TEMA 2: LEISHMANIOSIS (II) GRUPO LEISHMANCERES

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1 TEMA 2: LEISHMANIOSIS (II)

2 POBLACIÓN CANINA EN RIESGO DE INFECCIÓN 11 MILLONES

3 LEISHMANIOSIS VISCERAL MEDITERRÁNEA INTRODUCCIÓN P. perniciosus, P. ariasi CUENCA MEDITERRÁNEA CONDICIONES ECOLÓGICAS APROPIADAS Leishmania infantum PERRO (Canis familiaris) RESERVORIO MAYORITARIO

4 LEISHMANIOSIS CANINA VISCERAL POR Leishmania infantum 7-20% CUENCA MEDITERRÁNEA LEISHMANIOSIS CANINA LEISHMANIOSIS HUMANA ENFERMEDAD OPORTUNISTA EN ENFERMOS CON EL VIH GRAVE PROBLEMA SANITARIO PACIENTES CON ESTADOS DE INMUNOSUPRESIÓN (Alvar y col., 1997) NTRODUCCIÓN

5 SALUD Vs ENFERMEDAD LEISHMANIOSIS CANINA VISCERAL POR Leishmania infantum INFECCIÓN FORMAS SUSCEPTIBILIDAD EVOLUTIVAS PATENTES FORMAS LATENTESRESISTENCIA FORMAS REGRESIVAS OLIGOSINTOMÁTICO EVOLUTIVAS NO EVOLUTIVAS CURACIÓN? EVOLUCIÓN CRÓNICA LANOTTE Y COL., 1979 POLISINTOMÁTICO PRONÓSTICO DESFAVORABLE PRONÓSTICO FAVORABLE

6 VARIABILIDAD EN LA EXPRESIÓN CLÍNICA Y ANALÍTICA INFECCIÓN: RESISTENCIA Y SUSCEPTIBILIDAD

7 SUSCEPTIBILIDAD FORMAS PRECLÍNICAS DE FUTURAS FORMAS PATENTES FORMAS PATENTES LANOTTE Y COL., 1979 PINELLI Y COL., 1994 PARASITOSIS ENFERMEDAD IgGs RESPUESTA EXACERBADA Y POLICLONAL. CAPACIDAD LINFOPROLIFERATIVA (INMUNIDAD CELULAR DEPRIMIDA).. PRONÓSTICO DESFAVORABLE

8 RESISTENCIA FORMAS LENTAMENTE EVOLUTIVAS FORMAS REGRESIVAS EVOLUCIÓN CRÓNICA ESCASA O NULA SINTOMATOLOGÍA PARASITISMO SALUD HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO RETARDADO + DTH. IgGs. PRONÓSTICO FAVORABLE

9 1. CLÍNICO-EPIDEMIOLÓGICO DIAGNÓSTICO ENFERMEDAD EVOLUCIÓN LENTA DIAGNÓSTICO CLÁSICO BASADO EN LA SINTOMATOLOGÍA DE LOS PERROS ENFERMOS HÁBITAT DONDE SE DESENVUELVEN LOS PERROS ANTECEDENTES DE LEISHMANIOSIS CANINA DIAGNÓSTICO TARDÍO PRONÓSTICO DESFAVORABLE ANÁLISIS COMPLEMENTARIOS ANEMIA PANCITOPENIA CREATINEMIA AUMENTADA, PROTEINURIA, HEMOGLOBINURIA Y CILINDROS PROTEINURIA

10 ANÁLISIS COMPLEMENTARIOS TRAZADO ELECTROFORÉTICO DISPROTEINEMIA CON HIPERPROTEINEMIA PT ALBÚMINA GAMMAGLUBULINAS HIPOALBUMINEMIA CON HIPERGAMMAGLUBULINEMIA

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12 ANÁLISIS COMPLEMENTARIOS ALBÚMINA DISPROTEINEMIA CON HIPERPROTEINEMIA TRAZADO ELECTROFORÉTICO GAMMAGLUBULINAS HIPOALBUMINEMIA CON HIPERGAMMAGLUBULINEMIA

13 DIAGNÓSTICO 1. CLÍNICO-EPIDEMIOLÓGICO PENÍNSULA IBÉRICA ENDÉMICA CON FOCOS DE ALTO RIESGO 7-20%

14 DIAGNÓSTICO 2. PARASITOLÓGICO BASADO EN LA OBSERVACIÓN DEL PARÁSITO BIOPSIA POR ASPIRACIÓN DIAGNÓSTICO POCO SENSIBLE (40-60%) FASES DE INFECCIÓN ESTABLECIDA

