Evaluación celular y citomolecular de efectos colaterales inducidos por dosis utilizadas en tratamientos hipofraccionados

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Rosario Blázquez Navarrete
hace 8 años
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$utilizadas en tratamientos hipofraccionados Biolatti V,$

1 4o. Congreso de Radioquimioterapiay Braquiterapia y 7as. Jornadas de Física Médica Evaluación celular y citomolecular de efectos colaterales inducidos por dosis utilizadas en tratamientos hipofraccionados Biolatti V, Dodat D, Güerci A.

$utilizadas en tratamientos hipofraccionados Biolatti V,$

$Hipofraccionado Daño Directo EVIR$

2 Radioterapia Tratamiento Convencional Tratamiento Hipofraccionado Daño Directo EVIR Daño Directo EVIR Evaluación Celular Evaluación Citomolecular

$Hipofraccionado Daño Directo EVIR$

3 Introducción Objetivos Materiales y Métodos Resultados y Discusión

4 Modalidad de tratamiento Esquemas Convencionales Ej.: 25 fracciones de 2 Gy en 35 días. D: 50 Gy Esquemas Hipofraccionados. Ej.: 16 fracciones de 2,66 Gy en 21 días. D: 42,5 Gy Control Local Mejoría en la sobrevida(disminución metástasis) Conveniencia * menor costo * disminuir el tiempo total de tratamiento * mayor numero de pacientes acceden al tratamiento Koy col., 2011

D: 42,5 Gy Control Local Mejoría en la sobrevida(disminución metástasis) Conveniencia * menor

5 Interacción de la RI con el material biológico

6 Las RI dañan el ADN de manera directa La cascada de ROS afecta al ADN

7 Efectos de vecindad inducidos por radiaciones ionizantes La célula afectada envía señales a células cercanas y puede estimularlas para enviar señales hacia la célula inicial ó a sus vecinas.

8 Objetivos del trabajo de tesis Daño Directo 2 Gy Comprobar Y comparar 2,66 Gy Daño Directo EVIR EVIR

9 Materiales y Métodos

10 1. Líneas Celulares CHO-K1 ovario de hámster chino MCF-7 Línea de mama tumoral MCF-10 Línea de mama normal confluencia de 70%. Aumento 100x confluencia de 100%. Aumento 100x confluencia de 100%. Aumento 100x confluencia de 50%. Aumento 400x Confluencia de 90 %. Aumento 400x confluencia de 50%. Aumento 100x

Aumento 100x confluencia de 100%. Aumento 100x confluencia de 100%.

11 3. Diseño Experimental Esquema del diseño experimental DD Evalúa el daño directamente sobre el frasco irradiado. EVIR Se remplaza el medio de cultivo de células no irradiadas, con medio de cultivos celulares previamente irradiados (MCI).

EVIR Se remplaza el medio de cultivo de células no

12 5. Ensayo de Cometa (versión alcalina) Evaluación citomolecular lesiones de doble cadena lesiones de simple cadena sitios lábiles al álcali Ensayo cometa grado 0 y 1 (izq) grado 2 (der). Ensayo cometa grado 3 y 4

simple cadena sitios lábiles al álcali Ensayo cometa

13 6. Ensayo de sobrevida Clonogénico Evaluación celular mide la capacidad de una célula de reproducirse y formar colonias. Representación del procedimiento del ensayo clonogénico

14 4. Procedimiento de Irradiación El valor suministrado alcanzó los 2 Gy y 2,66 Gy. Se utilizó un acelerador lineal de electrones Varian Clinac de potencial acelerador nominal 4 MV. Las UM necesarias para suministrar la dosis absorbida deseada fueron calculadas empleando el formalismo isocéntrico, a través de la función TMR (Razón Tejido- Máximo = Tissue-Maximun Ratio).

4 MV. Las UM necesarias para suministrar la dosis absorbida deseada fueron calculadas

15 Montaje de irradiación El error de dosis en la monocapa es de (1,2 ±0,5)%, con un máximo de (2±0,5)%. Se desprecia el efecto de salida del haz.

