APTÁMEROS OLIGONUCLEOTÍDICOS: NUEVAS HERRAMIENTAS EN LA TERAPIA DIRIGIDA AL CÁNCER
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- Emilio Córdoba Acuña
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1 Adaptado y traducido de: SUN, Hongguang, et al. Oligonucleotide Aptamers: New Tools for Targeted Cancer Therapy. Molecular Therapy Nucleic Acids, 2014, vol. 3, no 8, p. e182. APTÁMEROS OLIGONUCLEOTÍDICOS: NUEVAS HERRAMIENTAS EN LA TERAPIA DIRIGIDA AL CÁNCER Sistemas de Liberación de Fármacos Julia M. Coronas Serna Miguel Seguí Fernández Julia Pérez López
2 QUÉ SON LOS APTÁMEROS? Introducción Cadenas oligonucleotídicas de RNA o ssdna Son ligandos de alta ESPECIFICIDAD y AFINIDAD por estructuras tridimensionales presentes en las células diana Conocidos como: Anticuerpos químicos
3 Introducción QUÉ SON LOS APTÁMEROS?
4 POR QUÉ DESARROLLAR APTÁMEROS? Introducción Permite identificar biomarcadores Diagnóstico in vitro Técnicas de visualización in vivo Terapia dirigida o vectorizada Terapia dirigida o vectorizada Última tendencia >4000
5 VENTAJAS QUE OFRECEN Frente a los anticuerpos clásicos Introducción Bajo Peso Molecular. Paso de membranas. No inmunogénicos (en teoría). Aplicaciones clínicas Estabilidad térmica. Capaces de renaturalizarse. Síntesis y modificaciones sencillas y a gran escala. Baja variabilidad estructural en la síntesis. Síntesis industrial Para dianas muy diferentes. (de iones a tejidos). Menor coste de producción.
6 RNA ssdna Introducción Flexibilidad (2 - OH libre y otras bases) Estabilidad in Modificaciones químicas: vivo (hasta 8h) 2 -OH 2 F, 2 NH 2, 2 OMe Enlace fosfodiéster fosforotionato Degradación in vivo (RNAsa) Menos posibilidades de estructuras 3D
7 CÓMO SE OBTIENEN? MÉTODO SELEX Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment Material y Métodos Evolución Sistemática de Ligandos mediante Enriquecimiento Exponencial (SELEX) 1.- Colección de ssdna aleatoria F B Colección de ssdna aleatoria +Promotor RNApol
8 CÓMO SE OBTIENEN? MÉTODO SELEX Material y Métodos 2.- Calentar y enfriar la colección 3.- Mezclar con el elemento diana Formación de estructuras 3D No unión Unión 4.- Eluir los no afines 5.- Amplificar
9 CÓMO SE OBTIENEN? MÉTODO SELEX Material y Métodos 7.- Eluir los no específicos 6.- Mezclar con elementos control Unión No unión 8.- Amplificar 1.- Colección de oligont s más específica
10 CÓMO SE OBTIENEN? MÉTODO SELEX Material y Métodos Elementos diana Proteínas purificadas: conformación fisiológica. Células vivas completas: moléculas de superficie. Transfección génica SELEX híbrido 20 ciclos iniciales con células que sobreexpresan el marcador 5 ciclos adicionales con el marcador purificado SELEX de internalización. FACS-SELEX: Eliminar células muertas
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12 APLICACIONES Y EJEMPLOS Terapia dirigida por aptámeros Conjugados fármaco-aptámero Nanopartículas Terapia génica Inmunoterapia Terapia biológica
13 CONJUGADOS FÁRMACO-APTÁMERO Método simple y efectivo Eficacia mayor frente a fármaco solo Varios problemas de los conjugados: a) Inestabilidad (en uniones no covalentes) b) Baja vida media in vivo (bajo peso molecular) c) Baja cantidad de fármaco conjugada (estructura de los aptámeros es simple)
14 CONJUGADOS FÁRMACO-APTÁMERO Intercalación no covalente Aptámero Intercalación covalente a) Solución: Unión covalente con un linker sensible a condiciones controlables (ejemplo: ph bajo)
