SELECCIÓN DE AISLADOS DE RIZOBIOS PROVENIENTES DE NÓDULOS DE LA LEGUMINOSA FORRAJERA Canavalia ensiformis

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1 Cultivos Tropicles, 1, vol. 33, no. 3, p julio-septiemre ISSN impreso: ISSN digitl: Ministerio de Educción Superior. Cu Instituto Ncionl de Ciencis Agrícols SELECCIÓN DE AISLADOS DE RIZOBIOS PROVENIENTES DE NÓDULOS DE LA LEGUMINOSA FORRAJERA Cnvli ensiformis Selection of rhizoi isoltes from forge legume s nodules Cnvli ensiformis Ionel Hernández Forte, Guiney Pérez Hernández, Mrí C. Nápoles Grcí, Pedro R. Rosles Genqui, Roerto Bños Gordillo y Jun F. Rmirez Pedroso ABSTRACT. The ojective of this work ws to crry out selection of rhizoi isoltes from forge legume s nodules Cnvli ensiformis ccording to their chrcteristics nd potentilities to develop nitrogen-ûxing root nodules in Mcroptilium tropurpureum (sirtro), s model plnt, so tht they cn constitute promissory strins for iofertilizer elortion tht improve the estlishment of the cnvli in the cttle floors. Twelve rhizoi isoltes nd two commercil strins, BR 1 nd BR 3 were used. The possile txonomic distriution of the isoltes ws determinted throught the study of their morpho-culturl nd physiologicl chrcteristics. In vitro nodultion ssys were lso performed in Mcroptilium tropurpureum (sirtro). Five possile memers of the gener Rhizoium /Sinorhizoium nd seven possile memers of gener Brdyrhizoium were identified. Although the plnts inoculted with the commercil strin BR 3 presented igger numer of totl nodules nd totl effective nodules, the plnts inoculted with the isolte CP5 presented igger numer of nodules in the min root nd those inoculted with CP1 hd igger numer of effective nodules in this root. The crried out study demonstrtes tht isoltes of utochthonous rizoi s CP5 nd CP1 they could constitute promissory strins for the iofertilizer elortion tht improves the estlishment of the cultivtion of cnvli in the cttle floors. Key words: Cnvli ensiformis, forge legumes, selection Ionel Hernández Forte, Reserv Científic; Dr.C. Mrí C. Nápoles Grcí, Investigdor Titulr; Pedro R. Rosles Genqui, Especilist del deprtmento de Fisiologí y Bioquímic Vegetl, Instituto Ncionl de Ciencis Agrícols, gvet postl 1, Sn José de ls Ljs, Myeque, CP 3 7; M.Sc. Guiney Pérez Hernández, Aspirnte Investigdor del deprtmento de Investigciones; Roerto Bños Gordillo, Especilist del deprtmento Extensionismo, Instituto de Investigciones de Pstos y Forrjes, venid independenci, s/n, km 8 y medio, Boyeros. Ciudd de L Hn, Cu; Jun F. Rmirez Pedroso, Investigdor Auxilir del deprtmento Administrción, Estción Experimentl de Pstos y Forrjes de Cscjl ionel@inc.edu.cu; iip@enet.cu; tere@inc.edu.cu; prfel@inc.edu.cu RESUMEN. El ojetivo del presente trjo fue seleccionr isldos de rizoios provenientes de nódulos de l leguminos forrjer Cnvli ensiformis, teniendo en cuent sus crcterístics y potenciliddes pr nodulr Mcroptilium tropurpureum (sirtro), como plnt modelo, de mner que puedn constituir ceps promisoris pr l elorción de iofertilizntes que mejoren el estlecimiento de l cnvli en los suelos gnderos. Se utilizron 1 isldos de rizoios y dos ceps comerciles, BR 1 y BR 3. Se determinó l posile distriución txonómic de los isldos medinte el estudio de sus crcterístics morfo-culturles y fisiológics y se relizron ioensyos de nodulción in vitro en Mcroptilium tropurpureum (sirtro). Se identificron cinco isldos como posiles miemros del género Rhizoium / Sinorhizoium y siete isldos como posiles miemros del género Brdyrhizoium. A pesr de que ls plnts inoculds con l cep comercil BR 3 presentron un myor número