UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO FACULTAD DE QUÍMICA EVALUACIÓN DEL EFECTO ANTIDIABÉTICO DE TORTILLAS DE HARINA DE MAÍZ (Ze mys L.) PREPARADAS CON DIFERENTES PROCESOS TECNOLÓGICOS TESIS QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO PRESENTA JULIO CESAR RUBIO RODRIGUEZ DIRIGIDA POR DRA. ROSALÍA REYNOSO CAMACHO SANTIAGO DE QUERÉTARO, QUERÉTARO, 2013.
ÍNDICE GENERAL Contenido Págin ÍNDICE GENERAL i ÏNDICE DE CUADROS iii ÍNDICE DE FIGURAS iv RESUMEN 1. ANTECEDENTES 1 1.1 Dietes mellitus 1 1.1.1 Definición 1 1.1.2 Clsificción 1 1.1.2.1 Dietes mellitus tipo 1 1 1.1.2.2 Dietes mellitus tipo 2 1 1.1.3 Epidemiologí 2 1.1.4 Dignostico 3 1.1.5 Dietes y estrés oxidtivo 3 1.1.6 Complicciones de l dietes 5 1.1.7 Trtmiento y prevención 6 1.2 Míz 7 1.2.1 L importnci del míz en México y el mundo 8 1.2.2 Composición químic del grno de míz 8 1.2.2.1 Fir dietétic 9 1.2.2.2 Compuestos fitoquímicos del míz 9 1.3 Tortill de míz 9 1.3.1 Nixtmlizción 10 1.4 El míz, l tortill y sus eneficios en l slud 11 2. HIPÓTESIS 13 3. OBJETIVOS 14 3.1 Generl 14 3.2 Específicos 14 4. METODOLOGÍA 15 i
4.1 Mteriles 15 4.1.1 Mteril iológico 15 4.1.2 Mteril químico 15 4.1.3 Muestrs de experimentción 15 4.2 Métodos 15 4.2.1 Crcterizción de ls tortills de míz 15 4.2.1.1 Otención del extrcto de compuestos fenólicos 15 4.2.1.2 Compuestos fenólicos totles 16 4.2.1.3 Cuntificción de tninos condensdos 16 4.2.1.4 Cuntificción de flvonoides totles 17 4.2.1.5 Cuntificción de ntocinins 17 4.2.1.6 Cpcidd ntioxidnte 18 4.2.2 Inducción de dietes con estreptozotocin 18 4.2.3 Grupos de experimentción 18 4.2.4 Cuntificción de glucos snguíne en yuno 19 4.2.5 Análisis en orin 19 4.2.5.1 Determinción de proteíns por el método de Lowry 19 4.2.5.2 Determinción de cretinin en orin 19 4.2.5.3 Remnente de céluls et 19 4.2.6 Análisis en plsm 20 4.2.6.1 Perfil lípidico 20 4.2.6.2 Químic de 3 elementos 20 4.2.6.3 Cuntificción de insulin 20 4.2.7 Análisis estdístico 20 5. RESULTADOS 22 5.1 Crcterizción de compuestos fenólicos 22 5.2 Efecto en los niveles de glucos en sngre por el consumo de 23 tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos 5.3 Efecto en los niveles de insulin en plsm por el consumo de 25 tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos 5.4 Efecto en el consumo semnl de gu y limento por el consumo 27 ii
de tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos 5.5 Efecto en el peso reltivo de los riñones por el consumo de tortills 29 de míz elords con diferentes procesos tecnológicos 5.6 Efecto del consumo de tortills de míz elords con diferentes 30 procesos tecnológicos sore los niveles de ure y cretinin de rts diétics 5.7 Efecto en los niveles perfil lipídico por el consumo de tortills de míz 32 elords con diferentes procesos tecnológicos 6. DISCUSIÓN 40 7. CONCLUSIONES 44 8. REFERENCIAS 46 iii
ÍNDICE DE CUADROS Cudro Págin 1 Criterios pr el dignóstico de l dietes mellitus 3 2 Clsificción txonómic del míz Z. mys 7 3 Composición porcentul de ls frcciones del grno de míz 8 4 Crcterizción de compuestos fenólicos de hrins de míz 22 5 Concentrción de insulin en plsm de rts sns, diétics y rts limentds con tortills elords con diferentes procesos tecnológicos 26 iv
ÍNDICE DE FIGURAS Figur Págin 1 Principles cuss de mortlidd generl en México 2 2 Principles mecnismos de inducción de estrés oxidtivo 4 ocsiondos por el umento de glucos 3 Estructur del grno del míz 7 4 Tortills y diferentes vrieddes de míz 10 5 Efecto del consumo de tortills de míz elords con 24 diferentes procesos tecnológicos en l glucos en yuno en rts 6 Efecto del consumo de tortills de míz elords con 25 diferentes procesos tecnológicos en l glucos plsmátic de rts Wistr diétics después de cutro semns de trtmiento 7 Efecto del consumo de tortills elords con diferentes 27 procesos tecnologicos sore el porcentje remnente de celuls β (%FCβ) 8 Efecto del consumo de tortills elords con diferentes 28 procesos tecnologicos sore el consumo semnl de limento () y gu () en rts Wistr diétics 9 Peso reltivo de los riñones como indicdor de dño renl en 30 rts Wistr 10 Efecto en l concentrcion de los niveles plsmticos de ) 31 cretinin y ) ure 11 Efecto del consumo tortills de míz elords con diferentes 32 procesos tecnológicos sore los niveles en orin de ) cretinin y ) proteín 12 lípidico de los grupos diéticos trtdos con tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos 33 v
Resumen L dietes es un de ls principles cuss de muerte en México deido ls complicciones generds por l hiperglucemi que tre consigo un umento en rdicles lires generndo un estdo de estrés oxidtivo, un diet con firs y ntioxidntes ofrece un efecto protector contr ests complicciones. L tortill de míz, es un componente principl en l diet del mexicno, l cul es un lterntiv pr l diet del diético. En este proyecto de investigción se evluó el efecto ntidiético de tortills elords con hrins de míz otenids medinte diferentes procesos tecnológicos, tecnologí limpi (TL), que poseen myor cntidd de fir insolule y como control se usron tortills elords con hrins otenids de procesos de nixtmlizción trdicionl (NT). Se relizó un evlución en ls hrins de los principles compuestos fenólicos, posteriormente se limentron rts diétics inducids con estreptozotocin con diets suplementds con ests hrins (15%) durnte 3 semns, un vez finlizdo en periodo del trtmiento se evluó el perfil lipídico y prámetros ioquímicos de dño renl. Los resultdos indicn que ls tortills elords con TL no disminuyeron los vlores de glucos sí como los prámetros ioquímicos de dño renl respecto l control diético (p<0.05). El consumo de ls tortills elords con un de l hrins NT, produjo un decremento de l glucos plsmátic del 35.7% respecto l grupo de rts diétics (p<0.05). El consumo de tortills con TL umentó los niveles de HDL y disminuyeron los niveles de LDL. Estos resultdos sugieren que ls hrins otenids medinte tecnologí limpi no disminuyen el dño renl ocsiondo por l dietes pero tienen un efecto enéfico en el perfil lipídico de rts diétics..
