FISIOLOGÍA DE LOS LÍQUIDOS CORPORALES

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1 UNCPBA FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS DEPARTAMENTO DE FISIOPATOLOGÍA FISIOLOGÍA DE LOS LÍQUIDOS CORPORALES GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS

2 FISIOLOGÍA DE LOS LÍQUIDOS CORPORALES 2018 Introducción El propósito docente del curso es introducir al alumno a la fisiología de la sangre y de otros líquidos corporales de manera que sirva de sustento para el estudio de disciplinas posteriores en la currícula y, así mismo, capacitarlo en técnicas hematológicas. Objetivos En el área cognoscitiva: que el alumno logre: a) conocer la interacción existente entre los fluidos corporales, sus componentes celulares y, los diferentes órganos y tejidos del organismo animal. b) comprender el rol de los líquidos corporales en los precisos mecanismos regulatorios que establecen el equilibrio metabólico de un organismo. En el área procedimental: capacitar al alumno para adquirir habilidades para la realización de las sencillas técnicas hematológicas de la rutina clínica. En el área actitudinal: adquirir actitudes tendientes a cumplimentar las exigencias de seguridad y controlar la realización de las tareas prácticas de laboratorio. Contenidos Los contenidos de este curso han sido seleccionados bajo las siguientes premisas: 1) Posibilitar su integración con los contenidos ya brindados a los alumnos en los cursos previos: Embriología e Histología, Química. 2) Cubrir la necesidad de que sirvan como sustento formativo para el correcto tratamiento de contenidos de los cursos posteriores. 3) Contribuir a la formación integral del individuo para el ejercicio de la profesión, en cualquiera de sus ramas. PROGRAMA TEMÁTICO 1. Aspectos físico-químicos de los líquidos. Propiedades físicas del agua, estructura. Su función como solvente. Difusión y Osmosis. Soluciones: conceptos generales y propiedades. Presión osmótica. Soluciones isotónicas, hipertónicas e hipotónicas. Dispersiones coloidales. Propiedades químicas del agua. Ionización. Química ácido base. 2

3 2. El agua corporal. Composición porcentual en los distintos tejidos. Compartimientos del agua: Espacio Intracelular. Espacio Extracelular: intersticial e intravascular. Composición química de cada uno. Su medición. Balance hídrico: las pérdidas de agua. Causas de las pérdidas. Ѐ Las ganancias de agua: agua de ingesta y agua metabólica. 3- Sangre. Composición. Propiedades físico-químicas. Funciones generales. Elementos celulares. Diferencia entre las distintas especies. Volemia Plasma. Composición química. Compuestos orgánicos: proteínas plasmáticas. Origen y funciones de cada grupo. Factores que regulan sus concentraciones. Lipoproteínas. Otros compuestos orgánicos: glucosa, lípidos, enzimas, urea, ac. Úrico. etc. Compuestos inorgánicos. Sistemas buffers. El plasma como vía de transporte Células sanguíneas. Eritrocitos. Estructura de membrana. Citoesqueleto. Deformabilidad. Canales iónicos. Transporte de metabolitos a través de la membrana. Envejecimiento de la membrana. Hemocateresis. Metabolismo energético: glicólisis anaerobia y vía de las pentosas. Sistemas antioxidantes enzimáticos y no enzimáticos. Hemoglobina: Clases de hemoglobina. Estructura química. Transporte de oxígeno y de dióxido de carbono. Moduladores alostéricos. Curva de disociación. Propiedades buffer. Leucocitos. Granulocitos: Origen y cinética. Regulación de su producción. Funciones. Recuento. Factores que lo modifican. Monocitos: Origen y cinética. El monocito en sangre periférica y los macrófagos tisulares. Funciones del sistema mononuclear fagocítico. Linfocitos: Generalidades y funciones. Fórmula leucocitaria absoluta y relativa. Plaquetas. Estructura. Función. Número. 4- Eritropoyesis. Eritropoyesis y Eritrocinética: Estadíos. Stem cells. Diferenciación celular. Eritropoyetina. Activación. Mecanismo de acción. Receptores. Requerimientos para una eritropoyesis normal: Vitamina B12 y Ácido Fólico. Eritropoyesis embrionaria y fetal. Metabolismo del hierro: absorción, transporte, cinética, utilización, almacenamiento y excreción. 5- Hemostasia. El sistema extravascular y vascular. Fase plaquetaria de la hemostasia. Sistema plasmático de coagulación. Proceso de coagulación: Mecanismo 3

