construcción de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 ó Una planta transgénica que contenga células vegetales de acuerdo con la reivindicación Un péptido con SEQ ID NO: Un péptido codificado por una secuencia de ADN seleccionada del grupo formado por: (a) SEQ ID NO:1, (b) secuencias de ADN que hibridan con ADN aislado del enunciado (a) anterior y que codifican la enzima quinolato fosforribosil transferasa, y (c) secuencias de ADN que difieren de los enunciados (a) o (b) anteriores debido a la degeneración del código genético. 16. Un procedimiento para generar una célula vegetal transgénica con una expresión reducida de quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa), dicho procedimiento consta de: obtener una célula vegetal de algún tipo que se sepa que expresa la quinolato fosforribosil transferasa, obtener una construcción de ADN exógeno, cuya construcción contiene, en dirección de 5 a 3, un promotor que funciona en una célula vegetal y ADN que incluye parte de una secuencia que codifica el ARNm de la quinolato fosforribosil transferasa, dicho ADN se asocia de forma funcional con dicho promotor, y transformación de dicha célula vegetal con dicha construcción de ADN para generar células transformadas, dicha célula vegetal tiene una expresión reducida de QPRTasa en comparación con la célula no transformada. 17. El procedimiento de la reivindicación 16, en el que dicho ADN, que contiene parte de una secuencia que codifica el ARNm de la quinolato fosforribosil transferasa, tiene una orientación antisentido. 18. El procedimiento de la reivindicación 16, en el que dicho ADN, que contiene parte de una secuencia que codifica el ARNm de la quinolato fosforribosil transferasa, está orientado en el sentido normal de la traducción del gen (sentido). 19. El procedimiento de la reivindicación 16, en el que dicha célula vegetal es Nicotiana tabacum. 20. El procedimiento de la reivindicación 16, que incluye además la regeneración de una planta apartirdedichacélula vegetal transformada. 21. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16, en el que dicho promotor es activo de forma constitutiva. 22. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16, en el que dicho promotor es activo de forma selectiva en células de tejidos de las raíces de plantas. 23. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16, en el que dicho promotor es activo de forma selectiva en células de tejidos de la corteza de las raíces de plantas. 24. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16, en el que dicho paso de transformación se lleva a cabo bombardeando dicha célula 2