15 Métodos cualitativos BIOPSIA GANGLIONAR GANGLIO Y BAZO FORMAS AMASTIGOTE C-1 EXTENSIÓN O IMPRONTA, TINCIÓN Y OBSERVACIÓN AL M. O. + +

16 Métodos cualitativos BIOPSIA GANGLIONAR GANGLIO Y BAZO FORMAS PROMASTIGOTE PROCESADO DEL MATERIAL OBTENIDO EN MEDIOS DE CULTIVO SEMIDEFINIDOS SCHNEIDER`S RPMI-1640

17 DIAGNÓSTICO 2. PARASITOLÓGICO BASADO EN LA OBSERVACIÓN DEL PARÁSITO PCR MUESTRAS ADN GENÓMICO CEBADORES CICLOS DE AMPLIFICACIÓN MUY SENSIBLE? MUY ESPECÍFICO SANGRE ENTERA CON ANTICOAGULANTE LÍNEA BLANCA (PBMC) BIOPSIA POR ASPIRACIÓN DE GANGLIO LINFÁTICO GANGLIO LINFÁTICO, BAZO, PIEL, HÍGADO, ETC.

18 DIAGNÓSTICO 2. PARASITOLÓGICO PCR MUY SENSIBLE? MUY ESPECÍFICO GELES DE AGAROSA

19 DIAGNÓSTICO 2. PARASITOLÓGICO PCR-ELISA 4μl 6μl MUY SENSIBLE? MUY ESPECÍFICO DNA Leishmania infantum (4C) MUESTRAS Control Negativo PCR (Agua bidestilada) Control Negativo PCR-ELISA (Agua bidestilada) Control positivo PCR (DNA humano) Control positivo PCR-ELISA

20 2. PARASITOLÓGICO PCR-ELECTROFORESIS CAPILAR DIAGNÓSTICO MUY SENSIBLE MUY ESPECÍFICO? PRIMERS MARCADOS CON FLUOROCROMO

21 DIAGNÓSTICO 3. INMUNOLÓGICO BASADO EN LA DETECCIÓN DE RESPUESTA INMUNOLÓGICA FRENTE AL PARÁSIRO DIAGNÓSTICO PRECOZ ALTA SENSIBILIDAD IgGs ALTA ESPECIFICIDAD INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (IFI) INMUNOENZIMÁTICA (ELISA) MAYOR EFECTIVIDAD TERAPEÚTICA INMUNOCROMATOGRAFÍA (KITS DE DIAGNÓSTICO RÁPIDO) DTH (TEST DE MONTENEGRO) WESTERN BLOTTING (INMUNOBLOT) INMUNOHISTOQUÍMICO

22 RIH DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO EN PARASITOLOGÍA REACCIONES SEROLÓGICAS INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA, ELISA DOBLES ANTICUERPOS, INMUNOCROMATOGRÁFICOS, WB, ETC Ag + Ac ANTI ANTICUERPO MARCADO DETECCIÓN ESPECÍFICA DE ANTICUERPOS

23 RIH DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO EN PARASITOLOGÍA REACCIONES SEROLÓGICAS

24 Técnica inmunoenzimática ELISA de dobles anticuerpos ANTÍGENOS CONJUGADOS DILUCIÓN SUERO SUBSTRATO ABSORBANCIA (λ)

25 RIH DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO EN PARASITOLOGÍA REACCIONES SEROLÓGICAS ELISA DOBLES ANTICUERPOS ANTÍGENO INMUNOCOMPLEJO UNIÓN ESPECÍFICA ANTI- ANTICUERPO ANTICUERPO ESPECÍFICO LECTURA

26 Técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) ANTIGENO 10 7 (L. infantum, M/CAN/ES/96/BCN 150 MON-1) promastigotes/ml. CUT-OFF 1/80 DILUCIÓN DE SUERO 1/40-1/640 CONJUGADO RABBIT fluorescein labeled anti-dog IgG [RAD/IgG (H+L)] (Nordic Immunol. Lab.) 1/160

27 RIH DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO EN PARASITOLOGÍA REACCIONES SEROLÓGICAS IFI ANTÍGENO ANTI- ANTICUERPO ANTICUERPO ESPECÍFICO TODOS LOS ANTÍGENOS (superficie) SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD

28 RIH DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO EN PARASITOLOGÍA REACCIONES SEROLÓGICAS INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA IFI ANTÍGENO ANTICUERPO ANTI- ANTICUERPO ESPECÍFICO LECTURA