4 intrínseco y extrínseco. Papel del calcio y de la vitamina K. Sus inhibidores. Anticoagulantes In Vivo e In Vitro. El sistema fibrinolítico. Sus activadores e inhibidores. Sistema Kalicreína - quininas. 6.- Otros líquidos. Linfa: Origen, composición química y funciones. Líquido cefalorraquídeo: Origen, composición química y funciones. Trabajos Prácticos TP Nº1. Citología hemática. Método: Recuento de glóbulos rojos y de glóbulos blancos. TP Nº2. Parámetros hematológicos. Hematocrito: Microhematocrito. Eritrosedimentación (observación). Índices hematimétricos (conceptos). Frotis sanguíneo. Fórmula leucocitaria absoluta y relativa. BIBLIOGRAFÍA Se le proporciona al alumno material editado sobre Temas de Fisiología de los Líquidos Corporales, abordando los mismos según requerimientos de la medicina veterinaria. Se induce a la lectura de temas específicos en el material bibliográfico existente en la Biblioteca de la Universidad que se adjunta. Se ha editado una guía de Trabajos Prácticos provista de los contenidos metodológicos desarrollados en las clases prácticas. Devlin, M.T. BIOQUIMICA. Libro de texto con aplicaciones clínicas. (1985). Tomo II. Edición VI. Editorial Reverté. Guyton, A. TRATADO DE FISIOLOGÍA MEDICA. (1992). Editorial Panamericana. Reece, W.O. DUKES FISIOLOGÍA DE LOS ANIMALES DOMÉSTICOS. (2010). Editorial Acribia. Schalm, O.W. HEMATOLOGÍA VETERINARIA. (1984). Editorial Hemisferio Sur. Selva. Iovene EL LABORATORIO EN LA CLÍNICA. (1975). Editorial Panamericana. Stryer, L. BIOQUIMICA. 4 Edición. (1995). Editorial Reverté. Wintrobe, M. HEMATOLOGÍA CLÍNICA. (1994). Tomos I, II, III. Editorial Intermédica. 4

5 CRONOGRAMA TENTATIVO* *Sujeto a modificaciones que serán informadas en la cartelera y en la página web. FECHA TEMA / ACTIVIDAD DE LA CLASE CARÁCTER DE LA CLASE o ACTIVIDAD hs Aspectos físico-químicos de los Clase teórica líquidos. Agua, propiedades químicas. Difusión Osmosis. García DOCENTE/S Sangre. Generalidades. Plasma. Células sanguíneas Lugar: Aula 2- Aulas Comunes hs Eritrocitos. Eritropoyesis. Leucocitos Lugar: Aula 2- Aulas Comunes 1 TP 1: Citología hemática 13hs Com A 14:30 hs Com B 16 hs Com C 17:30 hs Com D Lugar: Laboratorios- Edif. Biología (Submarino) hs Agua Corporal. Metabolismo del hierro Lugar: Aula 2- Aulas Comunes 1 TP 2: Parámetros hematológicos 13hs Com A 14:30hs Com B Lugar: Laboratorios- Edif. Biología (Submarino) hs Hemostasia. Lugar: Aula 2- Aulas Comunes 1 TP 2: Parámetros hematológicos 13hs Com C 14:30hs Com D Lugar: Laboratorios- Edif. Biología (Submarino) CONSULTA PARCIAL 12-14hs hs Recuperatorio de TP 9 hs PARCIAL 14 hs Transporte de gases Linfa y otros líquidos Lugar: Aula 2- Aulas Comunes 1 Clase teórica Clase teórica Clase teórica Trabajo Práctico Clase teórica Trabajo Práctico Clase teórica Trabajo Práctico Clase teórica Quiroga Quiroga Alonso Alonso, Carabetta, Imperiale Aba Alonso, Carabetta, Cadenazzi, Imperiale Alonso, Romanelli. Alonso, Romanelli, Carabetta, Cadenazzi, Imperiale Alonso, Romanelli, Carabetta, Cadenazzi Alonso, Romanelli, Carabetta, Cadenazzi Alonso, Romanelli, Carabetta, Cadenazzi Quiroga 5

6 CONSULTAS RECUPERATORIOS hs Alonso, Romanelli, Carabetta, Cadenazzi hs RECUPERATORIO PARCIAL Lugar: Aula 2- Aulas Comunes 1 Alonso, Romanelli, Carabetta FERIADO SEMANA DE MAYO (FINALES) 6

