INTRODUCCIÓN 1.- OBJETIVO

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1 Código: : I-CCBA-LP-01 Revisión: 04 Página: 1 de OBJETIVO Que el personal del laboratorio conozca la información necesaria sobre el registro, manejo y conservación de muestras en el laboratorio de Parasitología. 2.- ALCANCE A todo el personal del laboratorio de Parasitología. 3.-DESCRIPCION DE LA OPERACIÓN INTRODUCCIÓN Para que el Médico Veterinario Zootecnista confirme el diagnóstico de enfermedades parasitarias es necesario apoyarse en pruebas de laboratorio confiables. Sin embargo, este esfuerzo puede verse mermado por una inadecuada selección, preparación, manejo y envío de muestras al laboratorio. Esta situación puede ser evitada mediante el seguimiento cuidadoso de los principios generales descritos a detalle en libro de Técnicas Diagnósticas en Parasitología Veterinaria (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005). Igual de importante es el manejo de la muestra dentro del laboratorio, así como su adecuada conservación. Por tal motivo el seguimiento de una correcta metodología de trabajo por parte del personal del laboratorio de Parasitología asegurará que los resultados obtenidos sean confiables y describan la patología que ocurre en las enfermedades parasitarias. El seguimiento de esta metodología permitirá una correcta conservación de las muestras, aplicar los correctos procedimientos de diagnóstico y promover la seguridad del personal técnico. Esto permitirá tener un diagnóstico rápido y confiable, evitando contratiempos y gastos económicos innecesarios del cliente.

2 Código: : I-CCBA-LP-01 Revisión: 04 Página: 2 de REGISTRO DE MUESTRAS Recepción de la muestra La muestra deberá estar acompañada de la historia clínica (F-CCBA-UDD-02, F-CCBA-UDD- 09) debidamente llenada. Verificar que los datos concuerden con las características de la muestra, como son: a).-número: Se beben contar el número de muestras que se recepciona y corroborar que concuerde con los datos emitidos en el formato de la historia clínica. b).-tipos de muestras: Pueden ser heces, sangre, raspados de piel y distintas fases de desarrollo de parásitos. Las características que deben tener las muestras al momento de envío al laboratorio se describen a detalle en el libro de Técnicas Diagnósticas en Parasitología Veterinaria (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005). c).- Tiempo de obtención y modo de conservación: Corroborar que la historia clínica diga el tiempo de obtención y la manera en la que fue conservada la muestra. Muestra sangre Heces Raspados de piel Especímenes Tiempo máximo permitido 24 hrs. 24 hrs 48 hrs Indefinido siempre que estén en alcohol.

3 Código: : I-CCBA-LP-01 Revisión: 04 Página: 3 de 11 d).- Análisis solicitado: El cliente deberá indicar la técnica específica que desee que se realice. Asimismo, el técnico del laboratorio verificará que la muestra sea la requerida para el diagnóstico. e).- Asignación de número de caso. El personal administrativo deberá asignar un número de caso por cada muestra o grupo de muestra recibida. Al término de la verificación de los datos la muestra será registrada en la bitácora de casos (F- CCBA-LP-01). 2.- MANEJO DE LAS MUESTRAS. Para el manejo de las muestras es necesario utilizar el equipo de protección personal adecuado, como son guantes, cubre boca, lentes, bata de manga larga y zapatos cerrados. Por otra parte, dependiendo del tipo de análisis la muestra será procesada en el área indicada con letreros en el laboratorio Análisis coproparasitoscópicos. Caracteristicas de las muestras: Pesar 2g como mínimo para su análisis (si por alguna razón la muestra no cumple con este criterio se correra la muestra previa autorizacion del responsable en comun acuerdo con el cliente y se harán las correcciones necesarios en cuanto al análisis). Evitar muestras que presenten deshidratación y algún conservador químico. En caso de que las muestras se encuentren refrigeradas dejar a temperatura ambiente (10 minutos) y posteriormente analizarlas.

