Biopsia líquida Presente y futuro
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- Luis Miguel de la Cruz Castro
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1 Biopsia líquida Presente y futuro
2 Terapias dirigidas contra el cáncer En las terapias dirigidas contra el cáncer se utilizan fármacos que bloquean el crecimiento del cáncer al interferir en moléculas específicas que participan en la progresión de la enfermedad. Las terapias dirigidas actúan en dianas moleculares específicas de las células cancerosas, a diferencia de las quimioterapias regulares, que actúan inespecíficamente en todas las células que crecen. Un paciente será candidato a terapia dirigida si se encuentra una diana apropiada. Si se trata de un tumor sólido, esta búsqueda implica una biopsia.
3 Los tumores adquieren resistencia al tratamiento
4 Los tumores adquieren resistencia al tratamiento
5 Mecanismos de resistencia al tratamiento Heterogeneidad inter e intratumoral: Evolución clonal Selección Burrel et al., Nature 2013
6 Limitaciones de la biopsia tradicional El tejido tumoral obtenido en la biopsia solamente ofrece una instantánea del momento de obtención de la muestra. Los tumores tienden a ser muy heterogéneos, por lo que la biopsia puede no ser representativa del conjunto del tumor. En ocasiones, es difícil la obtención del tejido. La aplicación de biopsias seriadas según avanza el tratamiento a menudo resulta impráctica.
7 Alternativa: biopsia líquida La obtención de la muestra consiste en una sencilla extracción sanguínea. La biopsia líquida es representativa de todo el tejido tumoral. Permite monitorizar la progresión de la enfermedad y detectar la aparición de subclones resistentes al tratamiento.
8 Cuándo se debe considerar una biopsia líquida? 2017 No se obtuvo suficiente tejido de la biopsia inicial. El tumor se originó en un lugar de difícil acceso. El tumor origina metástasis en cerebro, hueso, pulmón u otros lugares difícil de obtener una biopsia. El paciente no está respondiendo al tratamiento. El paciente se niega a una biopsia adicional (ha sufrido mucho y no quiere seguir). La biopsia líquida es mucho más sencilla obtener.sanac de
9 Monitorización del progreso de la enfermedad Heitzer, Ulz and Geigl, 2015 Journal of Clinical Chemistry 61:112
10 Monitorización del progreso de la enfermedad Heitzer, Ulz and Geigl, 2015 Journal of Clinical Chemistry 61:112
11 Origen del ADN en biopsia líquida Exosomas Células tumorales circulantes (CTCs) ADN tumoral circulante (ctdna)
12 Muestras en biopsia líquida
13 Exosomas Los exosomas son vesículas (30 a 150 nm) liberadas activamente por las células. Contienen ARN, ADN y proteínas. Tienen una función de mensajeros intercelulares. Su aplicación al campo de la biopsia líquida está en sus primeros pasos.
14 Exosomas Extracellular vesicles: Exosomes, microvesicles, and friends Raposo G and Stoorvogel W, J Cell Biol 2013
15 Células tumorales circulantes Son células de un tumor, que han sido derramadas en la circulación sanguínea o en el sistema linfático. Pueden fijarse en un tejido y ser la semilla de un tumor adicional en órganos distantes del de origen (metástasis). Mientras viajan y en la metástasis, llevan información sobre las mutaciones del tumor de origen.
16 Origen de las células tumorales circulantes (CTCs) Paterlini-Brechot et al. Cancer Letters :180
17 Biopsia líquida en células tumorales circulantes para metástasis. Las metástasis se pueden desarrollar muchos años después de la resección del tumor primario. La biopsia de las metástasis es un procedimiento invasivo y a veces peligroso. La caracterización molecular de las CTCs revela información representativa de las células de las metástasis. Alix-Panabières & Pantel, Clin. Chem. 2013
18 Instrumentación para Biopsia Líquida en células tumorales circulantes (CTCs) Sistema CellSearch - Menarini
19 Origen del ADN tumoral circulante (ctdna) Diaz and Bardelli, 2014 Journal of Clinical Oncology 32 ctdna es ADN del tumor que ha sido derramado en la corriente sanguínea. ctdna puede estar presente en un 0.01% - >90% del total del ADN libre circulante (cfdna). La cantidad de ctdna está relacionada con el tamaño del tumor y varía entre pacientes que presentan diferentes síntomas clínicos.
20 Tipos de muestra en biopsia líquida
21 Diferentes orígenes celulares del cfdna Tumor primario: Procesos: Corriente sanguinea: Células malignas Células no malignas Apoptosis, necrosis, liberación activa, fagocitosis, separación celular. ADN libre derivado del tumor (ctdna)
22 Diferentes orígenes celulares del cfdna Tumor primario: Procesos: Corriente sanguinea: Células malignas Células no malignas Apoptosis, necrosis, liberación activa, fagocitosis, separación celular. ADN libre derivado del tumor (ctdna) Células sanas ADN libre no tumoral
23 Diferentes orígenes celulares del cfdna Tumor primario: Procesos: Corriente sanguinea: Células malignas Células no malignas Apoptosis, necrosis, liberación activa, fagocitosis, separación celular. ADN libre derivado del tumor (ctdna) Células sanas ADN libre no tumoral Orígenes del cfdna: ctdna maligno ctdna no maligno cfdna germinal
24 Instrumentación para Biopsia Líquida en ADN tumoral circulante
25 Uso clínico de la Biopsia Líquida Como biomarcador diagnóstico: detección temprana y monitorización enfermedad mínima residual. Como biomarcador de pronóstico: identificación de riesgo alto de recurrencia y correlación con carga tumoral. Como biomarcador predictivo: monitorización de la dinámica tumoral, identificación de determinantes genéticos para terapia dirigida, evaluación de la respuesta al tratamiento y de la evolución de resistencia en tiempo real.
26 Flujo de pruebas sugerido Tumor sólido Tejido NGS Onco Tejido NGS BRCAness Biopsia accesible Tejido NGS Her Tejido NGS Fusiones Varios Tejido rtpcr BRAF, EGFR, K/N-Ras, etc. Definir terapia inicial Sangre NGS Onco Sangre NGS BRCAness Biopsia no accesible Sangre NGS Her Sangre NGS Fusiones Varios Sangre rtpcr BRAF, EGFR, K/N-Ras, etc. Monitorizar respuesta al tratamiento Varios Sangre rtpcr BRAFV600E, EGFR29, KRAS, K/N-Ras, EGFR, etc , Sangre NGS ESR1, TP53 La dolencia progresa Sangre NGS Onco 50 Nuevas opciones Sangre NGS Fusiones Sangre NGS BRCAness
27 Limitaciones de la Biopsia Líquida Al igual que en la biopsia tradicional, se necesitan más biomarcadores para cubrir mejor los diferentes tumores. Falta de consenso en la aproximación técnica. Falta de estandarización en cada uno de los pasos del procedimiento.
28 Reflexiones finales La biopsia líquida es una nueva herramienta de gran valor. El diagnóstico morfológico y molecular a través de la biopsia clásica presenta limitaciones. Hoy en día, con la tecnología actual, la biopsia líquida complementa a la biopsia clásica en el diagnóstico y seguimiento de los tumores sólidos.
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