Dr Javier Gómez Román Servicio de Anatomía Patológica Hospital Universitario Marqués de Valdecilla Universidad de Cantabria.
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- María Cristina Ortiz de Zárate Ferreyra
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1 Dr Javier Gómez Román Servicio de Anatomía Patológica Hospital Universitario Marqués de Valdecilla Universidad de Cantabria. IDIVAL Santander
2 HASTA EL DIAGNÓSTICO Y MÁS ALLÁ... Buzz pathologist-year
3 EGFR y Biopsia líquida. Monitorización? A qué nos enfrentamos con la NGS? A la administración? A nosotros mismos? A nuestros límites?
4 EGFR y Biopsia líquida. Monitorización? A qué nos enfrentamos con la NGS? A la administración? A nosotros mismos? A nuestros límites?
5 A bad test can be just as dangerous as a bad drug. Daniel Hayes ASCO President Validación Preanalítica / Analítica: Es reproducible el ensayo? Se han optimizado la preparación y manipulación de reactivos y muestras? Validación Clínica Separa grupos de pacientes el ensayo? Tiene valor pronóstico? Utilidad Clínica El resultado del ensayo permite realmente una intervención clínica que cambie la supervivencia?
6 Marchetti et al. J Thorac Oncol 2015
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9 Los primeros 100 pacientes del estudio TRACER (tracking nonsmall cell lung cancer evolution through therapy) No EGFR, ALK
10 Al menos dos mutaciones fueron detectadas en cfdna en 46/96 pacientes con carcinomas en estadío precoz (48%) Una única mutación apareció en 12 casos más Existía una asociación con el subtipo histológico 30 de 31 Carcinomas epidermoides presentaban cfdna detectable (97%) 11 de 58 Adenocarcinomas presentaban cfdna detectable (19%) 5 de 7 tipos diferentes presentaban cfdna (71%) En Estadíos I, los Carcinomas epidermoides mostraban cfdna en 16 de 17 casos (94%) y los Adenocarcinomas en 5 de 39 (13%)
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12 Seguimiento con PCR cada tres meses dos años en 24 pacientes 10 pacientes sin recidiva 14 pacientes con recidiva Al menos dos mutaciones se detectaron en 13 de los 14 pacientes con recidiva confirmada Antes En el momento de la recidiva clínica Al menos dos mutaciones se detectaron en 1 de los 10 pacientes sin evidencia clínica de recidiva (CRUK0013) Intervalo medio detección de cfdna y recidiva confirmada 70 días
13 Pacientes sin recidiva
14 Pacientes con recidiva
15 Subclonal sensible
16 El tratamiento con Quimioterapia convencional no parece actuar sobre las recidivas preclínicas Debemos tratar los subclones? Volumen tumoral correlaciona con el valor de detección en cfdna en plasma 10 cm 3 predice un 0,1% de frecuencia de variante mutada Detección precoz basada en TAC de baja radiación es capaz de detectar 0,4 cm (0,064 cm 3 ) Sensibilidad 1,4x10-4 de detección
17 La habitación de Arles (Vincent van Gogh 1889) expuesto en The Art Institute of Chicago.
18 Reconstrucción digital por Roy S. Berns and Brittany Cox, Munsell Color Science Laboratory, Rochester Institute of Technology, and Kelly Keegan, Department of Conservation, the Art Institute of Chicago
19 EGFR y Biopsia líquida. Monitorización? A qué nos enfrentamos con la NGS? A la administración? A nosotros mismos? A nuestros límites?