1. ANTECEDENTES 1.1 Dietes mellitus 1.1.1 Definición L dietes mellitus (DM) constituye un grupo heterogéneo de trstornos metólicos de crácter crónico, crcterizdos por un concentrción elevd de glucos en sngre, resultdo de un secreción deficiente de insulin, por l lterción en l cción de est hormon o ms (Rmos-Irr y col., 2006; Americn Hert Assocition, 2012). 1.1.2 Clsificción 1.1.2.1 Dietes mellitus tipo 1 L dietes mellitus tipo 1 (DM1) tmién llmd insulino dependiente o dietes juvenil, se mnifiest por cus de un destrucción uto-inmune de ls céluls β pncreátics, disminuyendo l producción de insulin, lo que tre como consecuenci un j concentrción de plsmátic de est hormon, esto produce un umento en l concentrción de glucos en sngre, por lo cul es necesrio dministrr insulin en los pcientes con DM1. Este tipo de dietes se present con un prevlenci del 5% en nuestro pís (Asher y col., 2006; Federción Interncionl de Dietes, 2012). 1.1.2.2 Dietes mellitus tipo 2 L dietes mellitus tipo 2 (DM2) tmién es llmd no insulinodependiente se mnifiest como un trstorno metólico que curs con hiperglucemi cus del indecudo uso de l insulin, el orgnismo present un resistenci est hormon. El desrrollo de DM2 se relcion estrechmente con el síndrome 1
metólico, sí como, con l oesidd. L DM2 tiene un prevlenci del 90% de los csos reportdos de dietes (Americn Hert Assocition, 2012). 1.1.3 Epidemiologí L dietes es un prolem de slud púlic tnto de crácter glol como ncionl, se estim que cerc de 366 millones de persons en el mundo tienen dietes, y en México hy un prevlenci documentd hst el 2011 de 10.2 millones de csos, esto de cuerdo l Federción Interncionl de Dietes (IDF), que tiene congruenci con lo reportdo por l Encuest Ncionl de Slud y Nutrición 2012 (ENSANUT), donde reportn 6.4 millones con dietes dignosticdo y otro tnto que no lo se, demás se report un umento en l prevlenci de 30% entre 2006 y 2012. (ENSANUT, 2012; Federción Interncionl de Dietes, 2012). En nuestro pís l DM se h convertido en l principl cus de muerte desde el 2000 l 2008, lcnzdo un ts del 14% de mortlidd en el 2008, esto reportdo por l Secretri de Slud (Figur 1). Otrs 6% 5% 4% 3% Dietes mellitus 11% Enfermeddes isquémics del corzón 14% 57% Enfermedde cererovsculr Cirrosis y otrs enfermeddes cronics del Hígdo Enfermedd pulmonr ostructiv crónic Accidendentes de vehiculo de motor Figur 1. Principles cuss de mortlidd generl en México (SINAIS, 2008). 2
1.1.4 Dignostico L Asocición mericn del Corzón (AHA / por sus sigls en ingles) hce referenci los criterios recomenddos pr un dignóstico correcto de l DM donde el prámetro evlur es l glucos (Cudro 1). Tmién se hce referenci l porcentje de hemogloin glucosild frcción HA1c el cul no dee de superr el 7% y dee ser usdo pr monitorer l dietes en los 3 últimos meses y no pr usos de dignostico. (Americn Hert Assocition, 2012). Cudro 1. Criterios pr el dignostico de DM Prámetro Vlor recomenddo Glucos en yuno de 8 hors 126 mg/dl ó 7 mmol/l Glucos l zr 200 mg/dl ó 11.1 mmol/l Glucos ls 2 hors posterior un crg de 75 g de glucos 200 mg/dl ó 11.1 mmol/l nhidr (Asocición Americn del Corzón, 2012). 1.1.5 Dietes y estrés oxidtivo Diversos estudios relcionn el dño ocsiondo por el umento de l glucos en sngre y el umento en l concentrción de especies rectivs oxigeno (ROS) en pcientes con DM, este estdo se reconoce como estrés oxidtivo (Gicco y Brownlee, 2010). Diversos mecnismos son los cusntes del umento de ROS en el orgnismo, entre los mecnismos tenemos l ví poliol o soritol l cul medinte un serie de recciones ioquímics se otiene fructos prtir de glucos, generándose el soritol con l yud de l enzim ldos reducts. El umento de fructos por 3
est ví disminuye l concentrción de NADPH un molécul que interviene como cofctor en diversos procesos redox del orgnismo, como l síntesis del gluttión reductor (GSH) que es un importnte ntioxidnte destructor de ROS (Gicco y Brownlee, 2010). L Figur 2 muestr un relción de los distintos mecnismos de dño ocsiondos por estrés oxidtivo. Figur 2. Mecnismos de inducción de estrés oxidtivo ocsiondos por el umento de glucos. El umento en l concentrción de fructos ctiv l ví de ls hexosmins, que provoc el umento de UDP-N-cetilglucosmin por l rección de l fructos-6- fosfto y l glutmin. Est glucosmin d origen l formción de glicoproteíns y proteoglicnos, demás provoc un soreexpresión de genes como TGF α y β (Díz, 2006; Gicco y Brownlee, 2010). El umento de dicilglicerol por l inhiición de l enzim glicerldehido-3-fosfto deshidrogens ctiv l ví de ls proteíns cinss C (PKC), ls proteíns de l fmili de ls PKC están relcionds con múltiples procesos inflmtorios como l 4
PKC-β en complicciones de l retin, riñón, corzón y vsculr (King, 2008; Gicco y Brownlee, 2010). L producción de productos de l glucosilción vnzd (PGA), se dee l rección del grupo cronilo de l glucos y otros monoscáridos con el mino terminl de ls proteíns y minoácidos. Como resultdo se otienen moléculs modificds químic y iológicmente cpces de ocsionr grves dños l orgnismo. Por otro ldo los PGA, que son producidos por ls céluls endoteliles son lierdos l sngre y se unen medinte receptores céluls como los mcrófgos y céluls msngiles, donde incrementn l producción de ROS, que su vez ctiv l Fctor Nucler Kpp- (NF-κ), promoviendo l expresión de citocins pro-inflmtoris como TNF-α induciendo un estdo de inflmción (Krsu, 2010; Gicco y Browlee, 2010). 1.1.6 Complicciones de l dietes Dentro de ls complicciones ocsionds por l DM se tienen dos principles tipos como son los dños mcro-vsculres y micro-vsculres. Dentro de los mcro-vsculres tenemos l terosclerosis, que es un de ls principles cuss de muerte en pcientes con dietes (Federción Interncionl de Dietes, 2012). Es un ptologí donde los lípidos se cumuln en el interior de ls rteris en form de plcs llmds teroms que hcen más lento el flujo de sngre y fectn l irrigción en distintos tejidos y órgnos, provocndo infrto l miocrdio (Wei y col., 1998; Eknoyn, 2007). Dentro de ls complicciones micro-vsculres se tienen l retinoptí diétic, l cul es l principl cus de ceguer irreversile en México (Prdo-Serrno y col., 2009). L neuroptí diétic es l más común de ls complicciones microvsculres de l dietes mellitus. L cul se present con dño los nervios como resultdo de un hiperglicemi que puede fectr nervios crneles o de l column verterl y sus rmificciones (Cllghn y col., 2012). 5