15 CONJUGADOS FÁRMACO-APTÁMERO b) Aumento de peso molecular: Conjugación con polímeros: Ejemplo: polietilenglicol (PEG), produjo: Aumento en peso molecular (y vida media) Aumento de estabilidad Menor acumulación en tejidos no diana
16 CONJUGADOS FÁRMACO-APTÁMERO c) Aumento de cantidad de fármaco conjugada Varias estrategias: Nanotrenes (aptntrs): - Aptámero= Locomotora - Sondas DNA= Vagones Aptámeros con fármacos fotosensibles Aptámeros bi- o tri-específicos
17 NANOPARTÍCULAS Biocompatibilidad Gran superficie (unión del aptámero y del fármaco) Otras características según tipo
18 NANOPARTÍCULAS Tipos a) Copolímeros y liposomas b) Nanomateriales metálicos c) VLPs (virus-like particles)
19 COPOLÍMEROS Y LIPOSOMAS Mayor degradación y biocompatibilidad Ejemplo: Bioconjugado: PLGA-lecitina-PEG y aptámero con paclitaxel Gran eficiencia en encapsulación Mayor vida media
20 NANOMATERIALES METÁLICOS Propiedades ópticas Propiedades electromagnéticas Estabilidad Biocompatibilidad
21 NANOMATERALES METÁLICOS Nanoesfera de oro hueca Aptámero CD30 sintético PEG Doxorubicina ph Célula tumoral
22 VLPS Ejemplo: Estrategia oxidativa 60 copias de aptámero sgc8 en cada cápsida de bacteriófago MS2 Unión fuerte a células diana Internalización y degradación por lisosomas
23 TERAPIA GÉNICA small interfering RNA (sirna) microrna (mirna) Falta de especificidad in vivo INCONVENIENTES: Aptámero si/mirna Poca carga útil Vida media corta Biodistribución indeseable Selectividad eficaz células diana Quimera Conjugación covalente Conjugación no covalente Terapia de cáncer Enfermedades infecciosas, pej VIH NANOTECNOLOGÍA
24 TERAPIA GÉNICA. EJEMPLO Sun et al. Nanonúcleo con polímero transportador PEI Alta eficacia de transfección celular Internalización: endosomas citoplasma Linfoma Expresión de CD30 Downregulation del gen ALK Inhibición proliferación celular
25 INMUNOTERAPIA Bajo potencial de efectos adversos Alta especificidad Anticuerpos artificiales Reconocimiento internalización en macrófagos (Bruno et al.)
26 INMUNOTERAPIA. EJEMPLOS Stecker et al. Línea de células de cáncer de pulmón (MCF7) Formación de un complejo de ataque a membrana (MAC) MUC1 C1q MAC MCF7 MCF7 Xiong et al. Muerte celular Células de leucemia (K562) + Ligando PEG Protección conformación 3D (aptámero) + Cola: lípido diacetilado Facilita y mejora incorporación a membrana
27 TERAPIA BIOLÓGICA Vías de transducción Agonistas o antagonistas Aptámeros monovalentes (diana: biomarcadores) Aptámeros multivalentes Activar vías de señalización downstream Activar vías de señalización downstream (multimerización del receptor)
28 TERAPIA BIOLÓGICA. EJEMPLOS Mahlknecht et al. Modelo de cáncer de estómago HER2 Sun et al. Linfoma Expresión CD30 Degradación lisosomal
29 CONCLUSIONES Los aptámeros suponen un gran avance con respecto a los anticuerpos en el campo de la terapia dirigida. Por otro lado, aún resulta necesaria la optimización de algunos aspectos técnicos: SELEX mejorado, para mayor rapidez de selección de las estructuras. Búsqueda de elementos diana relevantes. Mejora de la estabilidad in vivo. Liberación efectiva del principio activo. En definitiva, los aptámeros prometen ser una atractiva herramienta en la terapia dirigida al cáncer.
30 Dudas? Comentarios? MUCHAS GRACIAS!!
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