20 Mujer de 61 años de edad exfumadora de 50 paquetes/año Padre y hermana con cáncer de pulmón En marzo de 2014 lobectomía media derecha por Adenocarcinoma pt2, pn0 Noviembre de 2014 nuevo nódulo en lóbulo superior izquierdo Metástasis por Adenocarcinoma triple negativo (EGFR, ALK y ROS1) Carboplatino-Paclitaxel 6 ciclos Enero 2016 nueva recaída locorregional Cisplatino-Pemetrexed con Pemetrexed de mantenimiento hasta noviembre de 2016 Enero de 2017 persistencia de enfermedad. Radioterapia Enfermedad estable hasta septiembre de Progresión pulmonar Solicitan PD-L1 y NGS
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24 Celularidad tumoral: 60%
25 PD-L1 22C3 Neg
26 Reported Variants Classification Unclassified Location exonic Variant Effect missense Genes KRAS Length 1 dbsnp rs , rs Mutation c.34g>t Oncomine Variant Class Hotspot Coverage 1995 Type SNV Oncomine Gene Class Gain-of-function % Frequency AAA=0.00, AAC=0.00, AAG=0.00, AAT=0.00, ACA=26.17, ACG=0.00, ACT=0.00, AGC=0.00, ATA=0.00, ATC=0.75, ATT=0.00, CCA=0.00, CTC=0.00, GAC=0.00, GCA=0.10, GTC=0.00, TTC=0.00 Classification Unclassified Genes ERBB2 Mutation c.2305g>a Type SNV Location exonic Length 1 Oncomine Variant Class Hotspot Oncomine Gene Class Gain-of-function Variant Effect missense dbsnp rs % Frequency A=4.86, C=0.00, T=0.00 Coverage 925 Variant Details Gene: KRAS -- Exon: chr12: NM_ Classification: Unclassified Sample Genotype Amino Acid b _v1 c.34g>t p.gly12cys * protein change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon Source UserName Description Notes Gene: ERBB2 -- Exon: chr17: NM_ Classification: Unclassified Sample Genotype Amino Acid b _v1 c.2305g>a p.asp769asn * protein change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon
27 La heterogeneidad molecular de las neoplasias proporciona la gasolina para la evolución y la resistencia a los fármacos Greaves M 2015
28 Se revisan 100 carcinomas en estadío precoz con muesrteo sistemático En total 327 regiones Alteraciones tempranas driver son robustas Alteraciones driver heterogéneas tardías aparecieron en el 75% de los tumores Genes relacionados con reparación de daño en ADN y remodelado de la cromatina No específicas de tipo histológico
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32 p.asp769asn
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34 Reported Variants Classification Unclassified Location exonic Variant Effect missense Genes KRAS Length 1 dbsnp rs , rs Mutation c.34g>t Oncomine Variant Class Hotspot Coverage 1995 Type SNV Oncomine Gene Class Gain-of-function % Frequency AAA=0.00, AAC=0.00, AAG=0.00, AAT=0.00, ACA=26.17, ACG=0.00, ACT=0.00, AGC=0.00, ATA=0.00, ATC=0.75, ATT=0.00, CCA=0.00, CTC=0.00, GAC=0.00, GCA=0.10, GTC=0.00, TTC=0.00 Classification Unclassified Genes ERBB2 Mutation c.2305g>a Type SNV Location exonic Length 1 Oncomine Variant Class Hotspot Oncomine Gene Class Gain-of-function Variant Effect missense dbsnp rs % Frequency A=4.86, C=0.00, T=0.00 Coverage 925 Variant Details Gene: KRAS -- Exon: chr12: NM_ Classification: Unclassified Lo trataríais???? Sample Genotype Amino Acid b _v1 c.34g>t p.gly12cys * protein change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon Source UserName Description Notes Gene: ERBB2 -- Exon: chr17: NM_ Classification: Unclassified Sample Genotype Amino Acid b _v1 c.2305g>a p.asp769asn * protein change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon
35 Paciente varón de 75 años de edad Masa pulmonar en el lóbulo superior izquierdo
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42 B Recibido: 31/10/2016 NTRAL TRAL VALDECILLA ( DR/A Salida: 04/11/2016 Informado: 01/12/2016 ANÁLISIS MOLECULAR DE MUTACIONES EN EL GEN EGFR INFORME DE PATOLOGÍA MOLECULAR (RC.APA ) Material 75 remitido años Masculino Informe macroscópico rc.apa B Diagnóstico BIOPSIA DE PULMÓN. CILINDRO (PUNCH, BAAG, TRU-CUT) DE PULMÓN Recibimos en formol tres cilindros de pulmón que miden el de mayor tamaño 1 cm de longitud y del de menor tamaño 4 mm de longitud, son de coloración blanquecina y consistencia blanda. IT en tres bloques. Biopsia pulmonar de lóbulo superior izquierdo: - Adenocarcinoma de patrón acinar y micropapilar con infiltración perineural. Tipo de Estudio Realizado: Análisis de Identificación Molecular de Mutaciones en el gen EGFR Diagnóstico: Se realiza técnica para la detección de mutaciones en los exones 18, 19, 20 y 21 de EGFR por métodos de PCR en tiempo real que resulta: Resultado: MUTACIÓN DETECTADA EN EL EXÓN 18 de EGFR (NM_ ) Serie de validación ex18 c.2155g>a, p.(gly719ser) Observaciones: Esta mutación no está relacionada con sensibilidad a tratamiento con inhibidores de la actividad tirosin-quinasa Tecnología utilizada Cobas4800 EGFR mutation v.2 (Roche diagnóstica. IVD) Lote X05280 Material tisular utilizado: Tejido neoplásico fijado en formol e incluido en parafina. Procedencia de la biopsia: Tejido tumoral primario Porcentaje de células tumorales en la muestra: 70%
