QMS TOPIRAMATE. Immunoassay REACTIVOS DE TOPIRAMATO Clave de símbolos utilizados

Transcripción

1 C Enero, 2010 QMS TOPIRAMATE Immunoassay Este prospecto del envase del Quantitative Microsphere System (QMS) debe leerse detenidamente antes de utilizar el sistema. Las instrucciones del prospecto del envase deben seguirse según corresponda. La fiabilidad de los resultados del análisis no se puede garantizar si existen desviaciones respecto a las instrucciones de este prospecto del envase. Servicio al cliente Estados Unidos: Internacional: Fax: Clave de símbolos utilizados Dispositivo médico de diagnóstico in vitro Código/Número de lote Reactivo 1 Reactivo 2 Atención: consultar los documentos adjuntos Consultar las instrucciones de uso Limitación de temperatura Número de catálogo Componentes Contenido del kit Microgenics GmbH Spitalhofstrasse 94 D Passau Tel: +49 (0) Fax: +49 (0) Fecha de caducidad Representante autorizado en la Comunidad Europea Fabricante REACTIVOS DE TOPIRAMATO Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.

2 NOMBRE Topiramato (TPM) QMS INDICACIONES El análisis de topiramato QMS está indicado para la determinación cuantitativa de topiramato en suero o plasma humanos en analizadores químicos clínicos automatizados. Los resultados obtenidos se utilizan para el diagnóstico y el tratamiento de sobredosis de topiramato y para controlar las concentraciones de topiramato con el fin de garantizar un enfoque terapéutico adecuado. RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA El topiramato (2,3:4,5-Di-O-isopropiliden-ß-D-fructopiranosa) es un fármaco anticonvulsivo aprobado para utilizarse en el tratamiento de la epilepsia, y se prescribe con frecuencia como monoterapia o como parte de un tratamiento antiepiléptico con varios fármacos. 1 PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO El análisis de topiramato QMS es un inmunoanálisis turbidimétrico homogéneo potenciado con partículas. El análisis se basa en la competencia entre el fármaco de la muestra y el fármaco que recubre las micropartículas por los lugares de unión a anticuerpos presentes en el reactivo de anticuerpos de topiramato. El reactivo de micropartículas recubiertas de topiramato se aglutina rápidamente en presencia del reactivo de anticuerpos anti-topiramato y en ausencia de fármaco competidor en la muestra. La velocidad del cambio de absorbancia se mide fotométricamente. Cuando se añade una muestra que contiene topiramato, la reacción de aglutinación se inhibe parcialmente, lo que reduce la velocidad de cambio de la absorbancia. Se puede obtener una curva clásica de inhibición de la aglutinación en función de la concentración con la velocidad de aglutinación máxima obtenida con

3 la concentración más baja de topiramato y la velocidad de aglutinación mínima obtenida con la concentración más alta de topiramato. REACTIVOS Kit de reactivos El análisis de topiramato QMS, , se suministra como un kit de dos reactivos líquidos listos para usar que contiene: Reactivo 1 Reactivo 2 1 x 22 ml 1 x 16 ml Componentes de los reactivos Componente Anticuerpo policlonal (de oveja) anti-topiramato <5,0% Azida sódica <0,1% Micropartículas recubiertas de topiramato <1,0% Azida sódica <0,1% MANIPULACIÓN Y CONSERVACIÓN DE LOS REACTIVOS y listos para utilizarse. Antes de utilizar los reactivos, inviértalos varias veces, evitando la formación de burbujas. Si hay burbujas en el cartucho de reactivo, extráigalas con un bastoncillo aplicador nuevo. O bien, deje reposar el reactivo a la temperatura de conservación apropiada hasta que las burbujas se

4 disipen. Para minimizar la pérdida de volumen, no utilice una pipeta de transferencia para extraer las burbujas. Cuando se vacíe cualquiera de los cartuchos de reactivo ( o ), sustituya ambos cartuchos y compruebe la calibración con al menos dos concentraciones de controles, de acuerdo con los requisitos de control de calidad establecidos para el laboratorio. Si los resultados del control están fuera de los límites aceptables, es posible que sea necesario repetir la calibración. ATENCIÓN: las burbujas del reactivo pueden interferir con la detección adecuada del nivel del reactivo en el cartucho y ocasionar una aspiración insuficiente de reactivo que puede afectar a los resultados Los reactivos sin abrir son estables hasta la fecha de caducidad si se conservan a una temperatura de 2 a 8 C No congele los reactivos ni los exponga a temperaturas superiores a los 32 C. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Precauciones para los usuarios Para uso diagnóstico in vitro. No mezcle materiales de kits con diferentes números de lote. ATENCIÓN: este producto contiene componentes de origen humano o potencialmente infecciosos. Se analizaron los componentes derivados de sangre humana y se determinó que no son reactivos para HbsAg, anti-vih 1/2 ni anti-vhc. Ningún método de prueba conocido puede garantizar por completo que los productos de origen humano o derivados de microorganismos inactivados no transmitan infecciones. Por lo tanto, se recomienda considerar todos los materiales de origen humano como potencialmente infecciosos y manipularlos según