de nódulos totles y de nódulos efectivos totles, ls plnts inoculds con el isldo CP5 presentron un myor número de nódulos en l ríz principl y ls inoculds con CP1 tuvieron un myor número de nódulos efectivos en est ríz. El estudio relizdo demuestr que isldos de rizoios utóctonos como CP5 y CP1 pudiern constituir ceps promisoris pr l elorción de iofertilizntes que mejoren el estlecimiento del cultivo de cnvli en los suelos gnderos. Plrs clve: Cnvli ensiformis, leguminoss forrjers, selección INTRODUCCIÓN Los pstos y forrjes hn estdo constituidos trdicionlmente por especies de grmínes y leguminoss. En l ctulidd, constituyen l principl y más rt fuente de limentos pr l gnderí (1, ). Sin emrgo, l myorí de los pstos nturles en Cu presentn un j clidd limentici, y que en ellos predominn ls grmínes en comprción con los cultivos de leguminoss. Esto se dee fundmentlmente l jo 7

2 Cultivos Tropicles, 1, vol. 33, no. 3, p julio-septiemre estlecimiento de ls leguminoss en los suelos gnderos, los cules generlmente presentn un j fertilidd y se encuentrn fectdos por diferentes fctores iológicos, físicos y químicos (3, ). Estos fctores fectn tnto l simiosis como l fijción del nitrógeno que tiene lugr en ests plnts (5). Cnvli ensiformis (cnvli) es un leguminos de ltos rendimientos en grnos y forrje. En ls condiciones edfoclimátics de Cu, constituye un de ls especies más utilizds como cultivo de coertur (6) y como ono verde (7). Su cpcidd de fijr nitrógeno tmosférico en simiosis con los rizoios fvorece el crecimiento de otros cultivos compñntes, incrementndo el vlor nutritivo y limenticio de los mismos (8, 9). L utilizción de este cultivo en l gnderí y en l gricultur permite el desrrollo de mos y l protección del medio miente. Por otr prte l leguminos Mcroptilium tropurpureum (sirtro) constituye un plnt modelo pr el estudio de l intercción simiótic rizoio-leguminos, lo cul se dee l promiscuidd de este cultivo pr ser infectd por un mplio rngo de rizoios del género Rhizoium, Brdyrhizoium y Sinorhizoium, provenientes de leguminoss tn diverss como Vign, Lupinus, Ornithopus, Cicer, Sesni, Leucen, Mimos, Ll y Acci (1). Es por ello que el uso del sirtro es un lterntiv fctile pr evlur l cpcidd de infección y l eficienci de l nodulción de isldos de rizoios jo condiciones controlds (11). Desde el punto de vist práctico, l selección de rizoios ntivos dptdos ls condiciones edfoclimátics de Cu, grntizrí el estlecimiento exitoso de l simiosis. Contr con estos isldos pr l confección de inoculntes permitirí un mejor estlecimiento de ls leguminoss y con ello un incremento en los rendimientos grícols y gnderos, sí como un reducción del empleo de fertilizntes nitrogendos. Bsdo en lo nterior nos propusimos en el presente trjo: seleccionr isldos de rizoios provenientes de nódulos de l leguminos forrjer Cnvli ensiformis, teniendo en cuent sus crcterístics y potenciliddes de nodulr Mcroptilium tropurpureum (sirtro), de mner que puedn constituir ceps promisoris pr inoculntes que mejoren el estlecimiento de l cnvli en los suelos gnderos. MATERIALES Y MÉTODOS MATERIAL MICROBIANO El estudio se relizó en el período 1-11 en el Instituto Ncionl de Ciencis Agrícols (INCA). Se utilizron 1 isldos de rizoios provenientes de nódulos de l leguminos forrjer Cnvli ensiformis, pertenecientes l colección de ceps de rizoios del Lortorio de Microiologí del deprtmento de Fisiologí y Bioquímic Vegetl de est institución. Además se utilizron dos ceps comerciles, l BR 1 y l BR 3 (Tl I). Tl I. Aisldos y ceps comerciles de rizoios provenientes de Cnvli ensiformis Mteril microino Aisldos Región de procedenci