7 Partes MICROSCOPIO ÓPTICO Ocular Tubo Revólver Brazo Tornillo macrométrico Tornillo micrométrico Objetivo Pinzas Platina Condensador Diafragma Fuente de luz Pie Funcionamiento Acomodar la posición del espejo (en el lugar de la fuente de luz) de modo que capte la fuente lumínica dispuesta sobre la mesada. Utilizar el condensador y el diafragma para seleccionar la iluminación correcta. Colocar el portaobjetos sobre la platina y sostener con las pinzas. Girar el revólver para que el objetivo quede alineado con el ocular. Usar los tornillos macro y micrométrico para el enfoque final. Si se utiliza el objetivo de inmersión (100X), colocar una gota de aceite de cedro (aceite de inmersión) sobre el portaobjeto. Bajar lentamente el objetivo hasta tocar el preparado y enfocar con el tornillo micrométrico. Al finalizar el uso del microscopio es recomendable la limpieza del objetivo de inmersión con Xilol. 7

8 TRABAJO PRÁCTICO Nº1 CITOLOGÍA HEMÁTICA TOMA DE MUESTRA La toma de muestra se realiza en diferentes sitios según la especie animal: ESPECIE BOVINO OVINO EQUINO PORCINO CANINO FELINO AVES SITIO DE EXTRACCIÓN Vena yugular, vena caudal o coccígea o vena mamaria Vena yugular Vena yugular, vena cava o vena medial de la oreja Vena cefálica antebraquial, vena safena o corte en la oreja Vena radial, pulpejos digitales o corte en la oreja Vena media del ala, corte en cresta o barbullones PROCEDIMIENTO DE EXTRACCIÓN Desinfectar, rasurar e ingurgitar la zona de venopunción. Recolectar la muestra en jeringas de plástico y luego pasar a tubo con anticoagulante. Los anticoagulantes más utilizados son: ACIDO ETILENDIAMINOTETRACÉTICO (EDTA) Es una solución equilibrada de sales sódicas y potásicas de EDTA (0,342 mol/l) ph 7,2. Impide la coagulación removiendo el calcio, que es un elemento esencial de la coagulación de la sangre. Se utiliza en hematología y química sanguínea, ya que los elementos celulares se mantienen estables sin presentar hemólisis hasta los 8 días de conservación. También, evita la agregación plaquetaria y es adecuado para el recuento de plaquetas. Se utiliza cierta cantidad para impedir la coagulación de la sangre: - 70 µl (una gota) para 9ml de sangre - 50 µl para 7ml de sangre - 20 µl para volúmenes de hasta 2,5ml HEPARINA AL 0,5%: Actúa formando un complejo con la antitrombina III del plasma e impide la formación de trombina. Reduce la hemólisis al mínimo después de la extracción, pero tiene la desventaja de alterar la citomorfología de la célula. No es posible utilizarla en contadores hematológicos, pero se podría usar en conteos manuales de células. Se utiliza una gota para 5ml de sangre. 8

9 CITRATO DE SODIO AL 3,8% O ANTICOAGULANTE DE WESTERGREEN Impide la coagulación por extracción de calcio mediante precipitación o unión en forma no ionizada. Se utiliza para estudios de hemostasia (1ml de anticoagulante/ 9ml de sangre: dilución 1/10) y para determinar eritrosedimentación (1ml de anticoagulante/ 4ml de sangre: dilución 1/5). En la actualidad se utiliza el citrato tamponado (citrato de sodio y ácido cítrico) porque ayuda a estabilizar el ph del plasma. Para realizar el TP 1 tendremos en cuenta algunas determinaciones mencionadas a continuación: HEMOGRAMA COMPLETO Comprende: Concentración de glóbulos rojos, eritrocitos o hematíes:.[gr] Concentración de glóbulos blancos o leucocitos....[gb] Concentración de plaquetas.....[plaq.] Fórmula leucocitaria Porcentaje globular.(% GR) Concentración de hemoglobina:...[hb] Índices hematimétricos CONCENTRACIONES DE GLÓBULOS ROJOS Y BLANCOS MÉTODO: RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS Y DE GLÓBULOS BLANCOS OBJETIVO: Lograr que los alumnos determinen la concentración de glóbulos rojos y la concentración de glóbulos blancos (número de células por mm 3 de sangre). MATERIALES - Cámara cuenta glóbulos de Neubauer con retículo de Thoma - Tubos de ensayo - Pipetas y micropipetas - Líquidos de dilución para GLÓBULOS ROJOS: Se utilizan líquidos isotónicos como: Solución fisiológica (Cloruro de sodio al 9 por mil) o, Líquidos de Hayen: bicloruro de mercurio 0,5g Cloruro de sodio 1g Sulfato de sodio anhidro 5g Agua destilada 200ml - Líquido de dilución para GLÓBULOS BLANCOS: Ácido acético glacial al 2% (coloreada con azul de metileno). Este diluyente hemoliza los glóbulos rojos y colorea los núcleos de los glóbulos blancos para facilitar el recuento. - Tubos capilares - Cubrecámara - Microscopio óptico 9

