TEMA 4. ANALISIS DE ORINA Y SANGRE ANALISIS DE ORINA ANALISIS DE ORINA ANALISIS DE ORINA. Formación de la orina: 1. Interés del análisis de orina

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1 TEMA 4. Y SANGRE Formación de la orina: RIÑÓN NEFRONA 1. Interés del análisis de orina 4. ph 2. Recogida de la orina 3. Características y parámetros medibles en la orina: color, olor turbidez 5. Relación volumen/tiempo 1

2 6. Densidad a. Urinómetro o densímetro 6. Densidad b. Refractometría de líquidos Haz incidente probeta Haz incidente de energía radiante monocromática θ 1 Líquido Vidrio Interfase líquido-vidrio Vacío i.r.=n 1 Material ópticamente Transparente con i.r. = N 2 Muestra de orina Líquido θ 2 Interfase N 2 = sen θ 1 = v 1 N 1 sen θ 2 v 2 Haz refractado Refractometría de líquidos. Refractómetro de ángulo crítico Medidor de sólidos totales N 2 = sen θ 1 N 1 sen θ 2 θ 1 = 90º θ 2 = θc 1.66 = 1 N 1 sen θc N 1 = 1.66 sen θc 2

3 Pruebas con tiras reactivas Pruebas con tiras reactivas. Fotometría de reflectancia Reflectancia difusa Reflectómetro Nitritos Bilirrubina Dr= -log R -Rnegro Rblanco Sensibilidad, especificidad y eficiencia en el desarrollo de una prueba SENSIBILIDAD: Probabilidad de que el resultado de una prueba sea positivo cuando está presente la enfermedad que la prueba detecta Sensibilidad = PV x 100 PV + NF ESPECIFICIDAD: Probabilidad de que el resultado de una prueba sea negativo cuando no está presente la enfermedad que la prueba detecta Especificidad= NV x 100 NV + PF EFICIENCIA: Prueba estadística que determina el valor diagnóstico de una prueba, relacionando el nº total de resultados correctos con el nº total de participantes ANALISIS MICROSCÓPICO DE LA ORINA 1. CRISTALES. Precipitan compuestos inorgánicos como carbonatos y fosfatos, también uratos y cristales de cistina. 2. ORGANISMOS. Su presencia representa anomalías en la orina. BACTERIAS: infección del tracto urinario. Presencia de nitritos y leucocitos. Eficiencia = PV + NV x 100 PV + PF +NF + NV PV es el nº de resultados positivos verdaderos NF es el nº de resultados negativos falsos. NV es el nº de resultados negativos verdaderos PF es el nº de resultados positivos falsos. HONGOS: Diabetes, ingestión de anticonceptivos, tratamiento con antibióticos. PARASITOS: contaminación vaginal o fecal. CELULAS INFECTADAS POR VIRUS: cambios celulares. 3