5 las prácticas de bioseguridad apropiadas. RECOGIDA Y MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS Los siguientes tubos de recogida de muestras pueden utilizarse para el análisis de topiramato QMS: Suero Vidrio Plástico Sin aditivos Tubo separador de suero (gel) Sin aditivos Plasma EDTA (K 3) EDTA (K 2) Heparina-litio Tubo separador de plasma con heparina-litio (gel) Heparina sódica No se ha evaluado el uso de otros tubos de recogida de muestras con el análisis de topiramato QMS. Siga las instrucciones de procesamiento del fabricante de los tubos de recogida de suero o plasma. Una centrifugación inadecuada puede afectar a los resultados de la prueba. Asegúrese de que las muestras no contengan fibrina, hematíes ni otro tipo de partículas. Separe el plasma o el suero de las células, el coágulo o el gel lo antes posible después de la recogida. Algunos tubos separadores con gel pueden no ser adecuados para utilizarse en análisis de farmacovigilancia. Consulte la información suministrada por el fabricante de los tubos. 2

6 Las muestras sin células, coágulos ni gel se pueden almacenar durante una semana como máximo a una temperatura de 2 C a 8 C. Si las pruebas van a retrasarse más de una semana, las muestras pueden conservarse congeladas (a 10 C) antes de analizarlas. Las muestras conservadas entre 2 C y 8 C durante un máximo de una semana o congeladas durante un máximo de cuatro semanas no mostraron diferencias en el rendimiento (±10% de concentración de topiramato en el tiempo cero) respecto a las muestras recién obtenidas. Se debe procurar limitar el número de ciclos de congelación-descongelación. PROCEDIMIENTO Material suministrado Reactivos de topiramato QMS, Material adicional requerido pero no suministrado Calibradores de topiramato QMS, CAL A-F: 1 1,0 ml cada uno Controles de topiramato QMS, Concentraciones 1-3: 1 x 2,0 ml cada uno Procedimiento del análisis Para ver una descripción detallada de cómo procesar y calibrar un análisis, consulte el manual de funcionamiento específico del instrumento. Procedimiento de dilución de las muestras Utilice el CAL A de topiramato QMS (0,0 µg/ml) para diluir manualmente las muestras que estén fuera del rango de resultados del análisis. Protocolo de dilución manual Es posible diluir manualmente con el CAL A de topiramato QMS (0,0 µg/ml) las muestras de pacientes que muestran concentraciones de topiramato

7 superiores a 32,0 µg/ml, antes de pipetear la muestra al recipiente de muestra. La dilución debe llevarse a cabo de forma que los resultados de la prueba diluida superen el límite de sensibilidad del análisis, de 1,5 µg/ml. La concentración notificada debe multiplicarse por el factor de dilución manual para obtener la concentración final de la muestra. final de la muestra = concentración notificada factor de dilución manual Factor de dilución manual = (volumen de la muestra + volumen del CAL A) volumen de la muestra CALIBRACIÓN El análisis de topiramato QMS debe calibrarse mediante un procedimiento de calibración completa (6 puntos). Para realizar una calibración completa, analice los calibradores de topiramato QMS A, B, C, D, E y F por duplicado. Es necesario repetir la calibración para cada nuevo número de lote. Verifique la curva de calibración con al menos dos concentraciones de controles, de acuerdo con los requisitos de control de calidad establecidos para el laboratorio. Si los resultados del control están fuera de los límites aceptables, es posible que sea necesario repetir la calibración. Nota: El CAL A de topiramato QMS es el blanco de calibración para este análisis. CONTROL DE CALIDAD Siempre que proceda, consulte los procedimientos normalizados de

