CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN

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Trinidad Pinto Espejo
hace 8 años
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1 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN Presencia de maíz MG en productos alimenticios de diversa procedencia Servicio de Biotecnología Josefina Gangoso Herreras

2 Maíces MG autorizados UE 12 eventos individuales 17 eventos apilados Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

3 Ampliación n alcance acreditación Implantación n sistema identificación n de maíz MG rápido r y sencillo Alcance Flexible: Detección e identificación de OMGsautorizados en la UE para su utilización como alimentos y piensos, mediante PCR en tiempo real Norma UNE-EN ISO/IEC 17025:2005 (CGA-ENAC-LEC) y NT18 de ENAC Estudio presencia maíz z MG en productos diversa procedencia Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

piensos, mediante PCR en tiempo real Norma UNE-EN ISO/IEC 17025:2005 (CGA-ENAC-LEC) y NT18 de ENAC Estudio

4 1.- Sistema de detección n e identificación n de maíz z MG Detección n e identificación n de todos los eventos de maíz z MG autorizados en la UE PCR en tiempo real Secuencias evento especifico de los métodos m validados por el EURL-GMFF Unificación n de las condiciones de reacción Modificación n de las condiciones de reacción n de cada método evento específico para unificar los métodosm Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

EURL-GMFF Unificación n de las condiciones de reacción Modificación n de las condiciones de reacción n de cada

5 1.- Sistema de detección n e identificación n de maíz z MG Especificidad No necesaria al utilizar métodos m del EURL Determinar el Límite L de detección MRC preparados al LD ( 0,025 %) Procedimiento: 3 extracciones independientes: distintos días d y preparación Tres ensayos independientes (10 réplicas r por ensayo) Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

Procedimiento: 3 extracciones independientes: distintos días d y preparación Tres ensayos

6 1.- Sistema de detección n e identificación n de maíz z MG COMPONENTE [ ] INICIAL [ ] FINAL µl/reacción TaqMan Universal (BioRad) 12,5 Primer F 20µM 250nM 0,312 Primer R 20µM 250nM 0,312 Sonda 10µM 150nM 0,375 Agua libre de nucleasas 6,5 ADN 5 Volumen Total 25 Condiciones de reacción detección n e identificación de maíz z MG ETAPA Tª (ºC) TIEMPO (s) Nº de CICLOS 1* UNG DESNATURALIZACIÓN AMPLIFICACIÓN EXTENSIÓN Condiciones programa * UNG: sólo caso MásterMix amperasa Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

detección n e identificación de maíz z MG ETAPA Tª (ºC) TIEMPO (s) Nº de CICLOS 1* UNG 50 120 2 DESNATURALIZACIÓN 95 600 1 3 AMPLIFICACIÓN 95 15

7 1.- Sistema de detección n e identificación n de maíz z MG : VALIDACIÓN LD: 0,025 % (IC >95 %) Probabilidad detección Criterio control de calidad : Ct medio (obtenido en la validación) ± 3 SD Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

control de calidad : Ct medio (obtenido en la validación) ± 3 SD

8 1.- Adquisición de muestras en el mercado Estudio presencia maíz MG en productos de diversa procedencia 2.- Análisis Extracción Screening PCR tiempo final Detección n cualitativa evento específico PRC tiempo real Cuantificación n PCR tiempo real Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

- Análisis Extracción Screening PCR tiempo final Detección n cualitativa evento

9 Muestras seleccionadas España 21 muestras Presentes en el mercado español de diversa procedencia Otros EEMM Estados Unidos Sudamérica Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

10 Procedencia de las muestras 15 % 28 % 9 % 48 % España Otros EEMM Estados Unidos Sudamérica Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

11 Tipos de muestras analizadas Snacks / aperitivos Tortitas / nachos Cereales / galletas Harinas Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

12 Bt11 DAS TC0715 Bt176 Ga21 MIR 162 MAÍZ Z MG MON 810 MIR 604 MON 863 MON NK 603 MON T25 Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