L nefroptí diétic es un ptologí donde hy lesiones renles originds de los pequeños vsos. Donde se fect l microcirculción renl originndo un serie de lterciones funcionles y estructurles principlmente nivel glomerulr. Lo que ocsion que el riñón pierd l cpcidd pr funcionr propidmente. Est condición se crcteriz por los niveles elevdos de lúmin y presenci de proteín en l orin. L nefroptí diétic es l cus más común de insuficienci renl crónic en México, demás de que es un de ls complicciones crónics más grves y más frecuentemente oservd en los pcientes con dietes tipo 2. Dich lterción es un de ls principles cuss de mortlidd por dietes (Torres y Zcris, 2004; Atls de l dietes de l IDF, 2012). 1.1.7 Trtmiento y prevención El trtmiento frmcológico pr l dietes est dirigido disminuir l hiperglucemi; fármcos como ls igunids mejorn l sorción de insulin, hy inhiidores pr disminuir los niveles de glucos postprndil. Algunos otros fármcos como ls meglitinids resturn l primer fse de secreción de insulin, disminuyen tmién los niveles séricos de glucos postprndil previniendo los picos hiperglucémico entre l ingest de limentos (Menéndez y col., 2011). Por otro ldo, diversos estudios epidemiológicos hn pulicdo que polciones donde se consumen diets como ls mediterránes o ls vegetrins, tienen un menor porcentje de incidenci de enfermeddes crónico degenertivs, esto se le triuye l relción de l lt concentrción de compuestos como ls firs, principlmente ls solules, ácidos grsos omeg, fitoesteroles, ntioxidntes, entre los que destcn los compuestos fenólicos (Pitsvos y col., 2005). 1.2 Míz L clsificción txonómic del míz se muestr en el cudro 2. 6
Con respecto l grno del míz este está conformdo por el pericrpio comúnmente llmdo cscr, endospermo, germen y pedicelo como sus componentes principles que se muestrn en l Figur 3. Cudro 2. Clsificción txonómic del míz Reino Plnte Clse Liliopsid Suclse Commelinide Fmili Pocee Sufmili Pnicoidee Género Ze Especie Z. mys (Hitchcock y Chse, 1971) Figur 3. Estructur del grno del míz (Predes y col., 2006) El componente con myor peso porcentul en el grno es el endospermo, que posee un lto contenido de lmidón. El germen con un 11% en el peso del grno represent un elevdo contenido de grss, proteíns y minerles. El pericrpio comprende el 5% del peso del grno y está constituido principlmente por fir como l hemicelulos y celulos (Benítez, 2006). 7
1.2.1 L importnci del míz en México y en el mundo El míz es un de ls especies más relevntes y con un ppel centrl en l limentción, sociedd, cultur y economí de México. El míz es uno de los cutro principles cultivos producidos en el mundo, y en nuestro pís ocup l mitd de l superficie destind l áre grícol (Kto y col., 2009). 1.2.2 Composición químic del grno de míz En el Cudro 3 se muestr l composición químic de cd frcción del grno míz en sus principles componentes como lo es l fir, proteíns, lípidos y lmidón. Donde el pericrpio o cuiert del grno de míz se encuentr principlmente constituido por fir crud, l que su vez es 67% hemicelulos y 23% celulos. Por otro ldo en el endospermo el principl componente es el lmidón con 87.6% (Wtson, 1987; Burge y Duesing, 1989). Los grnos de míz se encuentrn constituidos con un porcentje de 4.5% de lípidos del cul el 85% se encuentr en el germen (Wtson, 1987). Cudro 3. Composición porcentul de ls frcciones del grno de míz Frcción (%) Proteín Extrcto Fir Cenizs Almidón Azúcr etéreo crud Endospermo 8.0 0.8 2.7 0.3 87.6 0.62 Pericrpio 3.7 1.0 86,7 0.8 7.3 0.34 Germen 28.4 33.2 8.8 10.5 8.3 10.8 (Wtson, 1987) 1.2.2.1 Fir dietétic L fir dietétic es quell prte comestile de vegetles y crohidrtos nálogos, que son resistentes l sorción y digestión en el intestino delgdo humno, con un prcil o complet fermentción en el intestino grueso, e incluye 8
poliscáridos, oligosácridos y lgunos otros fitoquímicos como los compuestos fenólicos. L fir dietétic promueve efectos fisiológicos enéficos pr el ser humno como disminución del colesterol y glucos (Mrtínez y Figuero, 2008). L fir dietétic se clsific de cuerdo l soluilidd en gu de sus componentes. Donde se divide en fir solule que es quell que es ferment por l microflor del colon y fir insolule que no es digerid y es fermentd en un mínim cntidd, este tipo de fir insolule se excret prácticmente integr (Tungld y Meyer, 2002; Mrtínez y Figuero, 2008). 1.2.2.2 Compuestos fitoquímicos del míz El grno del míz posee compuestos fenólicos que son sustncis químics propis del metolismo secundrio de ls plnts. Estos compuestos poseen propieddes ntioxidntes, ntiinflmtoris, nticncerígens y otrs propieddes que eneficin l orgnismo. Dentro de los principles tipos de compuestos fenólicos se tienen los flvonoides que son pigmentos heterocíclicos romáticos que poseen el míz y otrs plnts. Ls ntocinins son otros compuestos de interés, estos son glucósidos de ntocinidins, pertenecientes l fmili de los flvonoides (Adom y Liu, 2002; Astrid, 2008; Escmill- Jiménez y col., 2009). 1.3 Tortill de míz L tortill de míz es uno de los limentos trdicionles más importntes en nuestro pís y que se consider un limento ásico. Se estim que el consumo dirio per cápit equivle l 27% de l ingest diri, y en ls áres más urnizds el consumo de tortill equivle el 10% de l diet. L tortill proporcion el 70% de ls clorís y 50% de ls proteíns consumids con l diet diri. Ls tortills se pueden encontrr en diferentes colores, esto se dee los pigmentos nturles contenidos en ls distints vrieddes de míz con el que se elorn como se muestr en l Figur 5 (Flores y col., 2000; Guerrero-Villnuev y col., 2012). 9
Figur 4. Tortills y diferentes vrieddes de míz 1.3.1 Nixtmlizción Del náhutl nixtli, cenizs, y tmlli, ms, l nixtmlizción es un proceso trdicionl mexicno que se h trnsmitido de generción en generción en Mesoméric, y todví se utiliz en l ctulidd como se hcí en tiempos prehispánicos. Se inici con l dición de dos prtes de un solución lclin de hidróxido de clcio (C(OH) 2 ) proximdmente l 1% un porción de míz. Est mezcl se somete cocción por un periodo de tiempo de 50 90 minutos, y se dej remojndo en el gu de cocción de 14 18 hors. Posterior l remojo, el gu de cocción, conocid como nejyote, se retir y el míz se lv dos o tres veces con gu hst eliminr residuos de hidróxido oteniendo sí el llmdo míz nixtmlizdo o nixtml. Este míz nixtmlizdo es el que se us pr formr ls tortills que se clientn en un coml 180-210 C por dos minutos (Crvjl-Millán, 2007; Predes y col., 2009). L nixtmlizción provee un trtmiento que increment el lnce de minoácidos esenciles demás que se lier nicin tmién conocid como vitmin B3, que es esencil en el metolismo de l célul y l reprción del DNA (Figuero y col., 2001). 10