4 ANALISIS MICROSCÓPICO DE LA ORINA ANALISIS MICROSCÓPICO DE LA ORINA 3. CELULAS. HEMATIES: lesión vascular, trastornos renales o del tracto urinario inferior. LEUCOCITOS: condiciones inflamatorias o del tracto urinario. CELULAS DEL EPITELIO TUBULAR RENAL: células viejas o enfermas o de los túbulos del nefrón. CUERPOS GRASOS OVALES: síndrome nefrótico y diabetes mellitus. CELULAS DEL EPITELIO DE TRANSICIÓN: inflamación, cateterización o proceso patológico maligno. CELULAS EPITELIALES ESCAMOSAS: contaminación vaginal o metaplasia escamosa de la vejiga. FRAGMENTOS TISULARES: necrosis papilar renal o tumores de la vejiga. ESPERMATOZOIDES: eyaculación ó coito. No se informa. El sedimento urinario será clasificado de anormal cuando tenga uno de los siguientes caracteres: 1. Más de 5 hematíes por campo de elevado aumento (x400). 2. Más de 2 células tubulares renales por campo de elevado aumento (x400). 3. Más de 3 cilindros hialinos, más de 1 cilindro granuloso, o la presencia de cualquier cilindro patológico por campo de escaso aumento (x100). 4. Más de una bacteria por campo de elevado aumento (x400). 5. Presencia de hongos, parásitos o células con inclusiones virales. 6. Presencia de cristales patológicos (como los de cistina) ó de gran nº de cristales no patológicos (ac.úrico). CILINDROS RENALES: pueden ser fisiológicos o patológicos (enfermedad renal). EXAMEN MICROSCÓPICO DE LA ORINA Se recomienda un examen microscópico de la orina donde se observe hematuria, proteinuria o una prueba positiva de nitritos. Reconocimiento temprano de condiciones infecciosas, inflamatorias y neoplásicas que afectan al sistema urinario. A. Microcopia de campo claro sin coloración B. Microscopia de campo claro con coloración supravital 1. NITRITOS (NO 2- ) Método indirecto para la detección de bacterias en orina. Géneros como Escherichia, Klebsiella, Proteus y Pseudomas contienen enzimas que reducen el nitrato urinario a nitrito a. Prueba con tira reactiva b. Confirmación por microscopia de la presencia de bacterias 2. LEUCOCITOS a. Prueba con tira reactiva b. Confirmación por microscopia 4

5 3. PROTEÍNAS (Existencia de enfermedad renal) Valor normal 0.1 g/día excretados Proteinuria: baja < 0.5 g/ día moderada g/ día alta > 4 g/ día a. Prueba con tira reactiva b. Prueba del ácido sulfosalicílico c. Prueba de la proteína de Bence-Jones (asociada a la presencia de mielomas) 4. BILIRRUBINA Y UROBILINÓGENO (Existencia de enfermedad hepática) Valores normales en orina: Bilirrubina directa 0.02 mg / 100 ml urobilinógeno mg /24 horas Valores normales en sangre: Bilirrubina total 15 mg / L a. Determinación de urobilinógeno por tira reactiva b. Determinación de bilirrubina: - Métodos químicos -HPLC ESQUEMA GENERAL DE UN SENSOR QUÍMICO 5. GLUCOSA (Existencia de diabetes) Glicosuria o glucosuria: presencia de cantidades detectables de glucosa en orina. Puede deberse a: - Condición benigna: después de una comida fuerte o estrés emocional - Estado patológico: diabetes mellitus. Supone un aumento en sangre. Valores normales en sangre: mg/ L MUESTRA SENSOR SEÑAL RESPUESTA a. Métodos de reducción b. Métodos enzimáticos c. Sensores químicos RECEPTOR REGIÓN DONDE TIENE LUGAR LA REACCIÓN QUÍMICA SELECTIVA TRANSDUCTOR CONVIERTE LA MAGNITUD DE LA SEÑAL EN UNA MEDIDA DE LA CANTIDAD DE ANALITO SEÑAL PRIMARIA ELECTROQUÍMICA ÓPTICA TÉRMICA MÁSICA 12 5

