Genómica comparativa de genes implicados en la Enfermedad de Parkinson. Ignacio Marín Instituto de Biomedicina de Valencia CSIC
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- Adolfo Sáez Benítez
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1 Genómica comparativa de genes implicados en la Enfermedad de Parkinson Ignacio Marín Instituto de Biomedicina de Valencia CSIC
2 Genómica comparativa Deriva de un campo clásico: evolución n molecular Todo aquello que no se puede conocer mediante el análisis de genes o genomas aislados Sensu stricto: : Comparación n de genomas Extracción n de información n detallada sobre familias génicas, genes, productos génicosg nicos basada en la comparación n de genomas Contexto en esta charla
3 Para qué sirve: algunas ideas Definición n de organismos modelo que posean genes ortólogos al que nos interesa Predicción n de funciones de genes o productos génicos, mediante comparación n con datos de otras especies Predicción n del efecto de mutaciones: mediante comparación n de secuencias en diversas especies, modelado tridimensional basado en datos de otras especies, etc.
4 Estrategias de análisis Se precisan procedimientos capaces de: manipular y ordenar grandes cantidades de información proporcionar una visión n integrada de la información Algunos ejemplos
5 AB062092h : NM_ : AC018928c : AB073163a : AC006918b : AB073156d : AB046433c : AF296829a : AL161509c : AF262042d : AB046433e : AF296826b : AB046435b : AB073166e : AB : AB073155d : AC : AC079028a : AF296828a : NM_ : AB046430a : AB046426b : AC069329a : AF296827a : AB046429a : NM_ : AB046428c : AB046428b : AC011621b : AB046428e : AC011621e : AB046428d : AC063973a : AB046436a : AF147259c : NM_ : AL161507a : AC069554a : AB046425a : AC069552a : AC006250a : NM_ : AC007197a : AC007918b : AB073158c : AB073157a : AC018660c : AC019012b : AL391731b : AL138643a : AC083859f : AB062092g : AB046430b : AF296827b : AC063973i : AB046436h : NM_ : AC020646a : AB062087b : AB062087a : AB046426a : AB024037a : AF104920a : AL161504d : AF147261b : AB073158b : AC069555a : AB073157b : AB073166d : AC004483b : AC006250c : AF272705b : AB : NM_ : AC006446a : AC006446b : AF : AC006446c : AC : 80 * 100 * 120 * 140 DAQEQPNNIGASDFPHNHNQRHG-IVPPPVQNNNFEIKSSLIAMVQGNKFH----GLPMEDPLDHLDEFE 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: 101 : 100 : 100 : - : - : 67 : 82 : 99 : 66 : 66 : 66 : 66 : 66 : 66 : - : 66 Comparación de secuencias Relativamente estandarizada Pueden analizarse miles de secuencias Conservación/cambio aminoácidico Similitud (cualitativa) entre secuencias
6 Análisis filogenético Relativamente estandarizado (si N < 500) Diversos métodos Similitud entre secuencias Relaciones ortología/paralogía
7 Análisis estructural: dominios proteicos En general, sencillo Favorecido por la existencia de excelentes bases de datos específicas Similitud estructural Deducción de funciones
8 Análisis estructural: modelización de estructuras 3D (entre especies) Puede ser posible o no Bases de datos específicas Conservación de funciones, efecto de mutaciones, etc.