Durnte l nixtmlizción son elimindos medinte el nejyote un lt cntidd de vitmins, minerles, proteíns, lípidos y crohidrtos solules. Tmién se pierde cerc del 64% del pericrpio deido l deilitmiento de sus predes por el hidróxido, disminuyendo l cntidd de fir insolule (Armul y col., 2002; Predes y col., 2009). En l ctulidd se están introduciendo otros procesos de nixtmlizción conocidos como ecológicos o tecnologí limpi deido que se usn sles de clcio como lo es sulfto de clcio CSO 4 o tmién icronto de clcio C(HCO 3 ) 2 en lugr del hidróxido de clcio. Este proceso permite conservr myor cntidd del pericrpio y sí segurr myor fir insolule y otros compuestos elimindos con el proceso trdicionl (Veles, 2006. Ptente). 1.4 El míz, l tortill y sus eneficios en l slud L dministrción de diets trdicionles que incluye l ingest de tortills de míz, poseen un potencil efecto ntidiético y ntihipertensivo deido su concentrción de compuestos ntioxidntes. El extrcto cuoso y el extrcto etnólico de los grnos de míz poseen ctividd inhiitori in vitro de l enzim α- glucosids que tiene como efecto l disminución en l sorción de crohidrtos desde el trcto digestivo, reduciendo sí los picos en los niveles de glucos postprndil. A su vez otros estudios muestrn l ctividd inhiitori del míz en l enzim convertidor de ngiotensin I que form prte de los mecnismos que reguln l presión rteril y tmién en l ctividd de l enzim α-mils lo que disminuye l sorción de crohidrtos (Kwon y col., 2007; Lee y col., 2010). Se h evludo el efecto in vitro de diferentes firs derivds de míz en l ctividd de l microiot del intestino grueso, mostrndo un umento en l ctividd de ls cteris que eneficin l orgnismo (Mthuis y col., 2009). 11
Estudios hn mostrdo que l dministrción en l diet de diferentes tipos de tortills de míz en un concentrción del 27% h disminuido l ctividd de l β- glucoronids y ument l ctividd de l enzim gluttion s-trnsfers que son prámetros relciondos con el riesgo de cáncer de colon (Guerrero-Villnuev y col, 2012). El lto contenido de ntocinins en el míz pigmentdo purpur, muestr un efecto protector en l nefroptí diétic in vitro l disminuir l expresión de fctores y citocins proinflmtoris (Li y col., 2012). L dministrción de diets sds en fir de míz mostrron un efecto hipogluceminte en l glucos postpndril y un disminución en l insulin circulnte (Kendll y col., 2008). L sponin del míz dministrdo rts con dietes inducid con estreptozotocin produjo un efecto hipogluceminte y protector contr los dños renles y pncreáticos (Mio y col., 2008). En se lo nteriormente descrito es clro el efecto enéfico producido por el míz y/o sus componentes, sin emrgo, se tiene poc informción cerc de los eneficios producidos por l tortill, es especil quell producid por nuevs tecnologís de nixtmlizción. 12
2. HIPÓTESIS Ls tortills de míz (Ze mys L.) elords con diferentes procesos tecnológicos deido su elevdo contenido de fir ofrecen un efecto protector contr ls complicciones de l dietes ocsionds por l hiperglucemi. 13
3. OBJETIVOS 3.1 Ojetivo generl Evlur el efecto protector ntidiético de tortills de míz elords con hrins de míz otenids con diferentes procesos tecnológicos. 3.2 Ojetivos específicos Determinr l concentrción de compuestos fenólicos y l cpcidd ntioxidnte de tortills elords con hrins de míz otenids medinte diferentes procesos tecnológicos. Evlur el efecto de diets suplementds con ls hrins de tortill sore los niveles de glucos en rts diétics. Determinr el efecto de ls diets suplementds con ls hrins de tortills sore el perfil lipídico y lterciones renles en rts diéticos. 14
4. METODOLOGÍA 4.1. Mteriles 4.1.1 Biológico Se empleron rts de l cep Wistr mcho provists por l empres RISMART S.A. de C.V. con un rngo de peso de 250 300 g. 4.1.2 Químico Rectivo de Folin de l mrc Sigm pr l cuntificción de compuestos fenólicos. Estreptozotocin (STZ) pr l inducción químic de dietes en rts de experimentción, de l mrc Sigm. Tirs rectivs mrc Roche pr l determinción de glucos snguíne. Kits de químic sec de l mrc Vitros pr l determinción de cretinin, glucos, ure en suero, kits de rectivos de l mrc Rndox pr l cuntificción de perfil lípidico. 4.1.3 Muestrs de experimentción Ls muestrs de nálisis empleds fueron hrins de míz otenids medinte tecnologí limpi ls cules fueron provists por l empres Sodif S.A de C.V, se denominron como TL-1 y TL-2, ls muestrs que se utilizron pr comprr fueron hrins de míz otenids por nixtmlizción trdicionl se denominron como NT-1 y NT-2. Ls cules se utilizron pr elorr tortills ls cules se dejron secr tempertur miente y posteriormente se molieron pr otener ls hrins. 4.2 Métodos 15
4.2.1 Crcterizción de ls tortills de míz 4.2.1.1 Otención del extrcto de compuesto fenólicos Se relizó un extrcción con 10 ml de metnol por cd grmo de tortill, protegido de l luz y en gitción durnte 24 h, posteriormente se centrifugo 5000 x g por 10 min tempertur miente, l sorendnte se le denomino extrcto de tortill de míz, este se le relizó l cuntificción de compuestos fenólicos totles, tninos condensdos, cpcidd ntioxidnte y flvonoides. 4.2.1.2 Compuestos fenólicos totles Se determinó utilizndo l técnic de Folin-Cioclteu (Singleton y col., 1999), que se s en l oxidción de los compuestos fenólicos por el rectivo de Folin- Cioclteu (mezcl de ácido fosfotungstico y ácido fosfomolídico) que l reducirse d un mezcl de óxidos zules de tungsteno y de molideno. L colorción zul producid sore 760 nm. Pr l cuntificción de fenoles totles, se tomó un lícuot de 20 μl del sorendnte del extrcto de tortill y se llevó un volumen finl de 250 μl, posteriormente se mezcló con 125 μl del rectivo de Folin-Cioclteu (1N) y después se dicionron 625 μl de N 2 CO 3 (20 %) y se dejron reposr en l oscuridd por 2 h tempertur miente. Después se leyó l sornci 760 nm en un espectrofotómetro. L cuntificción se s por interpolción en un curv estándr de ácido gálico (0 20 μg), y se expresron los resultdos como mg equivlentes de ácido gálico (AG) por grmo de hrin (mg equivlentes AG/g de hrin). 4.2.1.3 Cuntificción de tninos condensdos Se utilizo el método de l vinillin, descrito por Desphnde y Cheryn (1987), hciendo un dptción pr utilizr microplc. A un lícuot de 50 μl del sorendnte otenido del extrcto de hrins de míz se le grego 200 μl de un 16