8 trabajo del laboratorio y/o el plan de garantía de calidad para conocer otros requisitos del control de calidad y las posibles medidas correctivas. Todos los requisitos de control de calidad deben realizarse de acuerdo con las normas o los requisitos de acreditación locales, estatales o federales. Requisitos de control recomendados para el análisis de topiramato QMS: Se deben analizar como mínimo dos concentraciones de controles que abarquen todo el rango de decisiones clínicas cada 24 horas. Si fuera necesario analizar los controles con más frecuencia, siga los procedimientos de control de calidad establecidos para el laboratorio. Si los resultados de control de calidad no están dentro de los límites aceptables definidos por el laboratorio, se debe sospechar de la validez de los resultados obtenidos con las muestras de pacientes y tomar las medidas correctivas oportunas. RESULTADOS Los resultados del análisis de topiramato QMS pueden indicarse en µg/ml o en µmol/l. Para convertir los resultados de topiramato de µg/ml a µmol/l, debe multiplicarse el valor en µg/ml por 2,95. Al igual que ocurre con todas las determinaciones de analitos, los valores de topiramato deben utilizarse junto con la información obtenida durante las evaluaciones clínicas y otros procedimientos diagnósticos. Códigos de error de los resultados Algunos resultados pueden contener códigos de error. Consulte la descripción de los códigos de error en el manual de funcionamiento específico del instrumento.

9 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los anticuerpos heterófilos interferentes son poco frecuentes en la población general. Estos anticuerpos pueden provocar la autoaglutinación del reactivo de micropartículas, lo que a su vez puede producir resultados erróneamente bajos inadvertidos. Para realizar un diagnóstico, el resultado de la prueba debe valorarse siempre junto con la historia clínica del paciente, la exploración clínica y otros resultados. Consulte los apartados RECOGIDA Y MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS y CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DE RENDIMIENTO de este prospecto del envase. VALORES ESPERADOS No se ha establecido un rango terapéutico preciso para el topiramato. Algunas publicaciones sugieren un rango diana de 2 a 25 µg/ml para las concentraciones en estado de equilibrio. 3 No existe una correlación definida entre las concentraciones de topiramato circulante y la toxicidad, las reacciones adversas o la eficacia clínica. 3 Esto justifica el control de las concentraciones de topiramato en los pacientes. Las concentraciones de topiramato no deben utilizarse como único medio de control terapéutico del medicamento. El análisis debe utilizarse junto con la información obtenida durante las evaluaciones clínicas y otros procedimientos diagnósticos. Los médicos deben vigilar estrechamente a los pacientes durante el inicio del tratamiento y los ajustes de dosis. Puede ser necesario obtener varias muestras para determinar la variación esperada de las concentraciones óptimas (en estado de equilibrio) para cada paciente.

10 CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DE RENDIMIENTO Sensibilidad Límite de cuantificación (LDC) El LDC del análisis de topiramato QMS se define como la concentración más baja a la que se observa una recuperación y una precisión entre análisis aceptables (con frecuencia se considera como un CV 20% con una recuperación de ±15%). Se determinó un LDC de 1,5 µg/ml. Rango del análisis El rango del análisis es de 1,5 a 32,0 µg/ml. Los resultados obtenidos por debajo de este rango se notifican como <1,5 µg/ml. Exactitud La exactitud por recuperación se determinó añadiendo topiramato de alto grado de pureza a suero humano negativo para topiramato. Inicialmente se preparó por métodos gravimétricos una disolución madre de suero con aproximadamente 32,00 µg/ml de topiramato, añadiendo topiramato al suero humano. Después, se añadió volumétricamente esta disolución concentrada a suero humano negativo para topiramato, para obtener concentraciones del fármaco en todo el rango de análisis. Cada muestra se analizó por triplicado en un analizador químico clínico automatizado. Los resultados se promediaron y se compararon con la concentración diana, y se calculó el porcentaje de recuperación. Los resultados se indican a continuación. media recuperada Porcentaje de recuperación = x 100 teórica 10

11 teórica media recuperada Porcentaje de recuperación 32,00 32,48 101,5 24,00 24,50 102,1 16,00 16,74 104,6 8,00 8,35 104,4 6,40 6,61 103,3 3,20 3,47 108,4 2,56 2,67 104,3 1,92 2,11 109,9 1,60 1,65 103,1 1,28 1,33 103,9 Recuperación porcentual media: 104,6 Linealidad Los estudios de linealidad se llevaron a cabo diluyendo una mezcla de muestras de pacientes con una concentración elevada para obtener concentraciones en todo el rango de análisis. La mezcla de muestras de pacientes se ajustó hasta obtener un valor de un 20% a un 30% superior al rango de resultados deseado, según las recomendaciones del documento NCCLS Protocol EP6-A. 4 Las muestras se diluyeron con calibrador A de topiramato QMS (blanco de calibración). La linealidad de las diluciones específicas se consideró aceptable si se obtenía una desviación porcentual de ±10% respecto a los valores de 1 er y de 2º orden predichos en el análisis de regresión. Los resultados se indican a continuación. 11