29 RIH DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO EN PARASITOLOGÍA REACCIONES SEROLÓGICAS KITS DE DIAGNÓSTICO RÁPIDO BASADOS EN TÉCNICAS INMUNOCROMATOGRÁFICAS

30 RIH DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO EN PARASITOLOGÍA REACCIONES SEROLÓGICAS INMUNOCROMATOGRÁFICOS ANTÍGENO ANTICUERPO ANTI- ANTICUERPO ESPECÍFICO

31 EFICACIA: VACUNA PQ RESULTADOS INMUNOLÓGICOS WB IgGT PERIODO DE INFECCIÓN GRUPO A (PBS) A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 C+ C- B B ªDosis 2ªDosis 3ªDosis

32 FIABILIDAD DIAGNÓSTICA TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD Anticuerpos específicos o Antígeno Cross-reaction Muestras

33 DIAGNÓSTICO 4. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL IMPORTANCIA MUCHAS AFECCIONES SÍNTOMAS CURSAN CON CLÍNICOS COMPATIBLES CON LVC POSIBILIDAD DE FALSOS DIAGNÓSTICOS POSITIVOS 1. CLÍNICO-EPIDEMIOLÓGICO 2. PARASITOLÓGICO 3. INMUNOLÓGICO FALSOS DIAGNÓSTICOS POSITIVOS

34 DIAGNÓSTICO 1. CLÍNICO-EPIDEMIOLÓGICO 2. PARASITOLÓGICO 3. INMUNOLÓGICO DISCRIMINACIÓN? SUSCEPTIBLES RESISTENTES

35 VARIABILIDAD EN LA EXPRESIÓN CLÍNICA Y ANALÍTICA INFECCIÓN: RESISTENCIA Y SUSCEPTIBILIDAD

36 1. CLÍNICO-EPIDEMIOLÓGICO DIAGNÓSTICO? ENFERMEDAD EVOLUCIÓN PRONÓSTICO LENTADESFAVORABLE? DIAGNÓSTICO TARDÍO PRONÓSTICO DESFAVORABLE 2. PARASITOLÓGICO DIAGNÓSTICO POCO SENSIBLE (40-60%) FASES DE INFECCIÓN ESTABLECIDA PCR? PRONÓSTICO FAVORABLE?

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38 VALOR PRONÓSTICO INFECCIÓN SALUD / ENFERMEDAD DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO

39 DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO ALTA SENSIBILIDAD DIAGNÓSTICO PRECOZ ALTA ESPECIFICIDAD MAYOR EFECTIVIDAD TERAPEÚTICA DISCRIMINACIÓN SUSCEPTIBLES RESISTENTES

40 SALUD Vs ENFERMEDAD LEISHMANIOSIS CANINA VISCERAL POR Leishmania infantum

41 SALUD Vs ENFERMEDAD LEISHMANIOSIS CANINA VISCERAL POR Leishmania infantum INFECCIÓN ENFERMEDAD FORMAS EVOLUTIVAS PATENTES FORMAS LATENTES FORMAS REGRESIVAS EVOLUTIVAS OLIGOSINTOMÁTICO NO EVOLUTIVAS SALUD CURACIÓN? EVOLUCIÓN CRÓNICA LANOTTE Y COL., 1979 POLISINTOMÁTICO

42 DTH o TEST DE MONTENEGRO LEISHMANINA ID LECTURA 100 μl 10 7 promastigotes L. infantum /ml 72 y 96 horas INDURACIÓN 5 mm POSITIV0

43 DIAGNÓSTICO IFI MÉTODO DE REFERENCIA ALTA ESPECIFICIDAD ALTA SENSIBILIDAD TITULACIÓN SEROCONVERSIÓN TRAS TRATAMIENTO MARCADOR CON VALOR PRONÓSTICO EFICACIA TERAPEÚTICA

44 Técnica inmunoenzimática ELISA de dobles anticuerpos PQ LiP2a, LiP2b LiP0 H2A, H3 Kmp11 rk39hsp70 Hsp83 ALTA ESPECIFICIDAD ALTA SENSIBILIDAD RESPUESTA PRECOZ SEROCONVERSIÓN TRAS TRATAMIENTO MARCADOR CON VALOR PRONÓSTICO EFICACIA TERAPEÚTICA

45 PARASITOLÓGICO DIAGNÓSTICO MUY SENSIBLE MUY ESPECÍFICO? PCR-ELECTROFORESIS CAPILAR VALOR PRONÓSTICO

46 DIAGNÓSTICO SEGURIDAD PRECOCIDAD Y EFICACIA GRUPO DIAGNÓSTICA LEISHMANCERES INFECCIÓN VALOR PRONÓSTICO SALUD/ENFERMEDAD Biopatológicos Parasitológicos Inmunológicos Diferencial EXPLORACIÓN CLÍNICA ANALÍTICOS CULTIVO DILUCIÓN LÍMITE PCR ELISA PQ, IFI, WB DTH VALOR PRONÓSTICO