Municipio Provinci Pís Institución Cn Cscjl Vill Clr Cu EEPF Cn3 Cscjl Vill Clr Cu EEPF Cn Cscjl Vill Clr Cu EEPF Cn5 Cscjl Vill Clr Cu EEPF Cn6 Cscjl Vill Clr Cu EEPF CP L Plm Pinr del Río Cu IIPF-INCA CP3 L Plm Pinr del Río Cu IIPF-INCA CP5 L Plm Pinr del Río Cu IIPF-INCA CP8 L Plm Pinr del Río Cu IIPF-INCA CP1 L Plm Pinr del Río Cu IIPF-INCA CP1 L Plm Pinr del Río Cu IIPF-INCA CP13 L Plm Pinr del Río Cu IIPF-INCA Ceps comerciles BR Brsil EMBRAPA BR Brsil EMBRAPA Cn: isldos de cnvli CP: isldos de cnvli, específicmente de l región de L Plm, Pinr del Río EEPF: Estción Experimentl de Pstos y Forrjes IIPF: Instituto de Investigción de Pstos y Forrjes INCA: Instituto Ncionl de Ciencis Agrícols EMBRAPA: Empres Brsiler de Pesquiss Agropecuris ESTUDIO DE LAS CARACTERÍSTICAS MORFO-CULTURALES Y FISIOLÓGICAS Ls crcterístics micromorfológics estudids fueron form de l célul cterin, respuest l Grm, tmño de ls céluls y l presenci de espors. Ests crcterístics, sí como l purez de cd uno de los cultivos cterinos fueron determindos medinte l Tinción de Grm (1). Pr conocer ls crcterístics culturles, los isldos en estudio y ls ceps comerciles se cultivron por gotmiento en medio levdur-mnitol-gr (YEM, por sus sigls en inglés) (13) con rojo congo ph 6,8. Se incuron durnte 1 dís 8ºC y se determinó entonces l form, color, textur, producción de mucus y el diámetro de ls colonis (mm). En dependenci de los vlores de ls mediciones relizds pr el diámetro de ls colonis, fueron clsificds como colonis grndes, medins o pequeñs. Además se determinó l ts de crecimiento de cd isldo y cep, monitorendo l prición o no de ls colonis en ls plcs cd h durnte los 1 dís de incución. En este sentido, quellos isldos y ceps cuys colonis se hiciern visiles en medio YEM los dos-tres dís de incución, se considerron de rápido crecimiento, mientrs que quellos cuys colonis 8

3 Cultivos Tropicles, 1, vol. 33, no. 3, p julio-septiemre preciern sore el medio los cinco-siete dís, se considerron de lento crecimiento (1). Pr conocer si los diferentes isldos y ceps comerciles excretn ácido o se l medio de cultivo, se cultivron en medio YEM ph 6,8 con indicdor zul de romotimol (,5 % en NOH,16N). Trnscurrido el tiempo de crecimiento de cd isldo y cep, se oservó cmio de colorción en el medio de cultivo. En el cso de oservr un cmio de color verde (color originl del medio luego de formuldo) mrillo, se corresponde con l excreción de ácido l medio, mientrs que si el cmio de colorción que se oserv es de verde zul, se corresponde con l excreción de se l medio de cultivo por el microorgnismo (1). ENSAYOS DE NODULACIÓN IN VITRO Los ensyos de nodulción in vitro fueron relizdos utilizndo l leguminos Mcroptilium tropurpureum (sirtro), l cul constituye un plnt modelo en los estudios de nodulción deido su lt promiscuidd con vrios géneros de rizoios (1, 13). Ls semills de l leguminos fueron donds por l EEPF de Cscjl, Vill Clr. Pr l descrificción de ls semills se mntuvieron en etnol l 7 % durnte cinco minutos. Posteriormente se lvron con gu destild y se sometieron un trtmiento con ácido sulfúrico concentrdo durnte 1 min. Luego se sumergieron en hipoclorito de sodio l 5 % (v/v) durnte 15 minutos y fueron lvds vris veces con gu destild estéril. Seguidmente, ls semills fueron colocds en plcs con Agr-Agu (.75 %) (m/v) e incuds 8ºC en l oscuridd durnte h. Ls semills con ríces emergentes (de proximdmente 1- cm) se colocron en frscos de ml (5,5 cm de diámetro y 1, cm de ltur) que contenín 5 ml de medio Norris y Dte (1), rzón de un semill por frsco. Tres dís después, se inoculron ls ríces de ls plnts con 1 ml de inóculo de