P.C.R. Utilidad Clínica Resultados. Dra. Alicia Sáez. H. U. Santa Cristina. Madrid
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- Juan Antonio Sevilla Lozano
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1 P.C.R. Utilidad Clínica Resultados Dra. Alicia Sáez H. U. Santa Cristina. Madrid
2 HPV PERSISTENCIA Cancer Cervical
3 Historia Natural de la Infección GRAN NUMERO DE MUJERES JOVENES SE INFECTAN POR HPV RESOLUCION ESPONTANEA SIN CONSECUENCIAS INFECCION PERSISTENTE EN 10-20% DESPUES DE LOS ANOS POBLACION DIANA MAYOR RIESGO HGSIL CA CERVICAL
4 Infección Genital por HPV ITS más frecuente. Problema de salud pública de creciente importancia. La segunda infección con mayor coste económico después del VIH. Mayoría son subclínicas. Sólo pueden diagnosticarse mediante la detección del DNA viral.
5 Infección Enfermedad Cofactores de Adquisición: - Edad inicio de la actividad sexual - Nº parejas sexuales propias/compañero Cofactores de Progresión: - Virales - Genéticos. Cofactores de Invasión: - Factores angiogénicos
6 Secuelas de la Enfermedad por HPV Cancer cervical. Cancer vulvar. Cancer anal. Cancer de pene. Condilomas. Alteraciones de bajo grado citología.
7 Cancer Cervical La infección persistente de tipos de HPV de alto riesgo oncogénico es la causa primaria. Está precedido de lesiones precancerosas sin sintomatología clínica. Si el virus es detectado en estos estadíos, TEORICAMENTE podríamos prevenir todos los casos de cáncer de cervix.
8 Características HPV Familia Papillomaviridae Virus DNA de doble cadena Virus oncogénicos. nicos. Dificiles de propagar en cultivos celulares Infectan tejido epitelial altamente diferenciado
9 Características HPV Taxonomía a basada homología a del DNA >200 tipos diferentes. >80 se conoce su secuencia genética. Más s de 30 tipos infectan la mucosa genital: Alto riesgo (AR): LGSIL, HGSIL y Ca. invasivo. Bajo riesgo(br): Condilomas y LGSIL.
10 HPVs Oncogénicos Secuencias genómicas con actividad oncogénica, E6 y E7, y se expresan en los cánceres. Integración del VPH en el DNA celular ocurre en la mayoría de los cánceres Interrupción del control del ciclo celular normal.
11 Mecanismos de Oncogénesis
12 Vías de Transmisión Transmisión sexual. Fómites Transmisión vertical. No sexual (Papilomatosis respiratoria recurrente)
13 P.C.R. CONSENSO Amplifica una región de DNA viral altamente conservada.(l1) MY09 y MY11. Amplificado 450 bp PGMY09/11 GP5+/GP6+. Sensibilidad picogramos de DNA viral
14 P.C.R. ESPECIFICA Basada en el diseño de primers específicos para regiones diferenciales entre los diferentes HPVs. Permite amplificar E6 y E7 de un determinado tipo, subtipo ó variante viral. Sensibilidad de femtogramo Especificidad próxima al 100%.
15 P.C.R. Basada en el diseño de primers específicos para regiones diferenciales entre los distintos HPVs. Detecta 13 genotipos de Alto Riesgo: 16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59 y 68. Permite la amplificación simultanea del DNA diana (HPV) y del DNA de ß-globina (Control Celular)
16 P.C.R.
17 Sensibilidad de la técnica Genotipo HPV Copias/ml H.U. SantaCristina
18 Sensibilidad de la técnica Genotipo HPV Copias/ml y
19 Objetivos Conocer la prevalencia de HPV en mujeres con alguna alteración citológica y/o colposcópica. Estudiar los tipos de HPV en mujeres positivas para ver la implicación de los genotipos vacunales en nuestra población.
20 Material y Métodos Estudio prospectivo en 3256 pacientes. Muestras de cervix recogidas en solución conservante Preserv Cyt. Se realiza AMPLICOR HPV en todas las muestras y en las positivas LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test. Las muestras se procesan sin conocer si la paciente tiene ó no lesion.
21 RESULTADOS La Edad media: 34,07 (13-83). El 63,1% de las pacientes eran españolas y el 36,9% inmigrantes. La prevalencia de HPV fue: 48,85% Muestras Inhibidas: 0,4% Muestra deficientes: 0,2% En el 70,2% (n=2292) casos dispusimos de los datos histológicos.
