Cáncer de Mama Resistencia a tratamientos anti- HER2 en pacientes con Cáncer de mama.

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1 Cáncer de Mama Resistencia a tratamientos anti- HER2 en pacientes con Cáncer de mama. Dr. Atanasio Pandiella, Centro Investigación Cáncer, Salamanca Dr. Alberto Ocaña, Complejo Hosp. Univeristario de Albacete

2 Qué es la mama? Cada mama tiene entre 15 y 20 secciones que se llaman lóbulos, éstas a su vez tienen más secciones que llaman lobulillos. Los lobulillos terminan en docenas de bulbos minúsculos que pueden producir leche. Los lóbulos, lobulillos y bulbos están conectados por tubos delgados que son conocidos como conductos mamarios. Cada mama tiene vasos sanguíneos y vasos linfáticos, estos últimos transportan la linfa hacia los ganglios linfáticos. Los ganglios tienen como misión filtrar la linfa y ayudar en la lucha contra enfermedades e infecciones. Hay racimos de ganglios cerca de la mama; en la axila, por encima de la clavícula y en el pecho.

3 Qué es el cáncer de mama? La mayoría de los tumores que se producen en la mama son benignos, no cancerosos, y son debidos a formaciones fibroquísticas. Los tumores benignos están relacionados en su mayoría con factores genéticos. Los síntomas que producen son dolor e inflamación pero ni se diseminan al resto del organismo ni son peligrosos. Dentro de los tumores malignos, existen varios tipos en función del lugar de la mama donde se originen y según su estadio. El Carcinoma ductal in situ se origina en las células de las paredes de los conductos mamarios. Es un cáncer muy localizado, que no se ha extendido a otras zonas próximas ni ha producido metástasis. Puede detectarse mediante una mamografía y puede extirparse fácilmente. El Carcinoma ductal infiltrante (o invasivo) es el que se inicia en el conducto mamario pero logra atravesarlo y pasa al tejido adiposo de la mama. Es el más frecuente de los carcinomas de mama. El Carcinoma lobular in situ se origina en los lóbulos y aunque no es un verdadero cáncer, aumenta el riesgo de desarrollar un tumor en el futuro. Se suele dar antes de la menopausia. Una vez que es detectado es importante realizar una mamografía de control al año y varios exámenes clínicos. El Carcinoma lobular infiltrante (o invasivo) comienza en los lóbulos pero se puede extender y destruir los tejidos. Entre el 10 y el 15% de los tumores de mama son de este tipo. Este tipo de carcinoma es difícil de detectar mediante una mamografía.

4 Cáncer de mama en España Según datos de la Sociedad Española de Oncología Médica, la incidencia en España del cáncer de mama en el año 2012 fue de nuevos casos, lo que supone un 29% de todos los tumores, aunque la mortalidad ha descendido en los últimos años, con fallecimientos sigue siendo la principal causa de muerte por cáncer en mujeres. No se conocen bien las causas que lo provocan aunque se han identificado factores de riesgo en las variables reproductivas de la mujer, aparición temprana de la primera regla, menopausia tardía, terapia hormonal sustitutiva, la falta de embarazos y una densidad elevada de la mama. Además, las mujeres con antecedentes familiares pueden tener mayor riesgo. La exposición a radiaciones ionizantes en la pubertad y el alcohol y la obesidad también aumentan el riesgo. Se sabe que la detección en estadios tempranos puede suponer una supervivencia del 98% mientras que en fase III sólo un 24% de las pacientes sobrevive, por ello es tan importante la prevención. El cáncer de mama metastático sigue siendo un problema clínico sin resolver.

5 Clasificación del cáncer de mama Desde el punto de vista clínico-patológico, el cáncer de mama se ha clasificado en tres grupos: A. Tumores que presentan expresión de receptores hormonales, estos son unas moléculas que se encuentran en la membrana de las células y que reconocen diversas hormonas en el exterior como la cerradura reconoce la llave, transmiten una señal al interior de la célula, pueden ser de estrógeno y progesterona. B. Tumores que sobreexpresan la proteína quinasa transmembrana HER2, esta molécula también es un mediador de la señal al interior de la célula y estimula el crecimiento si el número de estos receptores es muy alta las células no pararán de multiplicarse. C. Los tumores que carecen de expresión alta de esos marcadores y que se catalogan como tumores triple-negativos, suponen un 15%. Estos tumores no responden a los tratamientos como los anteriores y además son más agresivos y las pacientes suelen sufrir recaídas. Sólo la quimioterapia permite disminuir la velocidad de crecimiento y paliar las alteraciones en los mecanismos de reparación del DNA, desgraciadamente la resistencia a estas terapias supone un problema clínico importante.