los diferentes isldos y ceps comerciles en medio YEM líquido ph 6.8, con un A=.1 (medid λ=6 nm), correspondiente un concentrción celulr de UFC.mL -1. Fue utilizdo un trtmiento control que no fue inoculdo. Ls plnts crecieron en condiciones controlds, con un fotoperíodo de 16 h luz/8 h oscuridd, un tempertur dí/noche de 6/ o C y humedd reltiv del 7 %. Cutro semns después, se determinó: número de nódulos en ríz principl, nodulción totl, efectividd de los nódulos y l ms sec de los nódulos en ríz principl (g). L efectividd de los nódulos fue determind medinte el método visul detectndo o no l presenci de un colorción rojiz en el interior de cd nódulo, crcterístico de l proteín leghemogloin (15). Pr ello se relizó l disección de cd uno de los nódulos con l utilizción de hojs de isturí de cero inoxidle. DISEÑO Y ANÁLISIS ESTADÍSTICO Los ensyos de nodulción in vitro se relizron dos veces. Se utilizó un diseño completmente letorizdo, utilizndo 1 réplics por trtmiento. Los dtos otenidos fueron sometidos l prue de normlidd (test de Brtlett) y homogeneidd de vrinz (test de Kormogorov- Smirnov) y se plicó nálisis de vrinz de clsificción simple, utilizndo el Test de comprción de medis de Tukey pr p<.5 pr discriminr diferencis entre ls medis (16). Los dtos otenidos fueron grficdos utilizndo el progrm SigmPlot 1. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ESTUDIO DE LAS CARACTERÍSTICAS MORFO-CULTURALES Y FISIOLÓGICAS Medinte l tinción de Grm se oservó que l morfologí de ls céluls y sus crcterístics tintoriles se correspondín con ls descrits pr el grupo de los rizoios. En todos los isldos se oservron cilos finos, Grm negtivos, de tmño pequeño y sin presenci de espors (17). En l Tl II se muestrn ls crcterístics morfo-culturles y fisiológics estudids de los 1 isldos y de ls ceps comerciles. Del totl de isldos, cinco presentron un rápido crecimiento (dos-tres dís) en medio YEM. Estos isldos se crcterizron por formr colonis grndes y medins, circulres, convexs, con ordes regulres, rillntes y de textur lis y con un leve color rosdo en el centro y más trnslúcids hci los ordes. Además se oservó l excreción de mucus y ácido l medio de cultivo que fue detectdo por el cmio de colorción del mismo (de verde mrillo). Ls crcterístics morfo-culturles presentes en estos isldos, sí como l excreción de sustncis ácids l medio de cultivo, hn sido descrits pr los géneros Rhizoium/Sinorhizoium, pertenecientes l fmili Rhizoicee (1). Medinte l crcterizción relizd en este trjo no fue posile diferencir entre estos dos géneros, deido l cercní filogenétic que existe entre los mismos. En este cso se requiere empler técnics de txonomí polifásic que incluye estudios moleculres que permiten el estudio de los genes cromosomles, los cules son comunes del genom ásico pr su propi uicción filogenétic; de los genes involucrdos en l fijción iológic de nitrógeno, pr estlecer relciones con otrs cteris fijdors de nitrógeno y que es un crcterístic ncestrl de mplio espectro filogenético y el estudio de los genes de l nodulción, los cules son mrcdores de l coevolución de los rizoios con su hospedero, sí como de su origen iogeográfico (1). El resto de los isldos en estudio (siete) resultron tener un lento crecimiento en medio YEM (cinco-siete dís). Ls colonis se crcterizron por ser pequeñs, circulres, con los ordes regulres y por presentr un color trnslúcido y en ocsiones lnco hci el centro. Además se identificron por su escs o ningun producción de mucus y l excreción de se l medio, lo cul se evidenció por el cmio de colorción de verde 9