solución (1:1) recién preprd de vinillin l 1% en metnol y HCl 8% en metnol. Al lnco se le dicionron 50 μl de metnol y 200 μl de HCl l 4 %. Pr cuntificr los tninos condensdos se determino l sornci 492 nm en un espectrofotómetro. Se utilizo un curv estándr de (+) ctequin (0-0.8 mg/ml) y los resultdos otenidos se expresron como mg equivlentes de (+) ctequin/g de hrin. 4.2.1.4 Cuntificción de flvonoides totles Pr llevr co l cuntificción se tomron 50 μl del extrcto de hrins de míz y se le dicionron 180 μl de metnol, posteriormente se dicionron 20 μl de un solución de 2-minoetildifenilorto l 1%, y se procedió leer l sornci 404 nm en un espectrofotómetro y los resultdos se expresron como mg equivlentes de rutin/g de hrin (Siddhurju y Becker, 2003). 4.2.1.5 Cuntificción de ntocinins Pr l determinción de ntocinins se relizó un extrcción diferente, pr l cul 0.5 g de hrin de cd tipo de tortill se le dicionron 4 ml de etnol cidificdo (85 ml de etnol l 95 % + 15 ml de HCl 1.0 N); se protegio de l luz y se mezclo durnte 2 min, después se justo el ph 1.0 con HCl. Posteriormente se gito durnte 30 min protegido de l luz, pr después centrifugr 10 000 x g por 20 min tempertur miente, y por último se otuvo el sorendnte. Un vez que el extrcto fue otenido se continuo con el método descrito por Adel- Al y Hucl (1999) con lguns modificciones de River-López (1998). Al sorendnte del extrcto de hrin de míz se llevo un volumen de 10 ml en un mtrz fordo usndo etnol cidificdo. Posteriormente se leyo l sornci en un espectrofotómetro 535 nm. El vlor de l sornci otenido se sustituyo en l siguiente fórmul: C = (A/ε) x (V/1000) x PM x (1/g de muestr) x 10 6 17
Los resultdos se expresron como mg equivlentes de cinidin 3- glucósido/kg de muestr. 4.2.1.6 Cpcidd ntioxidnte Se mezcló el rdicl ABTS 7 mm y persulfto de potsio 2.45 mm en gu, pr producir el rdicl ABTS. Posteriormente l solución concentrd de ABTS se diluyó con un uffer de fosftos slino (PBS), ph 7.4, hst otener un sornci finl de 0.7± 0.02 un longitud de ond de 734 nm. Después se dicionron 10 μl de muestr en 990 μl de l dilución de ABTS 734 nm y después de 6 minutos se midió l sornci l mism longitud de ond. L concentrción inhiitori medi (IC50), es un medid de utilidd pr estlecer l concentrción de un sustnci, que se requiere pr inhiir el 50 % del rdicl ABTS. 4.2.8 Evlución de l cpcidd ntioxidnte con el rectivo ABTS. L técnic descrit por Re y col. (1999) y Vn Den Berg y col. (1999). 4.2.2 Inducción de dietes con estreptozotocin L estreptozotocin (45 mg/kg) se prepró un solución mortigudor de citrto 0.1 mol/l, ph 4.5, est será dministrd por ví intrperitonl en un volumen de 1 ml/kg. Después de 48 96 h de l dministrción de estreptozotocin, ls rts que presentron un vlor de glucos de 200 300 mg/dl fueron ls utilizds pr llevr co el estudio. 4.2.3 Grupos de experimentción Pr l fse experimentl in vivo se formron 6 grupos de seis rts en cd uno; se utilizó como control rts diétics ls que no se les drá trtmiento; hrá un control con ls rts sns sin trtmiento. Diferentes grupos de rts diétics fueron limentdos con diets suplementds con ls diferentes hrins de míz l 15%: 1) NT-1, 2) NT-2, 3) TL-1 y 4) TL-2. Cd semn se determino los niveles de 18
peso corporl y glucos snguíne. Después de cutro semns los nimles se scrificrán. 4.2.3 Cuntificción de glucos snguíne en yuno El nivel de glucos (mg/dl) se cuntificó en sngre de l ven cudl de l rt, con un mínimo de 8 hors de yuno. Pr ello se emple un glucómetro de l mrc ROCHE, cuyo rngo de lectur es de 20-600 mg/dl de glucos y tirs rectivs de l mrc Accu-Check. 4.2.4 Análisis en orin Pr l otención de orin, los nimles fueron seprdos en juls individules en condiciones de yuno, por un lpso de 12 h. L orin se recolecto pr l detección de proteíns y cretinin. 4.2.5.1 Determinción de proteíns por el método de Lowry Pr determinr l concentrción de proteíns en orin se utilizó el método de Lowry (1951). 4.2.5.2 Determinción de cretinin en orin L determinción de este prámetro se relizó utilizndo un Kit enzimático de l mrc Rndox Lortories. L lectur se relizó con un espectrofotómetro mrc Bio-Rd modelo SMART SPEC TM. 4.2.5.3 Remnente de céluls et El porcentje remnente de céluls β (% FCβ), se estimo prtir de l glucos en yuns y los niveles de insulin sl prtiendo de l siguiente ecución: 19
% FCβ = 4.2.6 Análisis en plsm L sngre se otuvo medinte punción crdic y fue recolectd en tuos vcutiner Lil con nticogulnte y centrifugd por 15 min 3,500 rpm. 4.2.6.1 Perfil lipídico Se relizo un perfil lipídico que const de colesterol totl, HDL y triglicéridos medinte el uso de kits de químic clínic de l mrc Bio-Rd y se midio en un espectrofotómetro mrc Bio-Rd modelo SMART SPEC. L concentrción de LDL se clculo medinte l fórmul LDL=Colesterol totl menos HDL menos triglicéridos entre 5 (LDL = Col. Totl HDL TG/5) 4.2.6.2 Químic de 3 elementos Se relizo un perfil ioquímico de tres elementos en el cul vienen incluids ls prues de glucos, ure y cretinin, que sirven pr monitorer el dño ocsiondo por l hiperglucemi en órgnos como los riñones. Este perfil se cuntifico utilizndo kits de químic sec y se leerá en el lector Vitros Dt-60II 4.2.6.3 Cuntificción de insulin Se cuntificó medinte el uso de un kit de Elis en plc de l mrc Millipore. 4.2.7 Análisis estdístico Se relizó el nálisis de vrinz (ANOVA) con un nivel de confinz del 95%. Los resultdos otenidos fueron expresdos como l medi ± el error estándr (EE). L 20
evlución estdístic de los dtos se determinó utilizndo l prue de Tukey- Krmer con un vlor de α de 0.05. El nálisis de los dtos se relizó con el progrm estdístico JMP 10 versión Windows 7. 21
5. RESULTADOS 5.1 Crcterizción de compuestos fenólicos Se relizó l cuntificción de compuestos fenólicos totles, tninos condensdos, ntocinins y flvonoides pr determinr si ls tortills elords con diferentes procesos tecnológicos con respecto ls tortills comerciles son diferentes deido l proceso de nixtmlizción (Cudro 4). Cudro 4. Crcterizción de compuestos fenólicos de hrins de míz elords con diferentes procesos tecnológicos Prámetro NT-1 NT-2 TL-1 TL-2 Fenoles totles 1 36.10 ± 0.54 42.01 ± 1.04 46.25 ± 4.44 33.58 ± 0.84 Antocinins 2 3.13 ± 0.102 1.71 ± 0.101 2.93 ± 0.091 1.809 ± 0.13 Flvonoides 3 7.12 ± 0.919 3.64 ± 0.338 2.47 ± 0.35 3.69 ± 0.62 Tninos condensdos 4 Cpcidd ntioxidnte (IC 50 ) 5 50.18 ± 0.37 28.91 ± 11.3 35.71 ± 4.07 33.98 ± 4.3 28.30 ± 0.78 43.53 ± 1.6 34.23 ± 0.08 c 38.53 ±.51 Los vlores representn l medi ± E.E. Letrs diferentes indicn diferenci estdístic significtiv (p<0.05), evludo por l prue de Tukey-Krmer. 1 Expresdos en mg eq. ácido gálico/100 g de hrin 2 Expresdos en mg eq. cinidin 3-glucósido/kg de hrin 3 Expresdos en mg de (+)ctequin/g de hrin 4 Expresdos en mg eq. (+)ctequin/100 g 5 Expresdos como μg/ml por el método ABTS. Se oservó que l concentrción de compuestos fenólicos que presento l hrin de míz TL-1 fue más lt en comprción con l hrin TL-2 en un 27%, y 22