10 La cámara de Neubauer se utiliza para el conteo de diferentes células como glóbulos rojos, blancos, plaquetas, bacterias, esporas de mohos y para cualquier recuento citológico. Es un portaobjetos grueso de vidrio óptico. Posee dos superficies laterales que sirven para rotular. En el tercio medio posee tres plataformas. La plataforma central está subdividida por una ranura trasversal en dos mitades. Éstas últimas están 0,1 mm más bajas que las plataformas laterales y cada una tiene una red de conteo (cuadrícula). La cuadrícula está dividida en 9 cuadrados de 1 mm x 1 mm cada uno (1 mm 2 ). En total 9 mm 2. Los 4 cuadrados de las esquinas, en esta figura denominados 1, 3, 7 y 9, están subdivididos en 16 cuadraditos y se utilizan para el recuento de glóbulos blancos. El cuadrado central se llama Retículo de Thoma, está dividido en 25 cuadrados y cada uno de estos se divide en 16 cuadraditos más pequeños (en total 400 cuadraditos). Se utiliza para el recuento de glóbulos rojos. Se cuentan todas las células contenidas dentro del cuadrado y las que tocan las líneas superior e izquierda de los cuadraditos interiores. No se cuentan los que están sobre la línea inferior derecha. Se lee en sentido de guarda griega. 10

11 METODOLOGÍA 1- Realizar la dilución en el tubo de ensayo, en una proporción de 1/200 para los GLÓBULOS ROJOS ó 1/20 para GLÓBULOS BLANCOS con el diluyente y homogeneizar. 2- Colocar el cubre sobre la cámara haciendo una leve presión. 3- Llenar el capilar con la dilución mencionada. 4- Dejar escurrir dos gotas de la mezcla contenida en el capilar, por delante del cubrecámara. Debe llenar el espacio entre la cámara y el cubre. 5- Dejar reposar 3 minutos, para que se depositen los glóbulos. 6- Observar al microscopio con un aumento de 40X para glóbulos rojos y con un aumento de 10X para glóbulos blancos. CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE GLÓBULOS ROJOS [GR] = (n x 10 6 /mm 3 ) Se aplica la siguiente fórmula: N x 200 x 10 x 400 = N x glóbulos rojos/ mm 3 de sangre 80 Donde: N: número de glóbulos rojos contados 200: título de la dilución 10: corrección de profundidad de la cámara para llevar a mm 3 de sangre 400: total de cuadraditos de la cámara 80: total de cuadraditos contados En la práctica el número de glóbulos rojos contados se multiplica por VALORES NORMALES DE [GR] (n x 10 6 / mm 3 de sangre) BOVINO: / mm 3 OVINO: / mm 3 EQUINO: / mm 3 EQUINO CARRERA: / mm 3 PORCINO: / mm 3 CANINO: / mm 3 FELINO: / mm 3 AVES: / mm 3 11

12 CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE GLÓBULOS BLANCOS [GB] = (n x 10 3 /mm 3 de sangre) Se aplica la siguiente fórmula: N x 20 x 10 = N x 50 glóbulos blancos/ mm 3 de sangre 4 Donde: N: número de glóbulos blancos contados 20: título de la dilución 10: corrección de profundidad de la cámara para llevar a 1 mm 3 de sangre 4: número de cuadrados En la práctica el número de glóbulos blancos contados se multiplica por 50. En el sistema internacional (S.I.) los glóbulos blancos se expresan por litro de sangre. VALORES NORMALES DE [GB] (n x 10 3 / mm 3 de sangre) BOVINO: / mm 3 OVINO: / mm 3 EQUINO: / mm 3 EQUINO CARRERA: / mm 3 PORCINO: / mm 3 CANINO: / mm 3 FELINO: / mm 3 AVES: / mm 3 VALORES NORMALES DE [Plaq.] (n x 10 3 / mm 3 de sangre) En las distintas especies: / mm 3 12