9 Análisis comparativo de patrones de interacción proteína-proteína Métodos en desarrollo Bases de datos específicas Restringido a algunas especies Fiabilidad de datos obtenidos a partir de análisis masivos: 50 70% Función de proteínas, estructura funcional de la célula completa
10 Análisis comparativo de patrones de expresión En proceso de estandarización Complicaciones serias en el tratamiento de los datos: ruido, problemas estadísticos asociados a muchos datos/hipótesis, etc. Asignación de funciones mediante correlación de la expresión, módulos funcionales,
11 Pipelines Se deben organizar las diversas herramientas para llevar a cabo análisis estandarizados con un fin definido Pipeline Función : : caracterización n de funciones en un contexto evolutivo INTEGRACIÓN Selección n de secuencias: BLASTP, TBLASTN, Alineamiento de secuencias: CLUSTALX, Muscle, T-CoffeeT Coffee Visualización n alineamientos: GeneDoc Análisis filogenéticos: MEGA4, PHYML, PAUP Estructuras (dominios, secundarias, 3D): InterProScan, Swiss-Model, SwissPDBViewer Interactoma (análisis, visualización): UVCLUSTER, TreeTracker, Pajek Expresión n (análisis, visualización): Cluster, TreeView
12 Ejemplo MEGA PHYML PAUP
13 Ejemplo MEGA PHYML PAUP
14 Ejemplo: genes implicados en la enfermedad de Parkinson Segunda más m s frecuente enfermedad neurodegenerativa Significativa influencia genética en la probabilidad de sufrir Parkinson esporádico Casos infrecuentes de Parkinson familiar asociados a mutaciones en genes concretos
15 Genes implicados en la enfermedad de Parkinson Gen SNCA (PARK1) Cromosoma Herencia Características fenotípicas C. de Lewy 4q21 Aut. Domin. Temprano, demencia SI Parkin (PARK2) 6q25 Aut. Reces. Parkinson juvenil NO (si) PARK3 2p13 Aut. Domin. Tardío, Demencia SI UCHL1 (PARK5) 4p14 Aut. Domin. (?) Tardío? PINK1 (PARK6) 1p35-36 Aut. Reces. Temprano? DJ-1 (PARK7) 1p36 Aut. Reces. Temprano? LRRK2 (PARK8) 12p11.2-q13.1 Aut. Domin. [esporádico] NO/SI ATP13A2 ((PARK9) 1p36 Aut. Reces. Kufor-Rakeb? PARK10 1p32 Aut. Reces. (?) Tardío? PARK 11 2q36-37 Aut. Domin. -? HTRA2 (PARK13) 2p12 Influye en susceptibilidad Parkinson esporádico NR4A2/NURR1 2q22-23 Aut. Domin. Tardío? MAPT 17q21 Influye en susceptibilidad Parkinson esporádico
![PINK1 (PARK6) 1p35-36 Aut. Reces. Temprano? DJ-1 (PARK7) 1p36 Aut. Reces. Temprano? LRRK2 (PARK8) 12p11.2-q13.1 Aut. Domin. [esporádico] NO/SI ATP13A2 ((PARK9) 1p36 Aut. Reces. Kufor-Rakeb?](/docs-images/47/1188502/images/page_15.jpg "PARK10 1p32 Aut. Reces. (?) Tardío? PARK 11 2q36-37 Aut. Domin. -? HTRA2 (PARK13) 2p12 Influye en susceptibilidad Parkinson esporádico NR4A2/NURR1 2q22-23 Aut. Domin. Tardío? MAPT 17q21 Influye en susceptibilidad Parkinson esporádico")
16 Los papeles de las proteínas codificadas por los genes implicados en Parkinson son muy poco claros Regulación del metabolismo proteico? Respuesta al estrés oxidativo? Los datos comparativos pueden ayudar a comprender sus funciones
17 TIPICO EJEMPLO DE INTEGRACIÓN Los hallazgos de partida (ca. 1999): Parkin: : nuevo gen implicado en Parkinson familiar La proteína Parkin humana posee unas regiones características, ricas en Cys, His FUNCIÓN? N?
18 Muchas proteínas relativamente parecidas a Parkin en diversos organismos BLAST con Parkin Similitud significativa pero escasa Parece circunscribirse a varias regiones concretas Cómo se interpreta?