4 Cultivos Tropicles, 1, vol. 33, no. 3, p julio-septiemre Tl II. Crcterístics morfo-culturles y fisiológics de los isldos de rizoios y ls ceps comerciles provenientes de Cnvli ensiformis Mteril microino Aisldos Morfologí de l coloni Tmño Color de l coloni (mm) Aspecto Ts de crecimiento en medio YEM (+) rápido crecimiento (dos tres dís), ( ) lento crecimiento (cinco-siete dís) Producción de ácido-se Posile distriución txonómic Cn - semitrnslúcids mucoss + ácido Rhizoium/Sinorhizoium Cn3 - semitrnslúcids mucoss + ácido Rhizoium/Sinorhizoium Cn - semitrnslúcids mucoss + ácido Rhizoium/Sinorhizoium Cn5 - semitrnslúcids mucoss + ácido Rhizoium/Sinorhizoium Cn6 - semitrnslúcids mucoss + ácido Rhizoium/Sinorhizoium CP < 1 lncs secs - se Brdyrhizoium CP3 < 1 lncs secs - se Brdyrhizoium CP5 < 1 lncs secs - se Brdyrhizoium CP8 < 1 lncs secs - se Brdyrhizoium CP1 < 1 lncs secs - se Brdyrhizoium CP1 < 1 lncs secs - se Brdyrhizoium CP13 < 1 lncs secs - se Brdyrhizoium Ceps BR 1 < 1 lncs secs - se Brdyrhizoium BR 3 - semitrnslúcids mucoss + ácido Rhizoium zul. Tods ests crcterístics morfo-fisiológics coinciden con lo descrito pr el género Brdyrhizoium (1), por lo cul pudier considerrse estos isldos como posiles miemros de este género. Fue posile comprr los isldos en estudio con dos ceps comerciles empleds en l confección de inoculntes pr el cultivo de l cnvli, l cep BR 1 perteneciente l género Brdyrhizoium y l cep BR 3 perteneciente l género Rhizoium. Todos los isldos de lento crecimiento presentron similitud en cunto ls crcterístics morfo-culturles y fisiológics estudids con l cep comercil BR 1, mientrs que los isldos Cn, Cn3, Cn, Cn5 y Cn6, de rápido crecimiento, resultron similres l cep BR 3. Esto confirm l posile uicción signd los isldos en este estudio. Teniendo en cuent los resultdos expuestos, result evidente l presenci de diversos géneros de rizoios como simiontes de un mism leguminos (cnvli), y que se otuvieron posiles miemros del género Brdyrhizoium y de l fmili Rhizoicee (Rhizoium/ Sinorhizoium), lo que evidenci l inespecificidd de este cultivo. En este sentido, se clsific Cnvli ensiformis como promiscu y efectiv con un mplio rngo de especies de rizoios (18). Est crcterístic h sido descrit tmién pr Phseolus unguicult (frijol cupí), en l cul se h encontrdo l presenci de especies de Brdyrhizoium y Rhizoium, como simiontes de este cultivo (19). ENSAYO DE NODULACIÓN IN VITRO Los isldos de rizoios de rápido crecimiento, posiles miemros del género Rhizoium, Cn, Cn3, Cn, Cn5 y Cn6 (dtos no mostrdos) no reflejron l cpcidd de producir nodulción en ls plnts de sirtro, utilizd como modelo pr el estudio de l intercción simiótic rizoio-leguminos. Dentro de ls posiles cuss que pudiern explicr este fenómeno están ls de tipo genético o de tipo ecológico. A diferenci del género Brdyrhizoium donde los genes de l nodulción y los que grntizn l fijción del nitrógeno son genes cromosómicos, en el género Rhizoium estos genes son extrcromosómicos pues se loclizn en determindos plásmidos (). Estos pquetes genómicos pueden trnsferirse medinte mecnismos de conjugción, provocndo l pérdid de l cpcidd de nodulción de l cteri (1). Desde el punto de vist ecológico, en l litertur se h hecho referenci determindos fctores ióticos y ióticos que ejercen diferentes efectos sore l cpcidd de nodulción de ls polciones de rizoios. Dentro de los fctores ióticos se encuentrn l producción de ntiióticos y cteriocins, número y tipos de microorgnismos residentes y l predción selectiv por protozoos, mientrs que entre los fctores ióticos se numern ls limitciones de nutrientes, contenido de mteri orgánic, disponiilidd de gu, slinidd, tempertur y l cidez del suelo (). Los suelos de l 3