12 Valor estimado Factor de dilución Resultados Resultados predichos de 1 er orden Resultados predichos de 2º orden Diferencia porcentual (criterio de aceptación: ±10%) 35,0 0, ,57 36,76 36,78 0,04% 30,0 0, ,87 31,52 31,53 0,00% 20,0 0, ,86 21,05 21,04 0,06% 15,0 0, ,89 15,82 15,80 0,09% 10,0 0, ,54 10,58 10,57 0,10% 5,0 0,1250 5,28 5,35 5,34 0,06% 3,0 0,0750 3,11 3,25 3,25 0,02% 2,0 0,0500 2,22 2,20 2,21 0,13% 1,5 0,0375 1,68 1,68 1,68 0,25% 1,2 0,0300 1,43 1,37 1,37 0,36% Comparación de métodos Los estudios de correlación se llevaron a cabo según se indica en el documento NCCLS Protocol EP9-A2. 5 Los resultados del análisis de topiramato QMS se compararon con los de un inmunoanálisis comercial de polarización de fluorescencia. Las concentraciones de topiramato oscilaban entre 1,56 µg/ml y 30,72 µg/ml. Los resultados del análisis de regresión de Passing-Bablok 6 del estudio se muestran a continuación. Pendiente 0,962 Ordenada en el origen 0,228 Coeficiente de correlación (R 2 ) 0,986 Número de muestras 148 Precisión La precisión se determinó tal como se describe en el documento NCCLS Protocol EP5-A

13 Para el estudio se utilizó un control comercial de suero humano con tres concentraciones de topiramato. Cada concentración del control se analizó por duplicado dos veces al día durante 20 días. Hubo una diferencia de al menos dos horas entre los análisis realizados el mismo día. Se calcularon los valores de la DE y el % CV intraseriales, entre días y totales. Los resultados se indican a continuación. Muestra N Media Intraserial Entre días Total DE CV (%) DE CV (%) DE CV (%) ,94 0,08 2,77 0,06 2,10 0,12 4, ,14 0,18 1,83 0,23 2,34 0,34 3, ,69 0,82 3,23 0,73 2,87 1,14 4,44 Criterios de aceptación: <10% CV tota Sustancias interferentes Los estudios de interferencia se llevaron a cabo utilizando el documento NCCLS Protocol EP7-A2 8 como directriz. Se añadieron al suero concentraciones clínicamente elevadas de los siguientes interferentes potenciales con concentraciones conocidas de topiramato (aproximadamente 5 y 20 µg/ml). Cada muestra se analizó con el análisis de topiramato QMS y con un control sérico de topiramato. Todas las sustancias produjeron un error ±10% en la detección de topiramato. Los resultados se muestran a continuación. Sustancia interferente del interferente Ácido úrico Albúmina Bilirrubina Colesterol 30 mg/dl 12 g/dl 70 mg/dl 250 mg/ml *HAMA = anticuerpos humanos antirratón 13

14 Sustancia interferente del interferente Factor reumatoide 500 UI/mL Gammaglobulina 12 g/dl HAMA tipo 1* concentración humana normal HAMA tipo 2* concentración humana normal Hemoglobina 1000 mg/dl Heparina 185,5 USP/mL Triglicéridos 825 mg/dl *HAMA = anticuerpos humanos antirratón Especificidad Se analizó la reactividad cruzada de los metabolitos conocidos del topiramato. También se analizaron otros medicamentos que se administran de rutina con el topiramato, con el fin de determinar si estos compuestos afectan a la cuantificación de las concentraciones de topiramato con el análisis de topiramato QMS. Se añadieron concentraciones elevadas de estos compuestos a mezclas de suero que contenían concentraciones terapéuticas bajas y altas de topiramato. Las muestras se analizaron y a continuación se compararon las concentraciones de topiramato de las muestras que contenían sustancias Metabolitos Los metabolitos del topiramato se encuentran principalmente en la orina de los pacientes tratados con topiramato. 9,10 Sin embargo, no se detectan a concentraciones clínicamente significativas en el plasma ni en el suero. Es por tanto poco probable que el metabolismo del topiramato afecte a los resultados obtenidos con el análisis de topiramato QMS en plasma o en suero. Se comprobó la reactividad cruzada del siguiente metabolito. 14