43 b _a1-a2_v1 SLC34A2(4) ROS1(32) chr4: chr6: * protein Gene: change EGFR takes -- Exon: into account changes chr7: at multiple --- genomic NM_ loci in same --- codon Classification: Unclassified Sample Source Description rs , rs , rs AAA=35.84, GenotypeCAA=0.00, CAT=0.00, Amino Acid 087, rs GCA=0.00, GGA=0.00, GTA=0.00 b _a1-a2_v1 c.2125g>a p.glu709lys UserName Notes Classification Genes Mutation Unclassified Gene: EGFR -- Exon: chr7: EGFR --- NM_ Classification: c.2155g>t Unclassified Location Length Oncomine Variant Class Oncomine Gene Class exonic Sample 1 Hotspot Genotype Gain-of-function Amino Acid Variant b _a1-a2_v1 Effect dbsnp % Frequency c.2155g>t Coverage p.gly719cys * missense protein change takes into account changes at rs , multiple genomic rs loci in same codon GA=0.00, GT=37.32, TT= Source Variant Details Description UserName Notes Gene(s): SLC34A2(4) ROS1(32) - Location: chr4: chr6: Classification: Unclassified Gene(s): TPM3(7) NTRK1(10) - Location: chr1: chr1: Classification: Unclassified Sample Genes Location b _a1-a2_v1 Sample SLC34A2(4) Genes ROS1(32) chr4: Location chr6: * protein b _a1-a2_v1 change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon TPM3(7) NTRK1(10) chr1: chr1: * protein change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon Source Description Source UserName Description Notes UserName Notes Gene: EGFR -- Exon: chr7: NM_ Classification: Unclassified Gene(s): ETV6(5) NTRK3(15) - Location: chr12: chr15: Classification: Unclassified Sample Genotype Amino Acid b _a1-a2_v1 Sample c.2155g>t Genes p.gly719cys Location * protein b _a1-a2_v1 change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon ETV6(5) NTRK3(15) chr12: chr15: * protein change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon Source Description Source Description Type SNV
44 Larotrectinib (LOXO-101) Entrectinib (RXDX-101)
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46 b _a1-a2_v1 SLC34A2(4) ROS1(32) chr4: chr6: * protein Gene: change EGFR takes -- Exon: into account changes chr7: at multiple --- genomic NM_ loci in same --- codon Classification: Unclassified Sample Source Description rs , rs , rs AAA=35.84, GenotypeCAA=0.00, CAT=0.00, Amino Acid 087, rs GCA=0.00, GGA=0.00, GTA=0.00 b _a1-a2_v1 c.2125g>a p.glu709lys UserName Notes Classification Genes Mutation Unclassified Gene: EGFR -- Exon: chr7: EGFR --- NM_ Classification: c.2155g>t Unclassified Location Length Oncomine Variant Class Oncomine Gene Class exonic Sample 1 Hotspot Genotype Gain-of-function Amino Acid Variant b _a1-a2_v1 Effect dbsnp % Frequency c.2155g>t Coverage p.gly719cys * missense protein change takes into account changes at rs , multiple genomic rs loci in same codon GA=0.00, GT=37.32, TT= Source Variant Details Description UserName Notes Gene(s): SLC34A2(4) ROS1(32) - Location: chr4: chr6: Classification: Unclassified Gene(s): TPM3(7) NTRK1(10) - Location: chr1: chr1: Classification: Unclassified Sample Genes Location b _a1-a2_v1 Sample SLC34A2(4) Genes ROS1(32) chr4: Location chr6: * protein b _a1-a2_v1 change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon TPM3(7) NTRK1(10) chr1: chr1: * protein change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon Source Description Source UserName Description Notes UserName Notes Gene: EGFR -- Exon: chr7: NM_ Classification: Unclassified Gene(s): ETV6(5) NTRK3(15) - Location: chr12: chr15: Classification: Unclassified Sample Genotype Amino Acid b _a1-a2_v1 Sample c.2155g>t Genes p.gly719cys Location * protein b _a1-a2_v1 change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon ETV6(5) NTRK3(15) chr12: chr15: * protein change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon Source Description Source Description Type SNV Las mutaciones driver son mutuamente excluyentes?
