MSc. Marcela Martínez Busi
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- Gerardo Esteban Córdoba Saavedra
- hace 5 años
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1 Estudio de la biodisponibilidad en plasma y cerebro de rata de los principales flavonoides contenidos en Achyrocline satureioides Lam. DC. (A. satureioides). MSc. Marcela Martínez Busi Mesa temática: Efectos fisiológicos de los compuestos bioactivos Departamento de Neuroquímica Instituto de Investigaciones Biológicas Clemente Estable
2 INTRODUCCIÓN El aumento en la expectativa de vida ha llevado al aumento de la prevalencia de enfermedades neurodegenerativas. Nuestro país presenta una de las mayores tasas de crecimiento del continente en la prevalencia de Enfermedad de Alzheimer. Falta de agentes terapéuticos para estas enfermedades lleva a la búsqueda de alternativas terapéuticas. Departamento de Neuroquímica: estudio de compuestos naturales con potencial efecto neuroprotector.
3 INTRODUCCIÓN Estrés oxidativo: situación de desbalance entre la generación celular de pro-oxidantes y la actividad de los sistemas antioxidantes, desencadenando procesos oxidativos que dañan componentes celulares que causan una disrupción del control y la señalización redox (Jones, 2006). Se ha asociado el consumo de frutas, verduras y plantas medicinales con una menor incidencia de trastornos asociados al estrés oxidativo. Este efecto puede ser debido a su alto contenido en moléculas con actividad antioxidante, entre las que se destacan los flavonoides (Middleton, 2000). Principales efectos de los flavonoides: neuroprotector, antioxidante, anticancerígeno, inmunomodulador, antiinflamatorio, antimicrobiano (Spencer y cols., 2012; Echeverry y cols., 2014; Williams y cols., 2004). Achyrocline satureioides Lam. DC. (A. satureioides): planta de uso medicinal, endémica de la región sur de América del Sur. Composición particularmente rica de flavonoides en su forma aglicona (Morquio, A. y cols., 2004).
4 ANTECEDENTES PARTICULARES Estudios con en el Departamento de Neuroquímica: - In vitro: A. satureioides presenta una potente capacidad citoprotectora y una particular combinación de flavonoides (Arredondo, F. y cols, 2004). - In vivo: administración oral ad libitum de A. satureioides por un período de 21 días reduce el volumen del infarto cerebral producido por la oclusión permanente de la arteria cerebral media en un modelo in vivo de isquemia cerebral en ratas (Rivera y cols., 2013).
5 HIPÓTESIS Los flavonoides contenidos en decocciones de A. satureioides o sus metabolitos son los responsables de sus efectos benéficos asociados a la prevención del daño por estrés oxidativo.
6 OBJETIVO GENERAL Estudiar la capacidad neuroprotectora de los flavonoides contenidos en Achyrocline satureiodes Lam. DC. in vitro y establecer su biodisponibilidad en cerebro y plasma de rata.
7 METODOLOGÍA I Decocción Aislamiento y purificación Elucidación estructural Confirmación
8 RESULTADOS I A partir de una decocción 5% p/v de A. satureioides se obtuvieron seis polifenoles aislados y elucidados estructuralmente: 3,5-dicafeoil ácido quínico; 4,5- dicafeoil ácido quínico; isoquercitrina; quercetina; luteolina y 3-O-metil quercetina
9 METODOLOGÍA II Cultivo primario CGN ( /well) Flavonoide H 2 O 2 180μM Viabilidad celular (MTT) Días in vitro
10 RESULTADOS II Luteolina presenta actividad Isoquercitrina 3-OMeQ muestra no actividad presenta actividad neuroprotectora Quercetina a neuroprotectora una concentración muestra de las actividad concentraciones 25 μm neuroprotectora utilizadas. a 10 μm neuroprotectora a 10 μm
11 METODOLOGÍA III SPE-C18 HPLC- ECD C-18
12 RESULTADOS III Quercetina: mostró linealidad en el rango de estudio post tratamiento de muestras de plasma control con agregado de estándar de quercetina. Luteolina: mostró linealidad en el rango de estudio post tratamiento de muestras de plasma control con agregado de estándar de luteolina. 3-OMeQ: mostró linealidad en el rango de estudio post tratamiento de muestras de plasma control con agregado de estándar de 3-OMeQ
13 METODOLOGÍA IV Ratas macho Sprague Dawley Administracón IG A. satureioides liofilizada reconstituída en agua, 10 mg quercetina Anestesia (Uretano) Extracción de sangre de la vena femoral (15, 30, 45, 60, 120, 180, 480 min) Perfusión, extracción de cerebro
14 RESULTADOS IV Cromatograma plasma 30 min post administración IG de A. satureioides HPLC-ECD C18, flujo; 1,2 ml/min en condiciones isocráticas.
15 Conc (μg/ml) Conc (μg/ml) Conc (μg/ml) RESULTADOS IV 0,25 Promedio Quercetina (μg/ml) 0,3 Promedio Luteolina (μg/ml) 0,2 0,25 0,15 0,2 0,1 0, ,15 0,1 0, Tiempo (min) Promedio 3-OMeQ (μg/ml) Tiempo (min) 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0, Tiempo (min) A partir del gráfico conc. vs tiempo se obtienen los principales parámetros farmacocinéticos
16 RESULTADOS IV A. satureioides (10 mg de quercetina) Vía Intragástrica Ka Concentración plasmática Ke Cantidad eliminada Conc C máx ABC t máx Tiempo
17 RESULTADOS IV Parámetro t 1/2 (absorción) (min) t 1/2 (eliminación) (min) Quercetina Luteolina 3-O-metil quercetina 28,1 21,9 19,6 236,6 888,7 665,5 C máx(µg/ml) 0,13±0,08 0,24±0,03 0,47±0,06 t máx (µg/ml) ABC (0-480) (µg/ml*min) Parámetros famacocinéticos obtenidos a partir de los gráficos de conc plasmática vs tiempo. 36,9 101,3 177,7 Flavonoide Conc en cerebro (μg/g) Quercetina 0,026 ± 0,013 Luteolina 0,140 ± 0,022 3-O-metil quercetina 0,181 ± 0,030 Se lograron cuantificar cantidades de μg/g tejido de todos los flavonoides en cerebro.
18 CONCLUSIONES A partir de la decocción acuosa de las partes aéreas de A. satureioides se elucidaron estructuralmente seis polifenoles de los cuales cuatro eran flavonoides. Tres de los cuatro flavonoides aislados presentaron actividad neuroprotectora in vitro. A concentraciones altas todos presentaron actividad neurotóxica per se. Los gráficos de concentración plasmática vs tiempo de los tres flavonoides (agliconas) muestran comportamiento típico de modelo monocompartimental con administración extravascular. Se lograron determinar los principales parámetros farmacocinéticos. Todos los flavonoides fueron cuantificados en su forma aglicona en cerebro.
19 AGRADECIMIENTOS Departamento de Neuroquímica: - Dr. Andrés Abin Carriquiry - Dr. Federico Dajas - Dra. Felicia Rivera - Msc. Carolina Echeverry - Lic. Florencia Arredondo Laboratorio de Bioanalítica (Parque Tecnológico de Pando): - Dra. Alejandra Rodriguez - Msc. Tania Possi
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