6 Proyecto Cáncer de Mama En el presente proyecto de investigación pretendemos ahondar en el conocimiento de los mecanismos responsables del desarrollo de resistencia a terapias anti- HER2, para poder plantear tratamientos alternativos y desarrollar nuevos fármacos para mejorar el pronóstico y la tasa de curación de pacientes cuyos tumores son resistentes a los fármacos anti-her2 actuales. Los principales objetivos del proyecto de investigación propuesto se centraban en tres apartados: 1. La creación de modelos in vitro e in vivo de resistencia a dichas HER-2 terapias. Desarrollar modelos de células resistentes a trastuzumab, a lapatinib y a la combinación de ambos mediante tratamiento continuado con estos fármacos, 2. Analizar detalladamente los mecanismos responsables de dicha resistencia utilizando técnicas genómicas y proteómicas. 3. Realización de screenings de librerías de RNAi y de compuestos inhibidores, con el objetivo de identificar dianas y fármacos que puedan utilizarse para luchar contra los mecanismos de resistencia.

7 1. Primeros resultados Tras haber conseguido los modelos de resistencia a trastuzumab, lapatinib, y a ambas terapias, hemos extraido RNA de ellas y se ha preparado para hibridación a arrays de Affymetrix. Estudios genómicos ya iniciados en células denominadas BT474, resistentes a trastuzumab (BTRH) y resistentes a lapatinib (BTRL) han identificado genes cuya expresión cambia de manera sustancial en las líneas resistentes respecto a la normal. Se ha encontrado cambios que provocan variaciones en la expresión de 234 genes en BTRH (140 aumentados y 94 disminuidos) y de 402 genes en BTRL (205 aumentados y 197 disminuidos) respecto a los niveles de expresión encontrados en las células parentales. Estos resultados han sido validados con otras técnicas moleculares a nivel de genes y de proteínas.

8 2. Primeros resultados Los estudios funcionales se han centrado en dos aspectos que ahora mismo representan temas de trabajo en el laboratorio: 1. Un aumento de la cantidad de receptores de TRAIL en las células resistentes a trastuzumab confirmado por citometría y western blot y también se ha observado que la línea resistente a trastuzumab es más sensible a TRAIL que la línea original. 2. Observar que las líneas resistentes a lapatinib presentaban algunos genes en común con células resistentes a trastuzumab. Esto llevó a pensar que las células resistentes a trastuzumab podrían tener también resistencia a lapatinib, lo que es importante desde el punto de vista clínico porque lapatinib suele administrarse en cáncer de mama como alternativa a la resistencia que se instaura a trastuzumab.

9 3. Primeros resultados screning Se ha descubierto una molécula natural que actúa sobre una nueva ruta para atacar los cánceres de mama triple negativo diseminados, estos tumores que son muy proclives a extenderse a otros órganos, crecen de forma muy rápida y suelen volver a aparecer. La molécula EC se produce mediante biosíntesis, es un inhibidor de una ruta de señalización denominada tirosina quinasa, que lleva información desde el exterior al interior provocando cambios en el funcionamiento de la célula y se ha demostrado que ha detenido el crecimiento en tumores de ratones. Su efecto se realiza en los niveles de la reparación del ADN, detención del ciclo celular y suicidio programado, se ha visto que puede mejorar notablemente el efecto de la quimioterapia con taxanos en ratones, publicado en Oncotarget en Agosto 2015 Antitumor activity of the novel multi-kinase inhibitor EC in triple negative breast cancer

10 3. Primeros resultados screning La molécula EC-8042 ha demostrado en estudios in vitro con células tumorales y en ratones in vivo a los que se les trasplanta el tumor, ser capaz de detener el crecimiento de los tumores triple negativo, que no reaccionan a los tratamientos con medicamentos para receptores de estrógeno (ER-), para receptores de progesterona (PR-) y para HER2 (HER2-) y reaparecen frecuentemente. La acción de la molécula, un análogo del antibiótico antitumoral mitramicina, se produce en una fase del ciclo de crecimiento de la célula lo que permite detener el avance del tumor, pero además provoca el suicidio de las células tumorales. Los resultados han sido publicados en Oncotarget en Septiembre 2015 Antitumoral activity of the mithralog EC-8042 in triple negative breast cancer linked to cell cycle arrest in G2.

11 Siguientes pasos Es imprescindible seguir descifrando las rutas alteradas en la resistencia a tratamientos de los tumores triple negativos de mama. Continuar con el screning de posibles moléculas terapéuticas. Demostrar la acción clínica de las moléculas EC-8042 y EC a nivel clínico, individualmente y en combinación con quimioterapia.

12 Presupuestos Analizar la alteraciones del ADN de un paciente Generar las células resistentes a la terapia Estudios de crecimiento de las células tratadas con los posibles medicamentos Producir los ratones con tumores para probar los resultados obtenidos

13 Conclusiones Se han desarrollado modelos celulares de resistencia a tratamientos HER2. Han sido descubiertos varios mecanismos alterados en estas células que pueden explicar lo que les ocurre a los enfermos. 2 Nuevas moléculas se han probado en las líneas celulares y en ratones con tumores trasplantados con éxito.

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