Modulo 3 TÉCNICAS RÁPIDAS EN MICROBIOLOGÍA DETECCIÓN DE ANTÍGENO (Ag). MODULO 3 TALLER DE MICROBIOLOGIA CLINICA Servicio de Microbiología Clínica Dr. Angel Ros Die. Servicio de Microbiología. Hospital Universitario Dr. Peset Anamnesis y exploración clínica Sospecha clínica y Microbiología La visita medica 1889. Jimenez Aranda Qué solicito? Qué muestra es la adecuada? Cómo, cuando se obtiene y transporta? Tinciones Cultivos Detección de Ag PCR Sensibilidad antibiótica Ciencia y caridad Picasso 1897 Imagen Hematología Bioquímica Diagnóstico directo Serología Diagnóstico indirecto Durero señalándose El bazo Robert A. Thom, 1960. Laenec con su estetoscopio Sospecho una infección? Localización de la infección 1
Pedir todo No Vale! Interpretación de los resultados La interpretación de los resultados no debe desvincularse nunca de los datos clínicos y epidemiológicos del enfermo E. Clínicas - Microbiología Detección rápida de Ag Objetivos Detectar la presencia de microorganismos o de fragmentos de los mismos en muestras clínicas En menos de 1 hora (una vez recibida la muestra). Útiles en aquellos casos en que el microorganismo causal crece lentamente o no crece en los medios de cultivo (Virus, parásitos.) 22315 Los resultados no se ven alterados por la administración previa de antimicrobianos. Limitaciones: S y E limitadas. No sensibilidad antibiótica. 2
Reacción Antígeno-Anticuerpo Reacción Antígeno-Anticuerpo Técnicas de detección Antígeno (ag) partícula extraña (germen) y anticuerpo (Ac) respuesta inmune humoral (células plasmáticas) La reacción Ag Ac es de gran afinidad. El Ag y su Ac son estructuras complementarias y especulares. Base de las técnicas de diagnóstico Ac monoclonales se obtienen de manera natural, recombinante o sintética. Fab Fc Técnicas de aglutinación Inmunocromatografía Enzimoinmunoanálisis Inmunofluorescencia Quimioluminiscencia Inmunocromatografía Detección de Ag. Técnicas rápidas Infección respiratoria Línea control Línea de reacción Ventana de muestra Antígeno Muestra Técnica S.pyogenes E. faríngeo IC VRS, Adenovirus y Influenza A y B S. respiratorias IC Streptococcus pneumoniae Orina. LCR IC, AP Legionella pneumophila SG1 Orina IC Rota, Adeno, Astro, Enterovirus Heces IC Giardia, Criptosporidium Heces IC Clostridium difficile Heces IC Helicobater pylori Heces IC Antígenos capsulares LCR, Orina AP Plasmodium falciparum, vivax, ovale Sangre IC Cryptococcus neoformans Sangre, LCR AP 3
Muestras en el diagnóstico de la infección respiratoria Detección Ag de S. pyogenes T. R.S: moco nasal, exudado faríngeo, moco nasofaríngeo T. R. I: esputo, líquido pleural, broncoaspirado, material obtenido por broncoscopia. En orina. Hemocultivos Causa amigdalitis, erisipela, impétigo, celulitis, fascitis. Complicaciones inmunológicas tardías. Muestra Exudado faríngeo para Ag y cultivo. Cómo? parte mas posterior de la faringe o amígdalas. Evitando lengua, dientes, úvula, encías. Detección Ag de S. pyogenes Con qué? - Escobillón SIN medio: Ag - Escobillón CON medio: Cultivo A quién? Detección de Ag del Virus Respiratorio Sincitial, Adenovirus, Influenza A y B La infección vírica respiratoria aguda es la enfermedad Infecciosa mas frecuente en el ser humano Qué? - Lavados y aspirados nasofaríngeos Dónde? - Medio estéril específico Quién? -Sospecha clínica 4