15 Metabolito 9-Hidroxitopiramato Conc. del metabolito baja alta Porcentaje de reactividad cruzada baja alta Porcentaje de interferencia 4,00 19,75 14,50 18,33 2,55 8,00 22,63 12,50 44,03 4,49 32,00 15,56 18,25 137,19 30,62 Interferencia de otros fármacos Se llevaron a cabo estudios con el análisis de topiramato QMS para investigar si alguno de los compuestos que se administran habitualmente tienen algún efecto sobre la concentración de topiramato recuperada. Se añadió una concentración elevada de cada compuesto a suero normal humano que contenía concentraciones conocidas de topiramato (aproximadamente 5 y 20 µg/ml), y se analizó junto con un control sérico de topiramato. Todos los compuestos produjeron un error ±10% en la detección del topiramato. Los resultados se muestran a continuación. Compuesto del compuesto Compuesto del compuesto Acetozolamida 40 Etosuxamida 252 Ácido acetilsalicílico 67 Famotidina 0,97 Ácido salicílico 598 Felbamato 243,33 Ácido valproico 100,67 Fenelzina 14,38 Alprazolam 2,0 Fenobarbital 40 Amitriptilina 1,0 Flurazepam 17,5 Atenolol 10,33 Furosemida 3,7 15

16 Compuesto del compuesto Compuesto del compuesto Cafeína 60 Gabapentina 93 Carbamazepina 30 Hidroclorotiazida 6,0 Clonazepam 0,18 Lamotrigina 45 Clorazepato 2,0 Levetiracetam 124 Clortalidona 64 Metisergida 5,2 Diazepam 5,1 Metoprolol 5,25 Diclorfenamida 32 Nadolol 121 Naproxeno 509 Sulfanilamida 1500 Nimodipino 75 Tolbutamida 642 Nortriptilina 1,0 Verapamil 1,6 Paracetamol 31 Vigabatrin 112 Primidona 40 Zonisamida 122 Protriptilina 1,03 Fármacos con reactividad cruzada Se investigó la reactividad cruzada de los anticuerpos anti ibuprofeno, fenitoína y tiagabina a las concentraciones siguientes. Se añadió una concentración elevada de cada compuesto a suero normal humano que contenía concentraciones conocidas de topiramato (aproximadamente 5 y 20 µg/ml), y se analizó junto con un control sérico de topiramato. Los resultados se muestran a continuación. 16

17 Compuesto Conc. baja alta Porcentaje de reactividad cruzada baja alta Porcentaje de interferencia Fenitoína 20 5,48 2,25 28,14 4,86 Ibuprofeno 500 0,09 0,19 11,38 4,39 Tiagabina 250 0,49-0,50 29,60 5,35 Debe tenerse cuidado al interpretar los resultados del análisis de topiramato QMS de pacientes que tomen cualquiera de los compuestos anteriores. 17

18 BIBLIOGRAFÍA 1. OrthoMcNeil Pharmaceutical, Inc. Topamax monograph, Raritan, NJ Revision Date August Dasgupta A, Dean R, Saldana S. et.al. Absorption of therapeutic drugs by barrier gels in serum separator blood collection tubes. Am J Clin Pathol 1994:101(4): Johannessen SI, Battino, D, Berry DJ. et.al. Therapeutic Drug Monitoring of the Newer Antiepileptic Drugs. Ther Drug Monit. 2003;(25): Tholen DW, Kroll M, Astles, JR et.al. Evaluation of the linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach; Approved Guideline (EP6-A). Wayne, PA. The National Committee for Clinical Laboratory Standards, Krouwer, JS, Tholen DW, Garber, CC, et.al. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline-Second Edition (EP9-A2). Wayne, PA: The National Committee for Clinical Laboratory Standards, Bablok W, Passing H, Bender R, Schneider B. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry. Part III. J. Clin Chem Clin Biochem 1988;26(11): Tholen DW, Kallner A, Kennedy JW, et.al. Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline-Second Edition (EP5-A2). Wayne, PA: The National Committee for Clinical Laboratory Standards, McEnroe RJ, Burritt MF, Powers DM, et.al. Interference Testing in Clinical Chemistry: Approved Guideline-Second Edition (EP7-A2). Wayne, PA: The National Committee for Clinical Laboratory Standards, Britzi M, Sobak S, Isoherranen N. et.al. Analysis of Topiramate and its Metabolites in Plasma and Urine of Healthy Subjects and Patients with Epilepsy by Use of a Novel Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Assay. Ther.Drug. Monit. 2003;(25): Britzi M, Perucca E, Soback S. et.al. Pharmacokinetic and Metabolic Investigation of Topiramate Dispostion in Healthy Subjects in the Absence and in the Presence of Enzyme Induction by Carbamazepine. Epilepsis 2005;(46):

19 MARCAS COMERCIALES Todas las marcas comerciales son propiedad de Thermo Fisher Scientific Inc. y sus filiales. Microgenics Corporation Fremont Blvd. Fremont, CA USA 19