5 Cultivos Tropicles, 1, vol. 33, no. 3, p julio-septiemre región de Cscjl son conocidos por su cidez (3) lo que, unido otros fctores, tnto ióticos como ióticos pudiern tmién her provocdo l pérdid de l cpcidd de nodulción de estos isldos cterinos. En dición se h informdo cerc de l selección que ejerce l cidez de los suelos sore ls polciones de rizoios, lo que fvorece l tipo de especie más decud pr l simiosis en dependenci de su tolernci este fctor (). En l Figur 1 se muestr el número de nódulos totles (A) y número de nódulos efectivos totles (B), otenidos l inoculr los diferentes isldos y ceps comerciles en plnts de sirtro. Se oservó que el myor número de nódulos totles y efectivos totles se corresponde con quells plnts inoculds con l cep comercil BR 3 perteneciente l género Rhizoium, diferenciándose significtivmente del resto de los trtmientos en ms vriles. Aunque los isldos CP3, CP8, CP1 y CP13, posiles miemros del género Brdyrhizoium, formron un myor cntidd de nódulos en ls plnts de sirtro, en relción con l cep comercil BR 1 tmién de este género cterino, no se Número nódulos totles.plnt -1 Número nódulos efectivos totles.plnt ES*** =.57 Control ES*** =.556 f d CP e CP3 c CP5 c Figur 1. Número de nódulos totles (A) y número de nódulos efectivos totles (B), en plnts inoculds con isldos de rizoios procedentes de cnvli y ceps comerciles pr este cultivo c CP8 CP1 c CP1 c e CP13 c Aisldos de rizoios y ceps comerciles BR3 BR1 B A de oservron diferencis significtivs entre estos trtmientos cundo fue nlizdo el número de nódulos efectivos totles por plnt. En l Figur se muestr el número de nódulos (A) y el número de nódulos efectivos en l ríz principl (B). Se oservó que ls plnts que fueron inoculds con los isldos CP5 y CP1 fueron ls que presentron un myor número de nódulos en l ríz principl, en comprción con el resto de los isldos y ls ceps comerciles BR 3 y BR 1. L presenci de nódulos en l ríz principl es uno de los criterios más importntes que se tienen en cuent en los estudios de selección de ceps de rizoios, y que se h demostrdo que quells plnts con undntes nódulos en l ríz principl presentn un grn desrrollo rdicl y folir, todo lo cul contriuye decisivmente l producción de ltos rendimientos en el cultivo. Deido que es por l ríz principl por donde fluyen l myor cntidd de nutrientes resultntes del metolismo de l plnt, los que son utilizdos por los rizoios presentes en el interior de los nódulos; quellos nódulos que se encuentrn uicdos en est prte del sistem rdicl son generlmente los que presentn un myor ctividd de fijción de nitrógeno (5). Número nódulos Número nódulos efectivos en ríz principl.plnt -1 en ríz principl.plnt ES*** =.396 e ES*** =.6 c Figur. Número de nódulos (A) y número de nódulos efectivos en ríz principl (B), en plnts inoculds con isldos de rizoios procedentes de cnvli y ceps comerciles pr este cultivo c Control CP CP3 CP5 CP8 CP1 CP1 CP13 d BR3 Aisldos de rizoios y ceps comerciles BR1 B c A 31

6 Cultivos Tropicles, 1, vol. 33, no. 3, p julio-septiemre A pesr de que no se oservron diferencis significtivs en el número de nódulos de ls plnts inoculds con CP5 en relción con ls inoculds con CP1, l eficienci del proceso de nodulción en ríz principl, resultnte de l diferenci en vlor soluto de nódulos formdos y los efectivos, fue superior un 9 % pr el isldo CP1 mientrs que pr CP5 fue entre un 5 y un 55 %, resultdos superiores los oservdos pr ms ceps comerciles en est vrile. Es necesrio destcr que unque l cep comercil BR 3 formó un myor cntidd de nódulos totles en ls plnts de sirtro en comprción con