4 Código: : I-CCBA-LP-01 Revisión: 04 Página: 4 de 11 Fig.1.- Materiales utilizados en los estudios coproparasitoscopicos Las muestras de heces deben estar ordenadas e identificadas de acuerdo a la identificación de origen, en caso de que no traigan identificación, el técnico asignará el número de identificación a cada muestra (1,2,3 ).y serán registradas en la bitácora de casos (F-CCBA-LP-01). Antes de empezar a procesar la muestra, la meseta de trabajo debe cubrirse con hojas reciclables, para evitar contaminación y facilitar la limpieza posterior. Medir la densidad de la solución glucosas antes de usarla. En caso de que esta no cuente con la densidad requerida hay que ajustarla. La solución glucosada tiene un tiempo de vida aproximadamente de 1 mes ya que posterior a este tiempo, se ha observado que los hongos proliferan en la solución. Los equipos necesarios: Microscopio binocular, centrifuga, balanza, pipetas, cámara de Mcmaster y densímetro Hemoparásitos. Las muestras de sangre deben ser colectadas y almacenadas en tubos estériles con anticuagulante (EDTA, heparina, etc.), con un volumen aproximado de 3ml dependiendo de la especie animal.

5 Código: : I-CCBA-LP-01 Revisión: 04 Página: 5 de 11 Para hacer frotis sanguíneos, estos se deben realizar de forma duplicada para posteriormente ser fijada y teñida de acuerdo a la tecnica de Tinción de Giemsa modificada (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005). El frotis tiene que ser delgado para facilitar la observación y al momento de teñir sumergir la placa en un recipiente de tal forma que lo cubra el colorante o en su defecto colocarlo bocabajo y teñir por capilaridad, esto con el objeto de evitar el precipitado del colorante. Fig. 2.- Muestra para Hemoparásitos El colorante de Giemsa precipita muy rápido por lo que se debe evitar mover el frasco de forma vigorosa. Tener el cuidado de limpiar el recipiente que se usa para preparar el colorante. Equipos necesarios: microscopio, centrifuga Ectoparásitos. Los ectoaparásitos deberán ser colectados en dos frascos: a) con glicerina para el caso de ácaros y b) sin glicerina para el caso del diagnóstico de hongos. Estos frascos son proporcionados por el laboratorio.

6 Código: : I-CCBA-LP-01 Revisión: 04 Página: 6 de 11 Procesar la muestra de acuerdo al libro Técnicas de diagnóstico en parasitología veterinaria (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005). En el caso de identificación de hongos utilizar el colorante azul de algodón para una mejor observación. Equipos necesarios: microscopio. Fig:. 3.-Identificación de ácaros y hongos. 2.4.Identificación de parásitos. Para la identificación de parásitos en la fase de adulto, se pueden observar al microscopio para identificarlos de acuedo a su morfología y tamaño usando llaves taxonómicas (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005).. Fig 4: Triatoma dimidiata

7 Código: : I-CCBA-LP-01 Revisión: 04 Página: 7 de 11 Al término de la identificación, el especimen debe ser colocado en un frasco con alcohol al 70% y etiquetado perfectamente, para ingresarlo a la Parasitoteca. Equipo necesario: microscopio y estereoscopio Diagnóstico de resistencia de garrapatas a los ixodicidas. Se requiere de 20 a 30 garrapatas adultas hembras repletas de la especie Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Las garrapatas deben estar en buenas condiciones (sin pérdida de las partes bucales) y deberán ser colectadas con un máximo de 48 horas. Fig 5. Rhipicephalus microplusus Equipo necesario: Estufa cultivo, camara para ovipositar, pipetas, microscopio.