22 RESULTADOS HPV ,2 48, ,36 0,18 NEG.(n=1642) POS.(n=1594) INHIB.(n=12) M.defic.(n=6)
23 HPV - EDAD ,2 54,5 % ,6 35, <25 (n=678) 25-34(n=1209) 35-44(n=802) >44(n=567) Edad
24 EDAD Y COINFECCION , ,8 41,1 44,5 % < >44 Edad Coinfección 59,3 47,8 41,1 44,5 PCR positiva n=435 n=658 n=309 n=200
25 Infecciones múltiples lesión histológica PACIENTES CIN 2+ Infección por 1 tipo HPV-AR 15,8% P<0.01 Infección por 2 ó más tipos HPV-AR 28,0%
26 Presencia de HPV Lesión citológica 60 % HPV ,0 22,5 47,2 0 NEG. n=275 ASCUS n=676 AGUS n=40 HPV n=214
27 Presencia de HPV Lesión citológica % ,6 95, LGSIL n=646 HGSIL n=430 Ca. n=11
28 Paises de Origen % HPV ,8 44,5 P<0,05 62,8 P<0,01 47,5 Española A.Latina P. Este Otros
29 EVALUACION CLINICA AMPLICOR HPV SENSIBILIDAD: 96.3% ESPECIFICIDAD: 95.6% VALOR PREDICTIVO NEGATIVO: 96.7%
30 LINEAR ARRAY HPV Identifica 37 genotipos anogenitales: Tipos de Alto y Bajo riesgo Utiliza un pool de primers consensus y un control de ß-globina. Hibridación con Sondas específicas fijadas sobre la tira. Detección colorimétrica.
31 LINEAR ARRAY HPV Límite de detección es muy amplio: 120 copias/ml. HPV copias/ml. HPV 64 Para la mayoría de los tipos: 900 copias/ml. Detecta coinfecciones.
32 LINEAR ARRAY HPV
33 Genotipos HPV TIPO58 5% TIPO53 6% TIPO51 7% TIPO16 18% TIPO31 7% TIPO6 TIPO11 TIPO16 TIPO18 TIPO26 TIPO31 TIPO33 TIPO35 TIPO39 TIPO40 TIPO42 TIPO45 TIPO51 TIPO52 TIPO53 TIPO54
34 Genotipos vacunales HPV 11(1%) HPV 6 (2%) HPV16 (18%) HPV18 (4%) OTROS HPV (75%)
35 Genotipos en CIN 2+ TIPO HPV DISTRIBUCION HPV 16 44,0% HPV 31 12,7% HPV 51 10,2% HPV 58 9,8% HPV 52 8,4% HPV 33 8,2% HPV 18 6,1% HPV 45 2,5%
36 CONCLUSIONES Atendiendo al pais de origen: Españolas la prevalencia de HPV : 44.5%. Otras nacionalidades la prevalencia : 58.3%. El 48.8% de las pacientes con alguna alteración citológica y/o colposcópica tenían HPV. El 42% de las mujeres con ASCUS tienen HPV de Alto riesgo en cervix.
37 CONCLUSIONES II El HPV tipo 16 fue significativamente más m frecuente (p<0.001) que el resto de los genotipos encontrados. Cuando el HPV tipo 16 estaba presente el 96.8% de las pacientes presentaban alguna alteracíon en la citología. En el 100% de los carcinomas y en más m s del 95.9% de los HGSIL el HPV estaba presente
38 Utilidad Clínica del HPV P.C.R. Identificación de la población diana. Orienta la conducta terapeútica en mujeres con alteración en la citología. Seguimiento post-tratamiento. Valor predictivo negativo cercano al 100
39 Futuro Nuevos marcadores moleculares. - Enfermedad significativa - Persistencia de infección - Potencial de progresión. Líneas de estudio definidas como de alta prioridad por el C.D.C.
40 Necesitamos mantener el cribado de HPV en la era de la vacunación? Prevalencia de los genotipos vacunales en nuestra serie: 25%. Lesiones CIN 2+ (Tipos 16/18): 50%. Necesitaríamos disponer de más datos de protección cruzada vacunas actuales frente a otros tipos no incluidos.
41 Cambios en la Prevencion del Cancer Cervical Vacunacion general en la poblacion adolescente. Deteccion sistematica de HPV en mujeres >30 años. POBLACION : HPV negativo y Citología negativa que podran espaciar sus controles hasta cinco años.
42 Cambios en la Prevencion del Cancer Cervical EN MUY POCOS AÑOS PODEMOS DISPONER DE MULTIPLES HERRAMIENTAS: MEJORAR EL CRIBADO DEL CANCER CERVICAL. RESTRINGIR LA DISEMINACION DEL VIRUS. EL CANCER CERVICAL TIENE UNA ALTA PRIORIDAD DENTRO DE LOS ESFUERZOS GLOBALES PARA PREVENIR EL CANCER.
43 AGRADECIMIENTOS SERVICIO DE GINECOLOGIA. ANATOMIA PATOLOGICA. DOCUMENTACION CLINICA. UNIDAD DE BIOLOGIA MOLECULAR.
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