Detección de Ag de Streptococcus. pneumoniae Principal causa de Neumonía (primera causa de mortalidad infecciosa) Principal causa de Meningitis Sensibilidad 0,5 ng/ml de antigeno PnC purificado (J. Domínguez. JCM. 2003). % Sensibilidad 86-90% Especificidad 71-90% Depende de cuadro y edad. Neumonía, Neumonia bacteriemica, Adultos ó niños. Reagudización de EPOC Detección de Ag de Streptococcus. pneumoniae La orina concentrada (OC) aumenta la sensibilidad de la técnica. El Ag persiste hasta 50 días si se emplea Orina diluida (OD) y más de 6 meses si emplea OC. La vacunación reciente posibles falsos + En niños portadores nasofaríngeos de neumococo es posible detectar Ag en orina (JCM 2003). Detección Ag Legionella Detección Ag Legionella L. pneumophilla 16 serogrupos. 90% Sg 1.Enfermedad del Legionario (Neumonía) y Fiebre Pontiac. No presentan los inconvenientes de las técnicas tradicionales y ha representado una revolución. Muy útil en el diagnóstico rápido de la legionelosis + al 3 día de clínica, pero permanece semanas. 5
Completar el estudio diagnóstico de la infección respiratoria En el caso de las neumonías se debe completar el estudio etiológico con hemocultivos, muestras del tracto respiratorio y serología con parejas de suero. El 1º en la fase aguda y el 2º a las dos tres semanas. Seroconversión Detección de Ag. Técnicas rápidas Infección gastro intestinal Antígeno Muestra Técnica S.pyogenes E. faríngeo IC VRS, Adenovirus y Influenza A y B S. respiratorias IC Streptococcus pneumoniae Orina. LCR IC, AP Legionella pneumophila SG1 Orina IC Rota, Adeno, Astro, Enterovirus Heces IC Giardia, Criptosporidium Heces IC Clostridium difficile Heces IC Helicobater pylori Heces IC Antígenos capsulares LCR, Orina AP Plasmodium falciparum, vivax, ovale Sangre IC Cryptococcus neoformans Sangre, LCR AP Técnicas rápidas en el diagnóstico de las gastroenteritis Detección de Ag Se puede detectar Ag en heces en la fase aguda, durante los 3-5días. La diarrea es la 2ª causa de mortalidad infecciosa Rotavirus/Adenovirus (40,41,42) Astrovirus y Norovirus (Norwalk-like) 75% diarreas a nivel mundial. Estacionales Solo en niños Norovirus: Brotes, en instituciones cerradas > 50% toxiinfecciones en USA. Astrovirus similar a Rotavirus. Niños y ancianos Diarrea crónica: Técnica de detección de antígenos de Giardia y/o Cryptosporidium. 6
Rota-Adenovirus Giardia lamblia y Cryptosporidium parvum Protozoos intestinales mas frecuentes. De transmisión oral-fecal. Reservorio aguas y alimento contaminados 1ª y 2ª causa más frecuente de gastroenteritis aguda no-bacteriana en niños de 6 meses hasta los 3 años. G. A. por Rotavirus: diarrea líquida con deposiciones abundantes sin sangre; con curso febril; no leucocitos en heces. Invasión del virus de los enterocitos del epitelio duodenal. Estacional 50% hospitalizados GEA infantil. G. A. por Adenovirus: diarrea inflamatoria del colon; deposiciones frecuentes y poco voluminosas; a menudo con fiebre. La diarrea puede contener sangre o moco. 15% Cryptosporidium (coccidio intracelular) produce el 7% de las diarreas infantiles en los países industrializados, y el 12% en los países en vías de desarrollo. Sintomatología: diarrea acuosa autolimitada en inmunocompetentes. En inmunodeprimidos como pacientes con SIDA produce enfermedad crónica y enfermedad extra-intestinal (a veces con formas fulminantes). Giardia. lamblia Trofozoito: 8 flagelos y 2 núcleos. Forma vegetativa que se alimenta y se reproduce. Quiste: forma infectante y resistente; sin flagelos, con 4 núcleos. Sintomatología: portadores asintomáticos (50%de los individuos infectados); formas graves de diarrea con malabsorción. Detección de Ag. Giardia y Cryptosporidium N=502 Giardia Cryptosporidium Sensibilidad (IC) Especificidad (IC) 100 (92,0-100) 99,1 (97,8-99,8) 100 (95,1-100) 99,5 (98,3-99,9 7