13 TRABAJO PRÁCTICO Nº2 PARÁMETROS HEMATOLÓGICOS PORCENTAJE GLOBULAR Métodos: HEMATOCRITO o MICROHEMATOCRITO OBJETIVO: Lograr que los alumnos midan la relación entre el volumen de glóbulos rojos y el volumen total de sangre, para determinar el valor del porcentaje globular (% GR). DEFINICIÓN: Relación entre el volumen de glóbulos rojos y el volumen total de sangre, expresado en porcentaje. Valor normal aproximado 30-50% según la especie. MATERIALES: - Tubos capilares para microhematocrito: sin anticoagulante: con sangre anticoagulada o, con anticoagulante: con sangre sin anticoagulante - Microcentrífuga - Mechero o plastilina - Ábaco para lectura o regla METODOLOGÍA PARA EL MICROHEMATOCRITO 1- Posicionar el microcapilar en contacto con la muestra de sangre con una inclinación que permita el ascenso por capilaridad de la misma, hasta 2 cm del otro extremo. 2- Sellar con calor o plastilina. 3- Colocar el microcapilar en la microcentrífuga a rpm durante 5 minutos. 4- Leer. Leucocitos (glóbulos blancos) y plaquetas 13

14 ERITROSEDIMENTACIÓN OBJETIVO: Lograr que los alumnos determinen la velocidad de sedimentación globular. DEFINICIÓN: Velocidad de sedimentación de los glóbulos rojos en un tubo o pipeta en un espacio de tiempo determinado según la especie. Cuando se deja reposar sangre con anticoagulante en tubos adecuados, se separan tres zonas: - inferior, constituida por los glóbulos rojos - media (de poco espesor) formada por glóbulos blancos y plaquetas - superior donde se encuentra el plasma No todas las muestras de sangre sedimentan a la misma velocidad; puede deberse a distintos factores como por ejemplo la viscosidad, la carga iónica de los glóbulos rojos, variaciones de contenido proteico plasmático, elementos lipídicos, entre otros factores. Existen factores fisiológicos que alteran la eritrosedimentación, como el sexo, la edad, la preñez, el ejercicio. MATERIALES: - Pipeta de Westergreen: es una pipeta de vidrio de 2,5 mm de diámetro interno y 30 cm de largo. Está graduada desde 0 a Soporte vertical para pipetas. Este posee en el extremo inferior un tapón de goma y en el superior una placa metálica con un resorte. - Anticoagulante de Westergreen (citrato de sodio al 3,8 g/100ml) METODOLOGÍA 1- Realizar una dilución 1/5 de la sangre. Colocar 2 ml de sangre en un tubo con 0,5 ml de citrato de sodio al 3,8%. 2- Mezclar con suavidad por inversión. 3- Cargar la pipeta de Westergreen hasta la marca Colocar la pipeta en posición vertical en el soporte. 5- Observar: ESPECIE Sedimentación en mm durante: 10 min 20 min 30 min 1 hora 24 horas BOVINO 2,25-4 OVINO 3-8,5 CAPRINO 2-2,5 CERDO EQUINO CANINO FELINO 7-23 Coles, EH. (1989). Patología y Diagnóstico Veterinarios. Interamericana-Mc Graw-Hill. 14

15 ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS Son una serie de índices que expresan diferentes características de los glóbulos rojos. Relacionan el porcentaje globular, la concentración de hemoglobina y la concentración de glóbulos rojos. OBJETIVO: Lograr que los alumnos conozcan los índices hematimétricos y valoren los mismos para el diagnóstico de diferentes enfermedades. METODOLOGÍA Conociendo el porcentaje globular por medio del hematocrito, la concentración de hemoglobina y la concentración de glóbulos rojos, pueden calcularse índices que son útiles para el diagnóstico de enfermedades sanguíneas en particular las anemias. VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (V.C.M.): es el volumen medio de cada eritrocito. Se expresa en femtolitros (fl). Relaciona el valor del porcentaje globular con la concentración de glóbulos rojos. Este valor permite clasificar las anemias en normocrómicas, microcíticas (VCM disminuído) y macrocíticas (VCM aumentado). V.C.M= Porcentaje globular x 10 Concentración de glóbulos rojos HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (H.C.M.): es el promedio de hemoglobina que tiene cada eritrocito. Se expresa en picogramos (pg). Relaciona la concentración de hemoglobina con la concentración de glóbulos rojos. Este resultado ofrece información sobre la deficiencia de hierro, clasifica los eritrocitos como normocrómicos o hipocrómicos. H.C.M= Concentración de hemoglobina x 100 Concentración de glóbulos rojos CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (C.H.C.M.): es la concentración de hemoglobina en el eritrocito promedio. Es decir, entre el peso y el volumen que lo contiene. Se expresa en g/dl. C.H.C.M= Concentración de hemoglobina x 100 Porcentaje globular 15