superior l hrin NT-1 y NT-2 en un 22% y 9% respectivmente (p<0.05). Con respecto l cuntificción de ntocinins, se oservó que l hrin NT-1 presentó un concentrción similr TL-1, mientrs que l hrin NT-2 es similr TL-2, siendo ests últims menores que ls primers hrins (p<0.05). Se oservó que l concentrción de tninos condensdos fue superior en ls tortills elords con NT-1 en un 42%, 29% y 32% respectivmente con respecto NT-2, TL-1 y TL-2. L cpcidd ntioxidnte se determinó utilizndo l concentrción medi pr inhiir el 50% del rdicl ABTS (IC 50 ). Ls tortills elords con l hrin de míz de l mrc NT-1 presentron un IC 50 de 28.30 ± 0.78 y este vlor fue menor comprdo con el otenido pr NT-2, TL-1 y TL-2 en un 1.5, 1.2 y 1.4 veces respectivmente, siendo NT-2 y TL-2 similres (p<0.05). 5.2 Efecto en los niveles de glucos en sngre por el consumo de tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos En l Figur 5 se oserv el efecto semnl del consumo de tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos en los niveles de glucos en sngre periféric de rts diétics. El dí cero represent el inicio del experimento y se oservó que hy diferenci significtiv del grupo control sno con respecto los demás grupos deido l dministrción previ de estreptozotocin. En l primer semn y se oserv un disminución de glucos en un 19% en el grupo de rts limentds con tortills NT-1 y TL-2 en l segund semn el grupo limentdo con NT-1 disminuyó lo niveles de glucos en un 46%. Sin emrgo, pr l tercer semn se oservo que este mismo grupo tuvo un disminución sólo del 20%, pero est no fue significtiv. 23
Glucos [mg/dl] 550 450 350 250 150 50-50 0 1 2 3 Tiempo (semns) Control Sno Control Diético NT-1 NT-2 TL-1 TL-1 Figur 5. Efecto del consumo de tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos sore los niveles de glucos de rts diétics. Los vlores representn l medi ± E.E. Letrs diferentes indicn diferenci estdístic significtiv (p<0.05), evludo por l prue de Tukey-Krmer. Después del scrificio de los nimles de experimentción se utilizo sngre extríd medinte punción crdic y se midió l concentrción de glucos en plsm utilizndo un kit enzimático. Se oservó que los niveles de glucos del grupo control diético (360.75± 37.28 mg/dl) y control sno (96.5 ± 8.70 mg/dl) fueron estdísticmente diferentes, por otro ldo el grupo limentdo con tortills de hrin de míz de NT-1 tuvo un decremento del 35.7%, el grupo NT-2 mostro un disminución del 22.4%, los grupos de hrin elords con otro proceso tecnológico TL-1 y TL-2 pesr de no tener un decremento significtivo mostrron un disminución del 15.9% y 6.8% respectivmente (p<0.05) (Figur 6). 24
mg/dl 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0 Figur 6. Efecto del consumo de tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos sore l glucos plsmátic de rts Wistr diétics después de cutro semns de trtmiento. Los vlores representn l medi de l concentrción de glucos en plsm ± E.E. Letrs diferentes indicn diferenci estdístic significtiv (p<0.05), evludo por l prue de Tukey-Krmer. 5.3 Efecto en los niveles de insulin en plsm por el consumo de tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos Se oserv en el Cudro 5 los niveles de insulin plsmátic en rts Wistr diétics después del trtmiento con diferentes tortills de míz, donde el grupo control diético tuvo un concentrción de 1.42 ± 0.093 ng/dl lo que represent un decremento de 2.8 veces respecto l control sno que tuvo un concentrción 4.01 ± 0.20 ng/dl, solmente el grupo limentdo con tortills de hrin de míz NT-1 muestr diferenci significtiv donde se oservó un incremento respecto l grupo control diético de un 8% (p<0.05). Los grupos restntes del trtmiento no tuvieron diferenci significtiv con respecto l grupo control diético, el grupo limentdo con tortills de NT-2 tuvo un incremento del 16.20% y los grupos 25
limentdos con tortills de ls hrins TL-1 y TL-2 tuvieron un incremento del 8.5% y 6.3% respectivmente (p<0.05). Cudro 5. Concentrción de insulin en plsm de rts diétics limentds con tortills elords con diferentes procesos tecnológicos Grupo Insulin (ng/dl) Control sno 4.01 ± 0.20 Control diético NT-1 NT-2 TL-1 1.42 ± 0.093 1.72 ± 0.041 1.65 ± 0.058 1.54 ± 0.040 TL-2 1.51 ± 0.059 Los vlores se presentn como l medi de l concentrción en plsm ± E.E Vlores con diferentes letrs en l mism column indicn diferenci significtiv (p<0.05). Prue de Tukey-Krmer. Respecto l porcentje remnente de céluls et (%FCβ) que hce referenci ls céluls funcionles et pncreátics, se oservó un porcentje funcionl en el grupo control sno de un 80.3% que es estdísticmente diferente en comprción con el grupo control diético que solo represent un 3.4% (p<0.05). A pesr de que no hy diferenci significtiv por prte de los otros grupos con respecto l control diético, el grupo de tortills de NT-1 mostrron un porcentje del 6%, el grupo de hrin TL-1 presentó un 3.8% respecto l control diético. Por otro ldo, los grupos de hrin NT-2 y TL-2 tuvieron un porcentje de 3.14% y 1.6% de céluls funcionles respectivmente (Figur 7). 26
% FCβ 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Control sno Control diético NT-1 NT-2 TL-1 TL-2 Figur 7. Efecto del consumo de tortills elords con diferentes procesos tecnologicos sore el porcentje remnente de celuls β (%FCβ) de rts diétics. Los vlores representn l medi ± E.E. Letrs diferentes indicn diferenci estdístic significtiv (p<0.05), evludo por l prue de Tukey-Krmer. 5.4 Efecto en el consumo semnl de gu y limento por el consumo de tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos Al inicio del trtmiento se puede oservr que prtir de l primer semn el grupo control diético mostró un incremento en el consumo de limento con respecto l grupo control sno tendenci que se mntiene lo lrgo del estudio. El grupo limentdo con diet suplemented con tortill de NT-1 en l primer semn tuvo un umento con respecto l control diético del 9.8% pero pr l segund y tercer semn tiene un decremento del 15%. El grupo NT-2 tuvo en incremento en l primer semn del 10.9% con respecto l control diético pero ls siguientes semns no tiene diferenci significtiv respecto l control diético. Los grupos limentdos con ls hrins TL-1 y TL-2 no mostrron ningún efecto (Figur 8). 27