47 Mujer de 24 años con un Timoma tipo AB de la OMS seguido en otro centro que fue sometido a quimioterapia neoadyuvante Masa de 16 cm que engloba vasos mediastínicos y afecta pericardio Neumonectomía derecha en 2013
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57 B Diagnóstico Estudios complementarios (A) - Pleura infradiafragmática: - Tejido fibroescleroso infiltrado por nidos microscópicos de Timoma (B) - Adenopatía 4R: - Cinco ganglios linfáticos sin evidencia de malignidad (C) - Adenopatía 7: - Cuatro ganglios linfáticos sin evidencia de malignidad (D) - Pulmón derecho: - Timo y pulmón derecho con un Timoma residual microscópico en nódulo de 7 cm de eje máximo (nidos microscópicos de timoma sobre nueve preparaciones correspondientes a nódulo macroscópico) que infiltra pulmón y respeta el borde quirúrgico de resección - Pulmón con alteraciones por compresión - Un ganglio linfático sin evidencia de malignidad (E) - Implante pleural: - Pared torácica infiltrada por Timoma (F) - Implante pleural 2: - Pared torácica infiltrada por Timoma (G) - Implante pleural 3: - Pared torácica infiltrada por Timoma (H) - Implante pleural 4: - Pared torácica infiltrada por Timoma ANÁLISIS MOLECULAR DE EXPRESIÓN DE PD-L1 Se realiza técnica inmunohistoquímica frente a PD-L1 con el anticuerpo 22C3 de Dako (PD-L1 pharmdx) con referencia SK006 en plataforma automatizada Autostainer link 48 que resulta: - Positiva en células neoplásicas en un rango del 90% (Positivo con alta expresión) Puntos de corte: 1-49%: Positivo con baja expresión >50% Positivo con alta expresión La positividad está relacionada con respuesta a tratamiento con inhibidores específicos de PD1/PD-L1
58 PET 2015
59 TAC 2017
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62 b _f3_v1 SLC34A2(4) ROS1(34) chr4: chr6: Variant Details * protein change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon Gene(s): SLC34A2(4) ROS1(34) - Location: chr4: chr6: Classification: Unclassified Source Description Sample Genes Location UserName b _f3_v1 Notes SLC34A2(4) ROS1(34) chr4: chr6: * protein change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon Gene(s): SLC34A2(4) ROS1(32) - Location: chr4: chr6: Classification: Unclassified Source Description Sample Genes Location b _f3_v1 UserName Notes SLC34A2(4) ROS1(32) chr4: chr6: * protein change takes into account changes at multiple genomic loci in same codon Gene(s): SLC34A2(4) ROS1(32) - Location: chr4: chr6: Classification: Unclassified Source UserName Description Notes Gene(s): AR - Location: chrx: Classification: Unclassified Confirmamos????? Sample Location Copy Number b _f3_v1 chrx: * protein Gold change takes into standar???? account changes at multiple genomic loci in same codon Source Description UserName Notes
63 Se conocen numerosos genes con los que ROS1 se fusiona. Se mantiene el dominio quinasa El punto de fusión siempre está proximal al extremo 5 en los exones 32, 34, 35 ó 36
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