16 FROTIS O EXTENDIDO SANGUÍNEO DEFINICIÓN: Película fina de células sanguíneas extendida sobre un portaobjeto, el cual será coloreado para observar la morfología de las células al microscopio óptico y realizar la fórmula leucocitaria relativa. El frotis se puede realizar con sangre de punción capilar o con una pequeña gota de sangre venosa obtenida con jeringa, SIN ANTICOAGULANTE, porque altera la morfología celular. MATERIALES - Sangre capilar o venosa sin anticoagulante - Portaobjetos - Extensor - Microscopio - Bandeja para teñir - Alcohol metílico y colorante Giemsa METODOLOGÍA Realizar al menos dos frotis, de los cuales se tiñe uno y el otro se guarda. 1- Depositar una gota de sangre a 1 cm del extremo de un portaobjeto limpio y seco. 2- Apoyar el extensor sobre la superficie del portaobjeto, inmediatamente antes de la gota de sangre, con una inclinación de 45º aproximadamente. La gota se distribuye por el extensor. 3- Deslizar hacia atrás y extender a lo largo del portaobjeto a una velocidad uniforme. 4- Secar al aire. 16

17 5- Coloración de Giemsa: Fijar con alcohol metílico (Metanol) 3 min. Volcar y lavar con agua de la canilla. Agregar colorante Giemsa en una dilución 1/10. Cubrir el preparado durante 15 min. Lavar con agua corriente y secar al aire. Los elementos se observan de la siguiente manera: ELEMENTO Núcleos Gránulos eosinófilos Gránulos basófilos Gránulos neutrófilos Citoplasma linfocitos Citoplasma linfocitos, con gránulos azurófilos Eritrocitos Plaquetas COLOR Violeta rojizo Pardo rojizo Azul Violeta rojizo Azul Rojo purpúreo Rojizo pálido Azul con cuerpo en intenso violeta 6- Observación microscópica con objetivo de inmersión (100X). FÓRMULA LEUCOCITARIA DEFINICIÓN: F. LEUCOCITARIA RELATIVA: Es el porcentaje de cada tipo de leucocito con respecto al total. F. LEUCOCITARIA ABSOLUTA: Es el número de cada tipo de leucocito por mm 3 de sangre obtenido por la FÓRMULA LEUCOCITARIA RELATIVA y el recuento leucocitario total. OBJETIVO: Lograr que los alumnos determinen el % respectivo de cada tipo de leucocitos (neutrófilos, eosinófilos, basófilos, linfocitos y monocitos) contándolos en una preparación coloreada, que se observa al microscopio. Observación microscópica: Se observa con un objetivo de poco aumento (40X) para tener una idea global del extendido. Pasar al objetivo de inmersión 100X, que se utiliza con aceite de cedro sobre el preparado. El conteo debe ser representativo de los leucocitos, para lo cual se debe recorrer un área grande del frotis en forma sistemática, sin pasar dos veces por el mismo lugar. Se puede recorrer en forma de guarda griega. 17

18 FÓRMULA LEUCOCITARIA RELATIVA: se deben contar 100 elementos de la serie blanca y se obtiene el porcentaje de cada uno de los leucocitos. Ejemplo: ELEMENTOS CONTEO/ % Neutrófilos 68 Eosinófilos 2 Basófilos 0 Linfocitos 25 Monocitos 5 Total 100 FÓRMULA LEUCOCITARIA ABSOLUTA: se hace un cálculo con regla de tres. Ejemplo: si el número de leucocitos es 7.000/mm 3, para calcular los neutrófilos se realiza el siguiente cálculo: 100% leucocitos/mm 3 68% x: 68% x leucocitos/mm 3 = 4.760/mm 3 100% Por lo tanto, la FÓRMULA LEUCOCITARIA ABSOLUTA quedaría: ELEMENTOS Nº/mm 3 Neutrófilos Eosinófilos 160 Basófilos 0 Linfocitos Monocitos 350 Total

19 Parámetros hematológicos y bioquímicos séricos de distintas especies. Manual Merck de Veterinaria. Quinta Edición

20 Método Laser Automatizado 20