los isldos CP5, CP8 y CP1, l ms sec de los nódulos de ls plnts trtds con estos isldos fue myor que l ms sec de los nódulos de ls trtds con l cep comercil (Figur 3). Esto es lógico si se tiene en cuent que entre un 9 y un 95 % de los nódulos formdos por l cep BR 3 se encontrron en ls ríces secundris mientrs que pr el isldo CP5 solo se encontrron en ests ríces de un 5 un 5 % de los nódulos y pr el cso de CP1 csi el 1 % de los nódulos totles estn loclizdos en l ríz principl. Ms sec de nódulos en ríz principl.plnt Control ES*** =.69 d CP CP3 CP5 CP8 CP1 CP1 CP13 Figur 3. Ms sec (g) de nódulos en l ríz principl de plnts de sirtro inoculds con isldos procedentes de l leguminos cnvli y ceps comerciles de este cultivo A pesr de que el isldo CP8 produjo un menor número de nódulos totles y efectivos en ríz principl, en comprción con los producidos por los isldos CP5 y CP1 no se oservron diferencis significtivs en l ms sec de estos nódulos entre estos trtmientos. Esto indic que los nódulos que produce CP8 en l ríz principl de ls plnts son de myor tmño que los que se producen por CP5 y CP1. El nálisis de ls vriles estudids en este ensyo nos permitió distinguir lguns de ls potenciliddes de estos isldos de rizoios en relción con ls ceps comerciles pues constituyen microorgnismos ntivos BR3 Aisldos de rizoios y ceps comerciles c BR1 de l región de L Plm, Pinr del Río, dptdos ls condiciones presentes en esos suelos, lo cul no se cumple pr ls ceps comerciles. Es por ello que deemos enfocr nuestr tención en l utilizción de estos microorgnismos como posiles inoculntes, provechndo ls dptciones que hn desrrolldo ests cteris los fctores limitntes presentes en estos suelos, lo cul les permite ser más competitivos en l intercción simiótic con l plnt huésped. CONCLUSIONES Los isldos de rizoios CP5 y CP1 constituyen ceps promisoris ntivs de los suelos de L Plm, Pinr del Río, pr l elorción de un iofertiliznte que permit el mejor estlecimiento de Cnvli en ests regiones. AGRADECIMIENTOS Agrdecemos l técnico de lortorio Alici Hernández y l uxilir Mglis River por her contriuido decisivmente l otención de los resultdos durnte este estudio. REFERENCIAS 1. Lmel, L.; López, O.; Sánchez, T. /et l./. Efecto del sistem silvopstoril en el comportmiento productivo de vcs Holstein. Pstos y Forrjes, 9, vol. 3, p Simón, L.; López, O. y Álvrez, D. Evlución de vcs de dole propósito de genotipos Holstein x Ceú en sistems de pstoreo rorizdo. I. Primíprs. Pstos y Forrjes, 1, vol. 33, no.1. p Sánchez, S.; Crespo, G.; Hernández, M. /et l./. Fctores ióticos y ióticos que influyen en l descomposición de l hojrsc en pstizles. Pstos y Forrjes, 8, vol. 31, no., p. 1.. Crespo, G. Recuperción de l fertilidd del suelo en áres gnders degrdds. Revist Cun de Cienci Agrícol, 9, vol. 3, no., p Kntr, F.; Shivkumer, B. G.; Arrese-Igor, C. /et l./. Climte chnge nd mngement of cool seson grin legume crops. Efficient iologicl nitrogen fixtion under wrming climtes. 1. p Puerts, F.; Arévlo, E.; Zúñig, L. /et l./. Estlecimiento de cultivos de coertur y extrcción totl de nutrientes en un suelo de trópico húmedo en l mzoni Perun. Ecologí Aplicd, 8, vol. 7, p Crespo, G.; Ruiz, T. E. y Álvrez, J. Efecto del ono verde de Tithoni (T. diversifoli) en el estlecimiento y producción de forrje de P. purpureum vc. Cu CT-169 y en lguns propieddes del suelo. Revist Cun de Cienci Agrícol, 11, vol. 5, no. 1, p Mrtín, G. M.; River, R.; Aris, L. /et l./. Efecto de l Cnvli ensiformis y micorrizs rusculres en el cultivo del míz. Revist Cun de Cienci Agrícol, 9, vol. 3, no., p

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