47 PARÁMETROS DE SALUD/ENFERMEDAD EN INFECCIONES NATURALES PARÁMETROS/DIAGNÓSTICO SALUD ENFERMEDAD RESISTENCIA SUSCEPTIBILIDAD EXPLORATORIOS ANALÍTICOS PARÁSITOS (BIOPSIA Y CULTIVO) CARGA PARASITARIA (CUANTIFICACIÓN) PCR - -/ /+ pp / pp IFI ELISA WB SLA, PQ, Kmp11, otras IFI ELISA SLA, Kmp11 PQ IFI ELISA SLA, Kmp11 PQ DTH DTH + DTH +

48 TRATAMIENTO VARIAS SEMANAS DE APLICACIÓN Y DOSIS DE RECUERDO ANUALES RECIDIVAS CONTINUO SEGUIMIENTO Y CONTROL CON ANALÍTICAS PERIÓDICAS 1. ETIOLÓGICO ( I ) HÍGADO RIÑÓN? GLUCANTIME (antimoniato de meglumine) - Vía SC - Dosis de mg/kg de peso vivo ( no exceder de 2,5gr/día) ZYLORIC o alopurinol - Vía oral - Dosis de 8-20 mg/kg de peso vivo

49 TRATAMIENTO 2 DÍAS 19 DÍAS 15 DÍAS 21 DÍAS GC 1/2 dosis 1 dosis/12 horas DESCANSO 1 dosis/12 horas ZY 1 dosis/12 horas ANÁLSIS INMUNOLÓGICO? PARÁMETROS DE SALUD EXPLORACIÓN CLÍNICA + HEMATOLOGÍA BIOQUÍMICA ORINA RENAL HEPÁTICO

50 SEGUIMIENTO/MONITORIZACIÓN 60 DÍAS PARÁMETROS DE SALUD EXPLORACIÓN CLÍNICA + HEMATOLOGÍA BIOQUÍMICA PROTEÍNAS EN SUERO ORINA RENAL HEPÁTICO ANÁLSIS INMUNOLÓGICOS IFI ELISA

51 TRATAMIENTO 1. ETIOLÓGICO ( II ) MITELFORÁN (VIRBAC) MITELFOSINA 2% SOLUCIÓN ORAL (20 mg/ml) 2 mg/kg/día (1 ml./10 Kg) EN COMIDAS 4 semanas

52 TRATAMIENTO 2. SINTOMÁTICO INFECCIONES SECUNDARIAS PARASITOSIS MIXTAS SÍNDROME ANÉMICO - Vitamina B y Ác. Fólico, Hierro, Transfusiones - Oximetalona LESIONES OCULARES (Iridociclitis, queratitis y glucoma) - Diuréticos - Corticoides - Antibióticos - Timolol

53 ESTRATEGIAS DE CONTROL 1 MEDIDAS DE LUCHA CONTRA EL INSECTO VECTOR 2 3 DIAGNÓSTICOS PRECOCES Y FIABLES DE LOS PERROS INFECTADOS LATENTES Y PATENTES DESARROLLO DE FÁRMACOS MÁS EFICACES 4 DESARROLLO DE VACUNAS

54 VACUNA Control de la infección? INFECCIÓN FORMAS EVOLUTIVAS PATENTES FORMAS LATENTES FORMAS REGRESIVAS OLIGOSINTOMÁTICO PARASITOSIS NO EVOLUTIVAS EVOLUTIVAS Control de la proliferación PARASITISMO POLISINTOMÁTICO

55 INMUNOPROFILAXIS DE LALEISHMANIOSIS: TIPOS VACUNAS VACUNAS RECOMBINANTES H2A LiP2b PQ PQ LiP2a LiP0 Proteína multicomponente Quimera (PQ) de L. infantum ( Soto y col., 1995; Soto y col., 1998)

56 PLANETA TIERRA

57 MUERTES POR ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y PARASITARIAS

58 MUERTES POR LEISHMANIOSIS

59 MUERTES POR ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y PARASITARIAS 59 % POBLACIÓN MUNDIAL SUFRE INFECCIONES POR PARÁSITOS (COMITÉ EXPERTOS WHO) HIGIA PECORIS SALUS POPULI

60 SCIENCE RESEARCH

61 DUDAS?