Detección de Ag y toxina de C. difficile Resultados técnica rápida Qué? Dónde? - Heces frescas - Bote de boca ancha Informamos -Presencia de Ag GDH +/-toxina A y/o B A quién? - Siempre asociado a la toma de antibióticos - Ancianos, hospitalizados Colitis pseudomembranosa grave Helicobacter. pylori Detección de Ag. Técnicas rápidas Infección S. N. C Se relaciona directamente con la gastritis crónica, úlcera gástrica, del intestino delgado, carcinoma gástrico y linfoma. Bacilos gram - negativos; curvos; microaerófilos; producción elevada de ureasa. Oxidasa +,y catalasa +. La colonización en el mundo desarrollado es del 30% La mayoría son asintomáticos. Permite establecer un diagnóstico inicial y verificar el éxito del Tº durante las 4-6 semanas posteriores al término de la terapia Antígeno Muestra Técnica S.pyogenes E. faríngeo IC VRS, Adenovirus y Influenza A y B S.respiratorias IC Streptococcus pneumoniae Orina. LCR IC, AP Legionella pneumophila SG1 Orina IC Rota, Adeno, Astro, Enterovirus Heces IC Giardia, Criptosporidium Heces IC Clostridium difficile Heces IC Helicobater pylori Heces IC Antígenos capsulares LCR, Orina AP Plasmodium falciparum, vivax, ovale Sangre IC Cryptococcus neoformans Sangre, LCR AP 8
Infección de S. N. C Técnicas rápidas en el diagnóstico de las infecciones bacterianas del S.N.C Indicaciones y muestras Qué? LCR, sangre, orina Cómo? Punción lumbar, hemocultivos Dónde? - Tubos estériles (tapón verde) - Muestra valiosa: priorizar A quién? Sospecha de meningitis/encefalitis. Sospecha de infección vírica: Serología Técnicas Qué informamos? Gram: presencia de leucocitos o linfocitos, presencia / ausencia de flora Azul de metileno: presencia de células inflamatorias y flora Antígenos capsulares en LCR y orina: detecta Haemophilus influenzae tipo b Neisseria meningitidis A, B, C, Y, W135 Streptococcus pneumoniae,streptococcus grupo B/ E coli K1 No sustituye al gram ni al cultivo!!! Útil en meningitis tratadas previamente Detección de Ag. Técnicas rápidas Parásitos Antígeno Muestra Técnica S.pyogenes E. faríngeo IC VRS, Adenovirus y Influenza A y B S.respiratorias IC Streptococcus pneumoniae Orina. LCR IC, AP Legionella pneumophila SG1 Orina IC Rota, Adeno, Astro, Enterovirus Heces IC Giardia, Criptosporidium Heces IC Clostridium difficile Heces IC Helicobater pylori Heces IC Antígenos capsulares LCR, Orina AP Plasmodium falciparum, vivax, ovale Sangre IC Cryptococcus neoformans Sangre, LCR AP Paludismo Detección de Ag P. falciparun /vivax, ovale NO sustituye a la tinción 2012: 207 millones de casos, la No como control del Tº mitad de la población mundial expuesta. Distingue entre especies. 2012: 627.000 muertes. >90% de las muertes en Africa en niños < 5 años. Tinción de Giemsa (sangre total) Presencia o no del parásito % de parasitemia 9
Detección de antígeno. Plasmodium spp. Detección de Ag. Técnicas rápidas Micosis invasiva vs Giemsa Sensibilidad Especificidad Pl. falciparum Ag HRPII 100% (31/31) 96% (206/215) Am J. Trop Med Hyg 2001 Pl. vivax 89% (58/65) 98% (177/181) Antígeno Muestra Técnica S.pyogenes E. faríngeo IC VRS, Adenovirus y Influenza A y B S.respiratorias IC Streptococcus pneumoniae Orina. LCR IC, AP Legionella pneumophila SG1 Orina IC Rota, Adeno, Astro, Enterovirus Heces IC Giardia, Criptosporidium Heces IC Clostridium difficile Heces IC Helicobater pylori Heces IC Antígenos capsulares LCR, Orina AP Plasmodium falciparum, vivax, ovale Sangre IC Cryptococcus neoformans Sangre, LCR AP Técnicas rápidas en las micosis invasivas. Cryptococcus neoformans Gracias por vuestra atención! Y Meningitis en inmunodeprimidos (VIH).El diagnóstico consiste en la visión directa (tinta china) y cultivo, a partir del LCR. El Crypto-LA test detecta el Ag polisacárido del Cryptococo, tanto en sangre periférica como en LCR. Es rápida y se produce incluso en las ocasiones en las que no se aísla en cultivo. Felices Vacaciones! 10