Determinación del contenido de azúcares...

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1 Determinación del contenido de azúcares... Liena Ceballos Tarafa y Ada Manresa González Cuba Farmacia Alimentos 2004,VII Encuentro Ibero Americano sobre las Ciencias Farmacéuticas y Alimentarias ISBN:

2 Determinación del contenido de azúcares en miel de Melipona beeicheii Lic. Liena Ceballos Tarafa; MsC. Ada Manresa González Instituto de Farmacia y Alimentos Universidad de la Habana Calle 23 #21425 e/ 214 y 222 La Coronela, La Lisa, Ciudad de la Habana.

3 Determinación del contenido de azúcares en miel de Melipona beeicheii. Resumen En Cuba además de la abeja Apis mellifera existen las abejas de la tierra pertenecientes a la especie Melipona beeicheii. Su miel, conocida vulgarmente como miel de la tierra es diferente a la de Apis mellifera en su sabor, consistencia y otras propiedades. Los estándares de calidad para esta miel no han sido establecidos, lo cual resulta necesario para cualquier intento de controlar su uso. El objetivo de este trabajo fue determinar la composición en azúcares mayoritarios y minoritarios en miel de abejas de la especie Melipona beeicheii. Para ello se evaluaron 24 muestras de la cosecha Se les determino el perfil de azúcares por HPLC. Se obtuvo que los azúcares mayoritarios que caracterizan a las mieles de M. Beeicheii son la fructosa y la glucosa, no presentan sacarosa, pero si trialosa, maltosa y turanosa. Existen diferencias en cuanto al lugar de procedencia de las mieles de Melipona beeicheii. Introducción La miel es el producto de la transformación del néctar de las flores o de exudaciones de otras partes vivas de las plantas, que después de ser operculado y transportado a la colmena en el estómago melífero de la abeja obrera, se almacena y madura en el panal para servir como alimento a las abejas y sus crías. (FAO/OMS, 1990)

4 En el mundo existen cerca de especies de abejas las cuales difieren en su tamaño, forma del cuerpo, estilo de vida entre otras características, pero comparten la de visitar flores para colectar alimento. La especie más conocida y difundida es la Apis mellifera cuya utilización en la polinización de cultivos, obtención de miel, cera y polen se remonta a varios siglos atrás. Además de esta, también existen las llamadas abejas de la tierra pertenecientes a la subfamilia Meliponinae, de las cuales hay más de 400 especies identificadas de cerca de 50 géneros. En Cuba la única especie conocida, de esta familia, es la Melipona beeicheii, la cual también se encuentra en Belice, Jamaica y México y se supone fue introducida por el hombre precolombino. (Genaro, 2000) La miel de los meliponinios o miel de la tierra difiere de la de abeja común en su sabor, consistencia y muchas otras propiedades. Se le han atribuido numerosas propiedades curativas a lo largo de los años, considerándola como remedio contra: cataratas, conjuntivitis, trastornos gastrointestinales, amebiasis, manchas de la piel, catarros, sinusitis entre otras.(medina, 1997) Los estándares de calidad para esta miel, a diferencia de la miel de Apis mellifera, no han sido establecidos aún, lo cual resulta necesario para cualquier intento de controlar su uso. Teniendo en cuenta que en Cuba no existen resultados publicados acerca de los parámetros que caracterizan la miel de la tierra, así como, el creciente incremento de su producción en los últimos años, el presente trabajo se traza

5 como objetivo determinar la composición en azúcares mayoritarios y minoritarios en miel de abejas de la especie Melipona beeicheii. Materiales y Métodos Para este estudio se emplearon 24 muestras de miel de Melipona beeicheii o abeja de la tierra, procedentes de las provincias de Pinar del Río (18), Ciego de Ávila (3) y Ciudad de la Habana (3), durante la cosecha del El perfil de carbohidratos fue determinado según los métodos armonizados de la Comunidad Económica Europea, el cual se basa en la determinación de los azúcares por Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC), siguiendo el método del estándar externo. (Bogdanov y col, 1997) Las condiciones cromatográficas fueron las siguientes: Columna: NH 2 Tracer Extrasil de 25 x0.4 DM, fase móvil: Acetonitrilo/ Agua (80:20),flujo: 1.3 ml/ min, temperatura del horno: 30 C, presión: psi., detector: Índice de Refracción, volumen de inyección: 10µl (inyección manual), integración: Software EZChrom. Los patrones empleados fueron glucosa, fructosa, maltosa, turanosa y melesitosa, comercializados por FLUKA (para HPLC) con una pureza mayor o igual al 99% en todos los casos. La sensibilidad del método es de 0.64 ppm como límite de detección y 2.12 ppm como límite de cuantificación. (Lorenzo y Mendoza, 2000)

