Detección de IL-2 junto con IFN-gamma en Sangre para Diferenciar Infección TB Latente de TB Activa
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- José Ignacio Ortiz Torregrosa
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1 Detección de IL-2 junto con IFN-gamma en Sangre para Diferenciar Infección TB Latente de TB Activa Dr. Miguel Santín Servicio de Enfermedades Infecciosas Hospital Universitario de Bellvitge Universidad de Barcelona XIX Taller Internacional sobre TB UITB-2015
2 Fundamento Diagnóstico de infección TB Los IGRA y la Prueba de la Tuberculina (PT) No diferencian Infección Latente (ITBL) de Enfermedad TB. Diferenciación de ITBL y enfermedad TB Ags específicos de latencia Biomarcadores de ITBL y TB: La respuesta celular inmune (fenotipo celular) y su expresión de citoquinas frente a M. Tuberculosis difiere según el estado de la misma
3 Infección TB Latente TB Activa ++++ TCM + + TME ++++ Fuente: Millington 2007; Sargentini 2009; Prezzemolo 2014.
4 Infección TB Latente TB Activa ++++ TCM + + TME IL2 +++ IFNγ-IL2 ++ IFNγ + IFNγ-TNFα +/- IFNγ-TNFα-IL2 +/- TNFα Fuente: Millington 2007; Sargentini 2009; Prezzemolo 2014.
5 Infección TB Latente TB Activa ++++ TCM + + TME IL2 +/- +++ IFNγ-IL2 +/- ++ IFNγ ++ + IFNγ-TNFα +++ +/- IFNγ-TNFα-IL /- TNFα Fuente: Millington 2007; Sargentini 2009; Prezzemolo 2014.
6 TST vs IGRAs What do the IGRAs consist of? PPD Ag presenting cell Central memory T cells (TCM) TNFα IFNγ IL8 Induration Ag MTC -ESAT-6 -CFP-10 -TB7.7 Effector memory T cells (TEM) h incubación Detection of in vitro IFNγ
7 Inmunodiagnosis de la infección TB Experiencia con IL2 Biselli (CMI 2010): SI Borgström (PLoS 2012 ONE): SI
8 Inmunodiagnosis de la infección TB Experiencia con IL2 Biselli(CMI 2010): SI Borgström(PLoS 2012 ONE): SI Frahm (Tuberculosis 2011): NO Wang(PLoS ONE 2012): NO
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10 Detección of IL2 in addition to IFNγdiscriminates active TB patients, latently infected individuals and controls 24 h 72 h AUC 0.99 ( ) Controles sanos= 20; TB activa= 20; ITBL= 20 Biselli R. CMI 2010
11 Detección of IL2 in addition to IFNγdiscriminates active TB patients, latently infected individuals and controls 24 h 72 h AUC 0.99 ( ) Controles sanos= 20; TB activa= 20; ITBL= 20 Biselli R. CMI 2010
12 Utilidad de la determinación de IL-2 en sangre total tras la incubación de QuantiFERON -TB Gold In-tube de tres días para diferenciar Infección TB Latente de TB Activa (Exp.: PI12/02322)
13 Tamaño Muestral y Criterios de Inclusión Tamaño muestra: 334 sujetos (Con punto de corte 2 U/mL; Sensibilidad 0,90 y Especificidad 0,95) Criterios de inclusión: - Edad >18 a. - Sospecha de TB (=decisión de hacer la prueba para apoyar el Dx en pacientes con sospecha clínica fundada de TB). - Consentimiento informado Criterios de exclusión: - Inmunosupresión - TB previa IL-2 con incubación de QuantiFERON -TB Gold In-tube de 3 días para diferenciar ITBL detb Activa (Exp.: PI12/02322)
14 Centros Participantes H. de Jerez (Jerez, Cádiz) Elvira Pérez Escolano H. M. de Valdecilla (Santander) Ramón Agüero H. Virgen Macarena (Sevilla) Ángel Domínguez H. Mar (BCN) Paquita Sánchez H. S. Joan de Déu (S. Boi, BCN) Xavier Casas Complexo Hospitalario (Pontevedra) Luís Anibarro H. Lucus Augusti (Lugo) Ramón Rabuñal H. Universitario Bellvitge (BCN) Miguel Santín IL-2 con incubación de QuantiFERON -TB Gold In-tube de 3 días para diferenciar ITBL detb Activa (Exp.: PI12/02322)
15 Extracción * Incubación Determinaciones Microbiología 72 h h Resultado del IFNγ para el clínico (24 h) QFT-GIT 24 y 72 h realizados el mismo día Resultado del IFNγ(72h) *Extracción en tubos de QFT-GIT IL-2 con incubación de QuantiFERON -TB Gold In-tube de 3 días para diferenciar ITBL detb Activa (Exp.: PI12/02322)
16 Extracción * Incubación Determinaciones Microbiología 72 h h Resultado del IFNγ para el clínico (24 h) QFT-GIT 24 y 72 h realizados el mismo día Resultado del IFNγ(72h) Tras centrifugación, tomar 200 µl de cada tubo Tras centrifugación, tomar 200 µl de cada tubo Congelar para determinación posterior de IL-2 (16-24 h) Congelar para determinación posterior de IL-2 (72 h) *Extracción en tubos de QFT-GIT IL-2 con incubación de QuantiFERON -TB Gold In-tube de 3 días para diferenciar ITBL detb Activa (Exp.: PI12/02322)
17 Resultados QTF 24 y 72 h (n=121) IL-2 con incubación de QuantiFERON -TB Gold In-tube de 3 días para diferenciar ITBL detb Activa (Exp.: PI12/02322)
18 Producción de IFN-γe IL-2 a las 24 y 72 h 16-24h 72h IL-2 (UI/mL) IFN-γ(UI/mL) No INF ITBL TB No INF ITBL TB No INF ITBL TB No INF ITBL TB IL-2 con incubación de QuantiFERON -TB Gold In-tube de 3 días para diferenciar ITBL detb Activa (Exp.: PI12/02322)
19 Conclusiones La detección de IL-2 en el sobrenadante del QTF tras 72 h. de incubación distingue los pacientes infectados de los no infectados por M. tuberculosis, pero no discrimina entre los portadores de infección latente y los enfermos. Los resultados obtenidos con QTF tras incubación prolongada (72 h.) son concordantes con los obtenidos con h. de incubación. IL-2 con incubación de QuantiFERON -TB Gold In-tube de 3 días para diferenciar ITBL detb Activa (Exp.: PI12/02322)
20 -CD4+ efectoras secretoras de TNFα: Dx de TB activa (Sensibilidad: 100%, Especificidad: 93%, ROC (AUC): 0,99) -CD4+ secretoras de TNFαy detección de CD8+ específicas: Discrimina TB activa de ITBL
21 Agradecimientos Lucía González Amparo Grijota Maria R. Guerra Dr Fernando Alcaide Dr Fran Morandeira Dr Laura Muñoz Dr Raquel Moure IPs del estudio IL-2: Elvira Pérez Escolano (H. de Jerez) Ramón Agüero (H. M. de Valdecilla, Santander) Ángel Domínguez (H. Virgen Macarena, Sevilla) Paquita Sánchez (H. Mar, Barcelona) Xavier Casas (H. S. Joan de Déu, (S. Boi, Barcelona) Luís Anibarro (Complexo Hospitalario de Pontevedra) Ramón Rabuñal (H. Lucus Augusti, Lugo) Investigadores colaboradores (microbiología, Inmunología y enfermería) de los centros participantes.
22 Preguntas?
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