8 Código: : I-CCBA-LP-01 Revisión: 04 Página: 8 de CONSERVACIÓN DE MUESTRAS Una vez terminado el análisis de las muestras, en caso necesario, el remanente de la muestra será conservadas en un período de 48 hrs, para posteriormente ser desechadas de acuedo a la guía de RPs del CCBA. Las muestras serán conservadas en refrigeración 5-10 C o en condiciones de medio ambiente de acuerdo a la naturaleza de la muestra. 4.- MANEJO DE RESIDUOS. El manejo de residuos se encuentra descrito en el Manual para el manejo de Residuos Peligrosos (RP) del Campus de Ciencias Biológicas y Agropecuarias (CCBA) ANEXO 1 LAVADO DE MATERIAL El material de uso para el diagnóstico se lavará con una solución jabonosa con hipoclorito de sodio al 4% y posteriormente se enjuagará con agua de la llave. Dejar secar y se colocar en el lugar destinado. En el caso de que el material este contaminado con sangre, este deberá colocarse en un recipiente con hipoclorito de sodio al 4% durante 2 hrs y preceder al lavar, dejar secar o desechar según sea el caso (puntas, tubos plástico).

9 Código: : I-CCBA-LP-01 Revisión: 04 Página: 9 de 11 Nota. Si las muestras proceden de cultivos de hongos, raspados de piel o parásitos, se esterilizarán las cajas de petri durante una hora a 121 C y 15 libras, posteriormente se procederá a lavar las cajas como es señalado anteriormente. 4.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA Código Nombre del documento Lugar de almacenamiento N/A M-CCBA-CC-01 Libro de Técnicas Diagnósticas en Parasitología Veterinaria (2005) Manual para el manejo de Residuos Peligrosos (RP) del Campus de Ciencias Biológicas y Agropecuarias (CCBA). Laboratorio de parasitología sitio WEB CCBA 5.- CONTROL DE REGISTROS Identificación Nombre del registro Lugar de almacenamiento Responsable de su protección Tiempo de retención Disposición de los registros F-CCBA-LP- 01 Bitácora de casos Archivero del Laboratorio Técnico Académico 1 año Archivo muerto 6.- GLOSARIO SIGLAS

10 Código: : I-CCBA-LP-01 Revisión: 04 Página: 10 de 11 UDD.- Unidad de diagnóstico. F.- Formato DEFINICIONES Muestra biológica: Parte anatómica o fracción de órganos o tejidos, excreciones o secreciones obtenidas de un animal vivo o muerto para su análisis. Bitácora: Conjunto de registros para el control de actividades en el área de trabajo. Historia clínica: Formato en el cual se asigna un número para la identificación de la muestra(s) del usuario y que representa las pruebas solicitadas por el mismo. 7.- CONTROL DE REVISIONES Nivel de revisión Sección y/o página Descripción de la modificación y mejora Fecha de modificación 01 Página 1 Página 2 Página 3 Página 4 Página 8 Página 9 1.-Cambio el nombre de la Guía. 2.-Se anexó una portada. 3.- Se realizó una introducción. 4.-La descripción del registro de muestras se encuentra más detallada. 8.-Se agregó el apartado de manejo de desechos. 9.- Se estableció un procedimiento de lavado de material. 15 de junio Todo el documento Cambio de redacción, se agregaron imágenes y párrafos. Junio 2013

11 Código: : I-CCBA-LP-01 Revisión: 04 Página: 11 de Página 4 Página 5 La recepción de la muestra se encuentra más detallada. Cambio la descripción de la entrega de resultados Febrero Página 4 Todo el documento Cambio la descripción de entrega de resultados. Se anexo la lista de equipos a utilizar por prueba y tabla con tiempos de conservación de muestra. Se cambió redacción. 07 de junio 2016 Nota: Ésta sección será utilizada a partir de la primera modificación a este documento. La revisión 00, se mantendrá en blanco. Elaboró Revisó Aprobó QFB Iris Trinidad Martinez Técnico académico Dr. Roger Iván Rodríguez Vivas Responsable de laboratorio Dr. Roger Iván Rodríguez Vivas Responsable de laboratorio Las firmas avalan la responsabilidad de las personas que: elaboran el documento, revisan su adecuación y aprueban para su implementación dentro del Sistema de Gestión de la Universidad Autónoma de Yucatán.