6 Análisis Estadístico Se aplicó la Estadística, el Análisis de Varianza (ANOVA) de clasificación simple y en caso de existir diferencias entre muestras se aplicó la prueba de rangos múltiples de Duncan. (López, 1994) Resultados y Discusión El perfil correspondiente a los azúcares presentes en la miel de Melipona beeicheii se muestra en la Figura 1, donde puede observarse que se trata de un perfil con presencia de cantidades variables de mono y disacáridos destacándose dos picos significativos correspondientes a la fructosa y la glucosa. La Tabla 1 se aprecia que a pesar de que la fructosa se encuentra siempre en mayor proporción que la glucosa estos valores son en todos los casos inferiores a los reportados para la miel de Apis mellifera, lo cual se corresponde con los mayores porcientos de humedad reportados para este tipo de miel. (Ceballos, 2003) El porcentaje de azúcares reductores totales de las mieles de Melipona beeicheii no cumple con las especificaciones de calidad establecidas para la miel tradicional (Apis mellifera) en la cual deben ser mayores del 65%, incluso el límite superior para un 95% de confianza es prácticamente el valor mínimo establecido para la miel de Apis mellifera. La variabilidad obtenida no resultó de marcada importancia por cuanto los coeficientes de variación (CV) obtenidos

7 considerando muestras de diferentes áreas geográficas fueron inferiores a 7.34% en la miel de la tierra. En la Figura 2 se puede observar el perfil con predominio de la fructosa sobre la glucosa y ausencia de sacarosa o al menos no detectable a los niveles de sensibilidad del cromatógrafo. Al aplicar el Análisis de Varianza se encontró que existían diferencias altamente significativas (p<0.01) entre las regiones evaluadas. Las mieles de Melipona beeicheii obtenidas en la Ciudad de la Habana (Estación Experimental Apícola) son por lo general contentivas de los mayores porcentajes de fructosa, glucosa y azúcares reductores totales mientras que entre las muestras precedentes de Pinar del Río y Ciego de Ávila sólo existen diferencias significativas en el contenido de glucosa, lo cual apunta a la necesidad de incrementar el tamaño de muestra procedente de estas y otras provincias del país a fin de poder determinar si el área geográfica donde se obtiene la miel de la tierra no tiene una incidencia similar sobre la calidad del producto final, tal y como ocurre con la miel de Apis mellifera. La miel de Melipona beeicheii procedente de Ciudad de la Habana mostró una composición de azúcares mayoritarios más cercana a la miel de Apis mellifera al presentar un comportamiento similar en el contenido de fructosa, glucosa y azúcares reductores totales. Sólo se presentan diferencias en el contenido de sacarosa la cual no está presente en las mieles de Melipona beeicheii.

8 Sin embargo en la Tabla 2, es de destacar que en la miel de Melipona beeicheii procedente de Ciudad de la Habana la relación F/G fue significativamente menor con un valor promedio de En el perfil de azúcares que se muestran en las Figura 1 se observan en menor magnitud picos que permiten identificar la presencia de otros azúcares en pequeñas cantidades. La Tabla 3 muestra los azúcares detectados y su concentración para la miel de Melipona beeicheii. Puede observarse que se encuentra en mayor cantidad la trialosa y solo se encontró maltosa en 4 de las 24 muestras ensayadas. Por otra parte no se encontró presencia de melecitosa y sólo los lotes 7 y 11 tenían alguna cantidad de turanosa. Estos resultados no concuerdan con lo planteado por Bogdanov 1996, el cual al analizar 24 muestras de mieles de abejas del género meliponas, encontró valores medios de maltosa de y la ausencia de trialosa en todas las mieles estudiadas. Conclusiones Los azúcares mayoritarios que caracterizan a las miel de Melipona beeicheii son la fructuosa y la glucosa. Las mieles de M. beeicheii en Cuba no presentan sacarosa En estas mieles se encuentran presentes además trialosa, maltosa y turanosa. Las mieles de Melipona beeicheii presentan una relación F/G menor que 1.