Agu (ml) Alimento (g) () 60 50 40 30 20 10 0 1 2 3 Tiempo (semns) Control sno Control diético NT-1 NT-2 TL-1 TL-2 350 300 250 200 150 c c d c c 100 50 0 1 2 3 Tiempo (semns) Figur 8. Efecto del consumo de tortills elords con diferentes procesos tecnologicos sore el consumo semnl de limento () y gu () en rts Wistr diétics. Control sno Control diético NT-1 NT-2 TL-1 TL-2 Los vlores representn l medi ± E.E. Letrs diferentes indicn diferenci estdístic significtiv (p<0.05), evludo por l prue de Tukey-Krmer. () 28
Respecto l consumo de gu, en l primer semn se oservó que hy un incremento significtivo del control diético frente l grupo sno tendenci que se mntiene hst l tercer semn (p<0.05). Pr l segund semn el grupo limentdo con tortills NT-1 muestr un decremento significtivo del 28.2% respecto l control diético, efecto mntenido en l tercer semn donde present un decremento del 32.4%. El grupo limentdo con tortills de TL-1 muestr un disminución desde l primer semn con respecto l control diético mism que se mntiene hst l tercer semn donde se oservo un decremento del 27.8%. Los grupos limentdos con tortills de NT-2 y TL-2 fueron los grupos que presentron menor disminución en el consumo de gu mnteniendo un decremento proximdo del 10% lo lrgo del estudio (p<0.05) (Figur 8). 5.5 Efecto en el peso reltivo de los riñones por el consumo de tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos L concentrción lt de glucos en sngre provoc un exceso de filtrción y resorción en los riñones ocsionndo hipertrofi renl que ve reflejdo en el tmño de los riñones, el peso reltivo de los riñones es un índice de dño renl cusdos por hiperglucemi. En l Figur 9 se muestr el peso reltivo de los riñones (peso del riñón entre el peso del niml) oservndo que el promedio del peso reltivo de los riñones del grupo control diético es myor en un 32% respecto l promedio del peso reltivo de los riñones oservdo en el grupo control sno. Los grupos limentdos con tortills de NT-1 y NT-2 tuvieron un incremento en el peso reltivo respecto l control diético en un 7.7% y 5% respectivmente. Por otro ldo los grupos limentdos con ls tortills elords con TL-1 y TL-2 mostrron un peso reltivo similr l control diético. 29
Peso reltivo 0,014 0,012 0,01 0,008 0,006 0,004 0,002 0 Control sno Control diético NT-1 NT-2 TL-1 TL-2 Figur 9. Peso reltivo de los riñones como indicdor de dño renl en rts Wistr limentds con un diet suplementds con hrins de tortills elords con diferentes procesos tecnológicos. Los vlores representn l medi del peso reltivo de los riñones ± E.E. Letrs diferentes indicn diferenci estdístic significtiv (p<0.05), evludo por l prue de Tukey-Krmer. 5.6 Efecto del consumo de tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos sore los niveles de ure y cretinin de rts diétics Trs el scrificio de los nimles de experimentción se midió en el plsm extrído por punción crdic los niveles de ure y cretinin. En l Figur 10 se puede oservr que el grupo control diético mostró un myor concentrción de cretinin respecto l control sno en un 10.7%, efecto similr se oserv en l Figur 10 donde l concentrción de ure tuvo un incremento del 58%. El grupo NT-1 mostró niveles menores de cretinin en plsm en un 6.6% y sus niveles de ure en un 21.1%. El grupo limentdo con tortills de NT-2 tmién disminuyo sus niveles de cretinin en un 4.3%, sí como, sus niveles de ure en un 19.6% respecto l control diético (p<0.05). Los niveles oservdos en el grupo TL-1 muestr un decremento tnto en cretinin como en ure de 4.6% y 17.5% respectivmente. El grupo TL-2 tmién tuvo un ligero decremento pr cretinin 30
mg/dl mg/dl de 4%, sin emrgo no tuvo diferenci en sus niveles de ure respecto l control diético (Figur 10). 0,8 0,78 0,76 0,74 0,72 0,7 0,68 0,66 0,64 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 * ) ) Figur 10. Efecto del consumo de tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos sore los niveles plsmáticos de cretinin () y ure () de rts diétics. Los vlores representn l medi de l concentrción en plsm ± E.E. ls letrs diferentes indicn diferenci estdístic significtiv (p<0.05), evludo por l prue de Tukey-Krmer. En l Figur 11 se oservn los vlores de cretinin en orin de los nimles en trtmiento. El grupo control diético presentó concentrciones menores de cretinin hst 4.5 veces respecto l control sno, por otro ldo los grupos de experimentción no tuvieron diferenci significtiv respecto l grupo control diético, unque el grupo TL-1 presento el myor incremento respecto l control diético duplicndo su concentrción (p<0.05). L concentrción de proteín en orin muestr l grupo control diético con un concentrción 2.4 veces myor l control sno. El grupo limentdo con tortills de NT-1 tuvo un decremento en un 20% respecto l grupo control diético. Los otros grupos del experimento disminuyeron los niveles de proteín de mner similr, sin presentr diferenci significtiv respecto l grupo control diético (p<0.05) (Figur 12). 31
mg/dl mg/dl 120 3 100 80 2,5 2 60 40 20 1,5 1 0,5 0 0 ) ) Figur 11. Efecto del consumo de tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos sore los niveles en orin de cretinin () y proteíns () de rts diétics. Los vlores representn l medi de l concentrción en orin ± E.E. Letrs diferentes indicn diferenci estdístic significtiv (p<0.05), evludo por l prue de Tukey-Krmer. * 5.7 Efecto en los niveles perfil lipídico por el consumo de tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos L Figur 12 muestr los niveles del perfil lipídico en plsm de los diferentes grupos del trtmiento, donde se puede oservr que los nimles del control diético presentron myor concentrción de colesterol totl, LDL y triglicéridos, respecto l control sno (p<0.05). El grupo NT-1 tuvo un decremento en colesterol totl respecto l control diético en un 7.5%, NT-2 en un 11.3%, TL-1 en un 14.6% y TL-2 en un 7% (p<0.05). Los niveles de HDL en plsm se elevron en los trtmientos con respecto l control diético (p<0.05), donde el grupo limentdo con TL-1 mostró el myor umento con un 43.15%. Los grupos NT-1 y TL-2 mostrron un comportmiento 32