3 3 ES T1 4 vegetal con micropartículas que llevan dicha construcción de ADN. 25. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16, en el que dicho paso de transformación se lleva a cabo infectando dicha célula vegetal con un Agrobacterium tumefaciens que contiene un plásmido Ti que lleva dicha construcción de ADN. 26. Un procedimiento para producir semillas de tabaco transgénico, que comprende la recolección de semillas de plantas de tabaco transgénicas generadas por medio del procedimiento de la reivindicación El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16, en el que dicha secuencia de ADN exógeno es complementaria a dicho ARN mensajero de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRT ARNm) expresado en dicha célula vegetal en una región seleccionada entre: la secuencia del extremo 5 no traducida de dicho QPRT ARNm, la secuencia del extremo 3 no traducida de dicho QPRT ARNm, y la región traducida de dicho QPRT ARNm. 28. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16, en el que dicha secuencia de ADN exógeno es complementaria con al menos 15 nucleótidos de dicho ARN mensajero de la quinolato fosforribosil transferasa expresada en dicha célula vegetal. 29. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16, en el que dicha secuencia de ADN exógeno es complementaria con al menos 200 nucleótidos de dicho ARN mensajero de la quinolato fosforribosil transferasa expresada en dicha célula vegetal. 30. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16, en el que dicha secuencia de ADN exógeno contiene una secuencia que codifica la quinolato fosforribosil transferasa seleccionada entre las secuencias de ADN de la reivindicación Una planta transgénica del género Nicotiana que tiene una expresión reducida de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa) respecto a una planta control no transformada, dicha planta transgénica comprende las células vegetales transgénicas que contienen: una construcción de ADN exógeno que contiene, en la dirección de 5 a 3, un promotor que funciona en dicha célula vegetal y un ADN que contiene un fragmento de una secuencia de ADN que codifica el ARNm de la quinolato fosforribosil transferasa de plantas, estando dicho ADN asociado de forma funcional con dicho promotor, dicha planta muestra una expresión reducida de la QPRTasa en comparación con una planta control no transformada. 32. El procedimiento de la reivindicación 31, en el que dicho fragmento de ADN comprende un fragmento de una secuencia de ADN que codifica el ARNm de la quinolato fosforribosil transferasa y que presenta una orientación antisentido. 33. El procedimiento de la reivindicación 31, en el que dicho fragmento de ADN comprende un fragmento de una secuencia de ADN que codifica el ARNm de la quinolato fosforribosil transferasa yestá orientado en el sentido normal de la tra ducción del gen (sentido). 34. Una planta transgénica del género Nicotiana que tiene una expresión reducida de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa) respecto a una planta control no transformada, en la que dicha planta transgénica es descendiente de una planta de acuerdo con la reivindicación Semillas de una planta transgénica del género Nicotiana que tienen una expresión reducida de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa) respecto a una planta control no transformada, en la que dicha planta transgénica es una planta de acuerdo con la reivindicación 31 o una descendiente de ella. 36. Una cosecha formada por diferentes plantas de acuerdo con la reivindicación 31 plantadas juntas en un campo de cultivo. 37. Un procedimiento para conseguir una expresión reducida del gen de la quinolato fosforribosil transferasa en una célula vegetal, dicho procedimiento consta de: crecimiento de una célula vegetal transformada para que contenga ADN exógeno,enelque una cadena transcrita de dicho ADN exógeno es complementaria al ARNm endógeno de la quinolato fosforribosil transferasa de dicha célula, en el que la transcripción de dicha cadena complementaria reduce la expresión de dicho gen de la quinolato fosforribosil transferasa. 38. Un procedimiento para producir plantas del tabaco con niveles disminuidos de nicotina en las hojas de dicha planta del tabaco, dicho procedimiento consta de: crecimiento de una planta del tabaco, o de sus plantas descendientes, en el que dicha planta contiene células que contienen una construcción de ADN que contiene una región de iniciación de la transcripción funcional en dicha planta y una secuencia de ADN exógeno asociado de forma funcional con dicha región de iniciación de la transcripción, en la que la cadena transcrita de dicha secuencia de ADN es complementaria al ARN mensajero de la quinolato fosforribosil transferasa en dichas células. 39. Un procedimiento para generar una célula vegetal transgénica con una expresión aumentada de la quinolato fosforribosil transferasa (QPR- Tasa), dicho procedimiento consta de: conseguir una célula vegetal de algún tipo que se sepa que expresa la quinolato fosforribosil transferasa, conseguir una construcción de ADN exógeno, esta construcción comprende, en la dirección de 5 a 3, un promotor que funciona en una célula vegetal y una secuencia de ADN que codifica la quinolato fosforribosil transferasa, dicha secuencia de ADN se asocia de forma funcional con dicho promotor, y transformación de dicha célula vegetal con dicha construcción de ADN para generar células transformadas, dicha célula vegetal tiene una expresión aumentada de la QPRTasa en comparación con una célula no transformada. 40. Una planta transgénica del género Nicotiana que tiene una expresión aumentada de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa) respecto a una planta control no transformada, dicha planta transgénica contiene células vegetales 3

4 5 ES T1 6 transgénicas que contienen: una construcción de ADN exógeno que contiene, en la dirección de 5 a 3, un promotor que funciona en dicha célula vegetal y una secuencia de ADN que codifica la quinolato fosforribosil transferasa de plantas, dicho ADN se asocia de forma funcional con dicho promotor, dicha planta muestra una expresión aumentada de la QPRTasa en comparación con una planta control no transformada. 41. Una planta transgénica del género Nicotiana que tiene una expresión aumentada de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa) respecto a una planta control no transformada, en la que dicha planta transgénica es descendiente de una planta de acuerdo con la reivindicación Un procedimiento para aumentar la expresión del gen de la quinolato fosforribosil transferasa en células vegetales, dicho procedimiento consta de: crecimiento de una célula vegetal transformada para que contenga ADN exógeno,enelque dicho ADN exógeno codifica la quinolato fosforribosil transferasa. 43. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 83, en el que dicha planta transformada se obtiene por medio de un procedimiento que comprende: integración en el genoma de una célula vegetal huésped de una construcción que contiene, en la dirección de la transcripción, un promotor funcional en dicha célula vegetal, una secuencia de ADN que codifica la quinolato fosforribosil transferasa funcional en dicha célula, dicha secuencia de ADN asociada de forma funcional con dicho promotor y una región de terminación de la transcripción funcional en dicha célula, en el que se obtiene una célula vegetal transformada. 44. Un procedimiento para producir una planta de tabaco que tiene niveles aumentados de nicotina en las hojas de la planta de tabaco, dicho procedimiento consta de: crecimiento de una planta de tabaco, o de sus plantas descendientes, en el que dicha planta contiene células que contienen una construcción de ADN que contiene una región de iniciación de la transcripción funcional en dicha planta y una secuencia de ADN exógeno unido de forma funcional a dicha región de iniciación de la transcripción, en el que dicha secuencia de ADN codifica la quinolato fosforribosil transferasa funcional en dichas células NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del , no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté o no incluída en la mencionada reserva. 4

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