19 Se detecta un dominio llamado IBR Una proteína con un único dominio! (totalmente falso, tiene 4)
20 Más s análisis automatizados de estructuras: resultados ambiguos Sin análisis comparativos no estamos yendo a ninguna parte
21 Análisis comparativos: primera parte Tomar todas las secuencias relacionadas con Parkin obtenidas con análisis tipo BLAST Alinear con ClustalX Visualizar regularidades con un editor de secuencias (GeneDoc) Análisis filogenéticos (ClustalX, Mega)
22 Tienen extensos patrones de His, Cys conservadas, muy característicos C C C H C C etc
23 El patrón n de aminoácidos conservados evolutivamente muestra que IBR es parte de un supradominio RING FINGER IBR RING FINGER C 3 HC 4 C 6 HC C 3 HC 4 Esta característica estructura sólo existe en estas proteínas: FAMILIA RBR
24 Comparaciones y árboles: Parkin es metazoo-espec específica Hay ortólogos de Parkin en vertebrados Drosophila C. elegans, etc. Posibles organismos modelo (confirmado)
25 De vuelta a PUBMED, qué es un RING FINGER?: posible implicación n en ubicuitinación
26 Nuevos datos sobre genes de la familia HHARI es un parálogo de Parkin y funciona como ubicuitín-ligasa Posible función bioquímica de Parkin CONFIRMADO!
27 Nuevas cuestiones a resolver Cuestión n 1: pueden ser todas las RBR ubicuitín n ligasas? Cuestión n 2: cuáles son sus funciones celulares?
28 Respuesta cuestión 1: Probablemente, puesto que Parkin y HHARI están muy alejadas evolutivamente Parkin HHARI Confirmado posteriormente en múltiples trabajos
29 Cuestión n 2: Funciones celulares ESTRUCTURAS RBR Alto nivel de variación Muchos dominios proteicos distintos Algunas proteínas son enormes y complejas Hay que profundizar: nuevos análisis comparativos
30 Sorpresa: genes producto de duplicación n + fusión Dominio RBR Dominio Cullin
31 PARC and CUL7 PARC (KIAA0708) CUL7 (KIAA0076)
32 Qué es una Cullin? FORMAN PARTE DE COMPLEJOS UBICUITÍN- LIGASA JUNTO A PROTEÍNAS CON RING FINGERS Pueden ser las RBRs parte de estos complejos?
33 Predicción n basada en datos comparativos Las proteínas RBR pueden funcionar como ubicuitín-ligasas en complejos cullin/ring Posteriormente confirmado para Parkin y otras RBRs
34 Podemos profundizar más? m Analizar todos los datos en conjunto Grafos de dominios proteicos IDEA: Convertir toda la información n de dominios en una estructura matemática tica analizable Dominios = unidades Estar en una misma proteína = enlaces
35 Generación n de un grafo de dominios Dominios = unidades Estar en una misma proteína = enlaces Este grafo contiene toda la información proporcionada por la proteína PARC
36 Extrayendo información n del grafo total de dominios proteicos Pfam: 4516 dominios; conexiones entre dominios 22 dominios distintos en proteínas RBR Extraemos todos los dominios que: 1) tienen distancia d 2 con los 22 dominios RBR 2) están n conectados al menos con dos dominios entre esos 22 Arbol UVCLUSTER (programa de análisis de grafos)
37 Conexión n dominios RBR metabolismo RNA
38 Alta conexión n dominios ubicuitinación dominios metabolismo RNA
39 Múltiples proteínas con dominios asociados a ambas funciones
40 Es decir Conexión n hasta entonces desconocida ubicuitinación metabolismo RNA Hay RBRs particulares implicadas en funciones de regulación n del metabolismo del RNA Posible función n para Parkin/otras RBR?
41 Conclusiones Los datos comparativos ofrecen un marco conceptual en el que entender la investigación n funcional El análisis de datos proporcionados por múltiples genomas/proteomas permite obtener información n imposible de detectar en estudios a menor escala
42 Agradecimientos Parkin Ignasi Lucas (Dpto. Genética. Univ. Valencia) Alberto Ferrús s (Instituto Cajal, CSIC) UVCLUSTER: Vicente Arnau (Dpto. Informática. Univ. Valencia)
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