9 Título en Inglés Determination of sugar content in Melipona beeicheii honeys. ABSTRACT In Cuba besides the Apis mellifera bees exist the stingless bees belongs to the Melipona beeicheii species. Their honey, well-known commonly as honey of the earth its different of Apis mellifera honey in their flavor, consistency and other properties. The standards of quality of this honey have not been established, that which is necessary for controlling their use. The objective of this work was to determine the sugars composition of honeys from Melipona beeicheii specie. Were evaluated 24 samples of crop. They are determined the profile of sugars by HPLC. It was obtained that the majority sugars that characterize honeys of M. Beeicheii are fructosa and glucose, they don't present sucrose, but if trialosa, maltosa and turanosa. They are differences between Melipona beeicheii honeys from diferent origin places.

10 Figuras Figura 1: Perfil de azúcares en miel de Melipona beeicheii. Figura 2: Resultados de la Prueba de Rangos Múltiples de Duncan entre 3 provincias del país. % b* a b a a b a b Fructosa Glucosa Sacarosa Azúcares reductores totales a a a b Pinar del Río Ciudad de la Habana Ciego de Ávila *Letras iguales significan que no existen diferencias significativas para p<0.01

11 Tablas Tabla 1: Estadística descriptiva de los azúcares mayoritarios en miel de Melipona beeicheii. n Media DS Límite Sup. Límite Inf. Mínimo Máximo %F %G %S %AR Leyenda: %F: porciento de fructosa, %G: porciento de glucosa, %S: porciento de sacarosa, %AR: porciento de azúcares reductores. Tabla 2: Relación Fructosa/Glucosa en mieles de M. beeicheii procedentes de diferentes provincias. Tipo de miel F/G Melipona beeicheii (Pinar del Río) 1.21 Melipona beeicheii (Ciudad de la Habana) 1.15 Melipona beeicheii (Ciego de Ávila) 1.11

12 Tabla 3: Contenido de azúcares minoritarios en mieles de Melipona beeicheii. No. muestra %Turanosa nd nd nd nd nd nd 0.34 nd nd nd 0.69 nd %Maltosa nd nd nd nd nd nd nd nd nd 0.11 nd nd %Trialosa nd nd nd 0.29 %Melecitosa nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd No. muestra %Turanosa nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd %Maltosa nd 0.62 nd nd nd nd nd nd %Trialosa nd nd nd nd nd nd nd %Melecitosa nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd *nd: no detectado.

13 BIBLIOGRAFÍA 1. BOGDANOV, S.; MARTIN, P.; LULLMAN, C., Harmonised methods of the European Honey Commission: Determination of sugars by HPLC. Apidologie, 1997,42-45 p. 2. BOGDANOV, S., Determination of sugars in stingless bee honey. Journal of Apicultural Research 23 (2), 1996,28-36p. 3. CEBALLOS, L., Estudio comparativo de parámetros de calidad de la miel de abejas de dos especies: Apis mellifera y Melipona beeicheii. Tesis de diploma, Universidad de la Habana, Ciudad de la Habana, FAO/OMS, Norma Regional Europea para la miel GENARO, J., Las abejas de Cuba: Himnoptera: Apoidea. Apiciencia 2 (1), LÓPEZ, R., Diseño estadístico de experimentos. Coedición UADY-UH, Mérida, México, LORENZO, D. M. y MENDOZA, L., Validación de la metodología analítica para la determinación cualitativa y cuantitativa de azúcares en miel de abejas por HPLC. Informe de resultados de validación, 2000,1-20p. 8. MEDINA, M., Extracto nutricional y curativo de las abejas sin aguijón. Apitec 6, 1997,19-24p.