6 SENSOR DE GLUCOSA Membrana sensora: Superficie electrodo (transductor) H 2 O 2 Acetato de celulosa H 2 O 2 GLUCOSA OXIDASA policarbonato disolución Glucosa + O Glucosa 2 ácido glucónico + H 2 O 2 oxidasa H 2 O 2 + 2OH - O 2 + 2H 2 O + 2e - i Cglucosa Capa de biorreconocimiento: Glucosa oxidasa Transductor CUERPOS CETÓNICOS (Problema metabolismo hidratos de carbono) Cetonuria: presencia de cuerpos cetónicos en orina. Puede deberse a: ayuno prolongado, presencia de diabetes, aumento en la utilización de grasas lo que da lugar a una combustión incompleta de ac. grasos. Aparecen ácido β- hidroxibutírico (78%), ácido acetoacético (20%) y acetona (2%) Valores normales en sangre: cuerpos cetónicos mg / 100 ml ac. Acetoacético < 2 mg / 100 ml a. Métodos químicos b. Métodos enzimáticos c. Cromatografía de gases HEMATOGRAMA COMPLETO: HEMATOCRITO: Proporción del volumen total de glóbulos rojos ó eritrocitos respecto al volumen sanguíneo. Suele ser del 40-45%. El 55-60% restante lo forma el plasma ya que la contribución de glóbulos blancos y plaquetas es mínima. Para determinarlo se centrifuga sangre entera, estabilizada con anticoagulante, en un tubo de diámetro uniforme. La altura del paquete de células en el tubo se divide por la altura de la sangre total. El valor resultante, mayor que cero y menor que uno se denomina hematócrito. ERITROCITOS: Tienen una alta concentración de hemoglobina. Transportan O2 desde los pulmones a los tejidos corporales. La concentración de hemoglobina se determina lisando los eritrocitos de un volumen de sangre conocido. La solución roja homogenea resultante se mide por espectroscopía visible, expresando el resultado en g/l. LEUCOCITOS: Existen leucocitos de diferentes tipos: linfocitos, monocitos, neutrófilos, eosinófilos y basófilos. Controlan infecciones. PLAQUETAS: Mantiene la hemostasia. Forman un tapón y cierran la herida para prevenir una excesiva hemorragia. 6

7 HEMATOGRAMA COMPLETO: RBC: Recuento de glóbulos rojos. Medidores ópticos del tiempo de coagulación WBC: Recuento de glóbulos blancos. VCM: Volumen corpuscular medio. Expresado en femtolitros. VCM = Hematocrito nº eritrocitos/l HCM: Hemoglobina corpuscular media. Expresado en picogramos por célula. HCM = Hemoglobina en g/l nº eritrocitos/l CHCM: Concentración de hemoglobina corpuscular media. CHCM = Hemoglobina en g/l Hematocrito CBC: Recuento completo de sangre: incluye el nº de leucocitos, hematócrito, hemoglobina, medida diferencial de leucocitos, VCM, HCM y nº de plaquetas (a veces). Medidores conductimétricos del tiempo de coagulación Perfiles del tiempo de coagulación Tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA) normal de 30 segundos Tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA) en un plasma deficiente en facto IX: el Tiempo de coagulación es de 102 s 7

8 Contadores de células basados en medidas de la resistencia eléctrica Contadores de células basados en medidas ópticas Recuento en millares ALGUNAS SUSTANCIAS ANALIZADAS EN SANGRE ALGUNAS SUSTANCIAS ANALIZADAS EN SANGRE 1. ÁCIDO ÚRICO (Evaluación de la función renal) Compuesto nitrogenado no proteico. Resultante del metabolismo de las nucloeproteínas. La insuficiencia renal crónica avanzada produce un incrementeo progresivo del nivel de ácido úrico en el plasma. Gota: depósito de uratos en los tejidos Valores normales en sangre: varones mg / L mujeres mg / L a. Métodos espectrofotométricos b. Métodos enzimáticos c. Método polarográfico 2. COLESTEROL (Evaluación de la existencia de hiperlipidemia y de riesgo de enfermedades cardiovasculares) Se encuentra presente en todas las lipoproteínas plasmática. Cuando un exceso de lípidos no se elimina o utiliza, se deposita en tejidos y paredes arteriales, obstruyendo el flujo de sangre a órganos vitales. Se obstruye la circulación dando lugar, por ejemplo, al infarto de miocardio Valores normales en sangre: colesterol g / L colesterol HDL hombres g / L mujeres g / L a. Métodos en 1, 2, 3 ó 4 etapas para determinar colesterol b. Determinación del colesterol unido a las HDL d. HPLC 8

9 ALGUNAS SUSTANCIAS ANALIZADAS EN SANGRE 3. ENZIMAS (Evaluación de la función hepática) - Alanina aminotransferasa (ALT) - Fosfatasa alcalina (ALP) - Aspartato aminotransferasa (AST) - Gamma glutamiltransferasa (GGT) Determinación de ALT Valores normales en sangre: 0 55 U / L 9