16 RESULTADOS

17 MCF-7. Daño citomolecular Porcentaje Células celulas células con daño con daño celulas células sin saño sin daño 20 0 CN EVIR 2 Gy EVIR 2,66 Gy DD 2 Gy DD 2,66Gy Tratamiento Ensayo Cometa sobre la línea celular MCF-7. Cada barra representa la media ± la desviación estándar p<0,05.

MCF-7 Supervivencia Porcentaje de supervivencia 100,00 80,00 60,00 40,00 20,00 CN FS DD FS EVIR 0,00 Tratamiento 2 Gy 2,66 Gy Ensayo Clonogénico sobre la línea celular MCF-7.

18 MCF-7 Supervivencia Porcentaje de supervivencia 100,00 80,00 60,00 40,00 20,00 CN FS DD FS EVIR 0,00 Tratamiento 2 Gy 2,66 Gy Ensayo Clonogénico sobre la línea celular MCF-7. Cada barra representa la media ± la desviación estándar. p<0,05. FS DD: Fracción de sobrevida debida a daño por exposición directa FS EVIR: Fracción de sobrevida debida a daño por EVIR.

Cada barra representa la media ± la desviación estándar. p<0,05.

19 MCF-7. Índice de Daño Unidades Arbitrarias 200,0 150,0 100,0 50,0 0,0 CN 22Gy 2,66 2,66GY Gy 22Gy 2,66 2,66GY Gy Daño por EVIR Daño por exposición Directa CTROL EVIR DD Ensayo Cometa sobre la línea celular MCF-7. Cada barra representa la media ± la desviación estándar. p<0,05.

20 Categorización por grado de daño en los EVIR 80,0 Cantidad de células 70,0 60,0 50,0 40,0 30,0 20,0 2 Gy 2,66 Gy 10,0 0, Ensayo Cometa sobre la línea celular MCF-7. Cada barra representa la media ± la desviación estándar. p<0,05.

0,0 0 1 2 3 4 Ensayo Cometa sobre la línea celular MCF-7.

21 Severidad de Daño inducido por EVIR y DD Células Afectadas 90,0 80,0 70,0 60,0 50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 Daño Leve Daño Severo 0,0 2 Gy 2,66 Gy EVIR DD Ensayo Cometa sobre la línea celular MCF-7. Cada barra representa la media ± la desviación estándar.p<0,05.

22 CONCLUSIONES. Exposición directa no diferencia significativa entre las dosis estudiadas. Se evidencia la interacción entre células tumorales irradiadas y no irradiadas mediante factores liberados al medio. Frente a la exposición a las dosis de 2Gy y 2,66Gy.

23 El daño por EVIR a dosis de 2,66 Gy Similar al daño provocado por exposición directa 2,66 Gy.

24 DE COMPROBARSE DICHAS TENDENCIAS, LOS EVIR CAUSANTES DE UN MAYOR ID A DOSIS HIPOFRACCIONADAS EN EL VOLUMEN DE TRATAMIENTO PLANIFICADO (PTV)?

25 El microambiente generado por los EVIR seria más toxico que la exposición directa a las RI? FNT α Inhibe el crecimiento de las MCF-7

26 Análisis Citomolecular en células MCF-10 Evaluaron los efectos de los EVIR cruzados No se registro acción genotoxico, medida con ensayo cometa. Múltiples factores moduladores influyen en la inducción de los EVIR cruzados. Co-receptibilidad entre las líneas celulares involucradas. Estirpe celular. Mecanismos de protección y reparación de las células normales. Factores exógenos.

27 A futuro Esclarecimiento de los mecanismos biomoleculares cuantificación de las variables bioquímicas combinen de manera directa la radioterapia con la imagenología de los procesos intracelulares Modelo Lineal Cuadrático Modelo Lineal sin umbral

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