mg/dl similr con un umento del 28.8% y 37.8%, el grupo NT-2 presento el menor umento con un 15.7% (p<0.05). Se puede oservr un disminución de los niveles de colesterol LDL por prte de los grupos del trtmiento, donde el grupo control diético presento un umento en comprción con los grupos limentdos con tortills NT-1, NT-2, TL-1 y TL-2 de 1.42, 1.33, 1.98 y 1.5 veces respectivmente (p<0.05). Respecto los niveles de triglicéridos, se oserv un decremento por prte de los grupos de estudio respecto l grupo control diético, donde los grupos limentdos con tortills TL-1 y TL-2 mostrron un decremento del 32% y 25.8% respectivmente. Por su prte los grupos limentdos con tortills NT-1 y NT-2 tuvieron un disminución menor con 19.3% y 17% (p<0.05). 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Control sno Control diético NT-1 NT-2 TL-1 TL-2 Figur 12. Perfil lipídico de los grupos diéticos trtdos con tortills de míz elords con diferentes procesos tecnológicos. Los vlores representn l medi de l concentrción en plsm ± E.E. Letrs diferentes indicn diferenci estdístic significtiv (p<0.05), evludo por l prue de Tukey-Krmer. 33
6. DISCUSIÓN En el grno del míz se h se hn identificdo diversos compuesto fenólicos que se hn relciondo con ls propieddes que pueden otorgr con eneficio l slud como ls propieddes ntioxidntes, ntiinflmtoris que yudn prevenir el riesgo de pdecer enfermeddes crónico-degenertivs (Sclert y col., 2005; Escmill- Jiménez y col., 2009). No hy much iliogrfí reportd sore l crcterizción de compuestos fenólicos en tortills de míz, sin emrgo, los resultdos otenidos en el presente estudio se pueden comprr con los reportdos por Guerrero-Villnuev y col. (2012) donde evluron tortills de diferentes tipos de míz (Ze mys L.) reportndo un concentrción pr fenoles totles de 16.6 ± 1.8 mg ácido gálico/100 g de hrin de tortill, 3.1-7.0 mg eq. (+)ctequin/g de hrin pr flvonoides y un concentrción pr ntocinins de 18.3-64.1 mg de cinidin 3-glucosid/kg muestr. Otros estudios relizdos por Prr y col. (2007), evluron l concentrción de compuestos fenólicos y ntocinins en hrin, tortills y friturs de diferentes especies de míz oteniendo concentrciones de 30.5-51.1 mg ácido gálico/100 g de hrin de tortill pr los compuestos fenólicos lires y respecto ntocinnis un concentrción de 0.29-3.81 mg de cinidin 3-glucoside/100 g muestr. Como se oserv en el cudro 4 l hrin de tortills de NT-1 presentó l myor concentrción de compuestos fenólicos que pueden ser responsles de los efectos protectores que ofreció los grupos de rts diétics. Los resultdos nteriores son de grn importnci en eneficio l slud deido que estos compuestos presentn cpcidd ntioxidnte.. Los niveles de glucos otenidos en sngre periféric. Se puede oservr en l tercer semn de trtmiento que los grupos no presentn decremento respecto l control diético (Figur 5) sin emrgo en l concentrción en plsmátic se oserv decremento por los grupos NT-1, NT-2 y TL-1. Se h reportdo que los niveles de glucos pueden vrir en función l método utilizdo pr l 34
cuntificción, sí como, el origen de l tom de muestr. De est mner en l figur 6 se puede oservr un resultdo más clro cerc de los niveles de glucos séric otenid del corzón y cuntificd medinte un kit enzimático, en l cul, el grupo trtdo con míces elordos con tortill NT-1 y NT-2 presentron un disminución ms importnte de glucos respecto l control diético. El efecto hipogluceminte oservdo en los grupos del estudio puede ser ocsiondo por los compuestos fenólicos que hn demostrdo tener un efecto hipogluceminte. (Ludwing y col., 1999; Kendll y col., 2008; Mio y col., 2008). L insulin tiene un ppel importnte en l utilizción de glucos; estimul l formción de glucógeno l inducir l ví metólic de l glucogénesis por cción sore l enzim glucógeno sintets, inhie l gluconeogénesis y promueve el umento del trnsporte de glucos en los tejidos periféricos, como músculos y dipocitos (Flores y col., 2005). En el cudro 5 se oserv que todos los grupos del estudio no presentron un efecto sore l concentrción de insulin y los vlores descritos en l Figur 7 muestrn que los distintos grupos diéticos presentron un porcentje muy jo de céluls β pncreátics funcionles (%FCβ), en comprción con el grupo control sno, lo que indic que hy un severo dño en los nimles de experimentción deido que l estreptozotocin con l que se induce dietes destruye ls céluls et del páncres provocndo un descenso en l producción de insulin. Por lo tnto, el efecto sore l disminución de l concentrción de glucos no está relciondo con un myor secreción de insulin y por lo tnto con ningun protección sore ls céluls β pncreátics. Se h reportdo que lgunos compuestos fenólicos son cpces de incrementr el trnsporte de glucos céluls dependientes de insulin como los dipocitos y l músculo, entre dichos compuestos se encuentrn ls procinidins y el cido gálico que ejercen un efecto similr l insulin estimulndo l cptción de glucos. En los dipocitos ctún movilizndo l trnslocción l memrn plsmátic y posterior ctivción de GLUT-4. (Nowoot y col., 2012). 35
L sed excesiv es un síntom crcterístico en l dietes, y que un mner de eliminr l glucos en sngre es medinte l orin. Lo que ocsion un lto consumo de gu por los nimles con dietes (Federción Mexicn de Dietes, 2003). Los resultdos representdos de l Figur 8 muestrn que el grupo que se limentó con tortills NT-1 disminuyó su consumo de gu, esto podrí estr relciondo con su efecto hipogluceminte. El peso reltivo de los riñones es un índice que se utiliz pr nlizr un posile dño renl deido l hipertrofi cusd por l excesiv resorción tuulr (Spomek y col., 2006; Zffr y Hssn, 2010). Los resultdos otenidos en el experimento sore el peso reltivo de los riñones de los nimles en trtmiento no mostrron ningun protección l comprrlos con el control diético (Figur 9). Un perfil muy utilizdo pr evlur l función renl es l químic snguíne de 3 elementos que se compone por glucos, cretinin y ure, en plsm o suero (Spomek y col., 2006). De mner norml l glucos que se filtr en el riñón se resore l sngre en su totlidd pero si se present un exceso de glucos, se excede el límite de resorción, lo que nos llev un estdo de hiperglucemi cusndo dño renl y lterndo el equilirio renl donde ument l filtrción glomerulr disminuyendo l concentrción de cretinin en orin ocsionndo niveles séricos ltos de cretinin y ure (Bzri, 2007). En l Figur 10 se oservó que los grupos limentdos con ls tortills de NT-1 tuvo un ligero decremento sore los niveles de cretinin en suero sin llegr ser significtiv respecto l control diético. Los niveles de proteín en orin, sí como, los niveles de cretinin son prámetros utilizdos pr dignosticr el dño renl. En l Figur 10 se muestr l concentrción de cretinin y proteín en orin de 12 hors, donde ningún grupos mostró cmios importntes respecto l control diético. Por lo tnto, los compuestos ioctivos presentes en l tortill, ni el efecto hipogluceminte fueron suficientes pr mejorr l lterción renl. 36