NK 603 MON 88017 T25 Jornadas de Referencia

13 Análisis Extracción Screening PCR tiempo final Detección n cualitativa evento específico PRC tiempo real Cuantificación n PCR tiempo real Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

real Cuantificación n PCR tiempo real Jornadas de

14 Extracción: rendimiento Método CTAB Productos Concentración (ng/µl) Pureza (A260/A280) Snacks / aperitivos 20 1,75 Cereales / galletas 25 1,60 Tortitas / nachos 50 1,65 Harinas 55 1,85 Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

/ galletas 25 1,60 Tortitas / nachos 50 1,65 Harinas 55 1,85

15 Rendimiento de la extracción: Almidón de maíz CTAB Method for the extraction of DNA from maize starch * No cumplen los criterios de calidad y pureza Concentración y pureza adecuadas WaiblingerH. 2012, In houseandinterlaboratoryvalidationofa methodfortheextractionofdna frommaizestarch, Journal of Consumer Protection and Food Safety Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

2012, In houseandinterlaboratoryvalidationofa methodfortheextractionofdna frommaizestarch, Journal

16 Screening: PCR tiempo final Evento 35S NOS 34S Bt 11 X X DAS TC1507 X X Ga21 X MON810 X MON863 X X NK 603 X X T 25 X MON X X MON X X X MIR 604 X MIR 162 X X Bt 176 X Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

X MON 88017 X X MON 89034 X X X MIR 604 X MIR 162 X X Bt 176 X

17 Resultados screening PCR cualitativa tiempo final Muestra IVR 35S NOS 34S Snack maíz + + ND ND Harina maíz Polenta ND Harina de maíz Snak horneado Harina de maíz + + ND ND Canjica maíz Harina maíz + ND + ND Nachos de maíz ND Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

+ + + + Harina de maíz + + ND ND Canjica maíz + + + + Harina maíz + ND + ND Nachos

18 Detección n e identificación de los distintos eventos de maíz z MG Centro PCR tiempo real Control calidad interno: Materiales Referencia Certificados (IRMM( IRMM,, AOCS) Preparados al LD 0,025 % MR preparado a 0.05 % Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

Certificados (IRMM( IRMM,, AOCS) Preparados al LD 0,025 % MR preparado

19 Muestra positiva: Detección de señal de amplificación por debajo del ciclo 40 Criterio control positivo: Ct validación ± 3SD Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

20 Resultados PCR cualitativa a tiempo real Bt11 DAS TC 1507 Ga21 MON 810 MON 863 T25 NK 603 MON MON MIR 604 MIR 162 Bt 176 Snack + Harina Polenta Harina Snack Harina + Canjica Harina + Nachos Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio junio

+ + + + + Harina + + + + + + + + + + Snack + + + + + Harina + Canjica + + + Harina +

21 PROCEDENCIA MUESTRAS POSITIVAS % ESPAÑA OTROS EEMM EEUU SUDAMERICA Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

22 Conclusiones 1.-Se ha detectado la presencia de maíz MG en 9 de las 21 muestra analizadas, que corresponde a un 43 % del total. 2.-La mayoría de las muestras positivas, procedían de sudamérica(67 %). De las 3 muestras procedentes de EEUU, se detectómaíz MG en 1 de ellas, etiquetada como NO GMO. 3.-De todas las muestras analizadas solamente una estaba etiquetadacomo contiene OMG. A la vista de los resultados obtenidos hasta el momento se podría pensar que varias muestras no cumplían los requisitos de etiquetado. 4.-Ante la aparición de diferentes eventos MG en una misma muestra, pensamos que podría deberse a la presencia de algún evento apilado. Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

23 MUCHAS GRACIAS. Servicio de Biotecnología Mª Isabel Prieto Santos Josefina Gangoso Herreras Silvia Gil Alcalde Mª Luisa Salvador Pulgar Esther Rico Cañada ada Miriam Gómez G Martín Mª del Camino Martín n Forero Mercedes Fernández ndez de la Puebla Mª Isabel Rodríguez PérezP Jornadas de Referencia Análisis de alimentos. Centro, junio

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