COMPORTAMIENTO REPRODUCTIVO DE VACAS SIBONEY DE CUBA DONANTES DE ÓVULOS EN UN PROGRAMA DE PUNCIÓN FOLICULAR IN VIVO (OPU)

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1 COMPORTAMIENTO REPRODUCTIVO DE VACAS SIBONEY DE CUBA DONANTES DE ÓVULOS EN UN PROGRAMA DE PUNCIÓN FOLICULAR IN VIVO (OPU) R. G. Denis 1, A.D. Gil 2, M.G. Chong 1, Emilia LLiteras 1, D S. Fuentes 1 1 Centro de Investigaciones para el Mejoramiento Animal de la Ganadería Tropical (CIMAGT). Ministerio de la Agricultura. Avenida 101 # entre 100 y 62. Loma de Tierra. Cotorro. Ciudad de La Habana. Cuba. fiv@cima-minag.cu 2 Universidad Agraria de La Habana (UNAH) RESUMEN Con el objetivo de evaluar el comportamiento reproductivo futuro en vacas del genotipo Siboney de Cuba utilizadas como donantes de óvulos en un programa de Punción Folicular in vivo (OPU), se estudió la fertilidad de 40 vacas después de sometidas a 16 sesiones de OPU durante dos meses con una frecuencia de dos veces por semana (grupo I). Se tomaron como control 36 vacas a las que no se les realizó la OPU y se incorporaban a su vida reproductiva entre los 40 y 60 días posparto (grupo II). El diagnóstico de gestación se realizó a los 20 días postinseminación por ultrasonografía y se confirmó entre los 40 y 50 días posteriores, se controló además la viabilidad de las crías después del parto. Estadísticamente los datos se analizaron a través del método de comparación de proporciones (SAS/STAT). No se encontraron diferencias significativas en los porcentajes de gestación alcanzados entre ambos grupos, que fueron del 70 y 63.8% en el primer servicio, 20 y 22.2% en el segundo servicio y 10 y 14% en el tercer servicio para los grupos I y II respectivamente. En la viabilidad de las crías después del parto tampoco se encontraron diferencias significativas entre ambos grupos por lo que se concluye que el proceso de OPU no afecta el estado reproductivo de la donante. Palabras claves: punción in vivo, ganado bovino Siboney, comportamiento ABSTRACT REPRODUCTIVE PERFORMANCE IN SIBONEY OF CUBA DONATING COW IN OVUM PICK UP (OPU) PROGRAM To evaluate the future reproductive performance of Siboney de Cuba cows used as ovule donors was evaluated in vivo follicular ovum pick up (OPU) program. The fertility of 40 cows after 16 OPU sessions (15 day pos partum) was measured for two month twice a day (group 1). A control group of 36 cows was used. They did not undergo OPU and were incorporated to the reproductive life 60 to 70 days post partum. Pregnancy diagnosis was carried out 20 days post insemination using an ultrasound scan. It was confirmed 40 to 50 days after the diagnosis. Viability of the calves was controlled after birth. There were no significant.data was statistically analyzed using a proportion comparison method (SAS/STAT). Significant differences were not found in the pregnancy percentage reached in both groups which were. 70 and 63.8% in the first service, 20 and 22.2% in the second service and 10 and 14% during the third service for groups I and II, respectively. Regarding calf s viability after the calving there were not significant differences between both groups. It is concluded that OPU process does not affect the reproductive state of the donor. Key words: ovum pick up, Siboney cattle, evaluate 17

2 INTRODUCCIÓN El Siboney de Cuba, surge a partir de un proyecto de cruzamiento que se desarrolló en la década de los años 60 del pasado siglo y por la necesidad de contar con genotipos intermedios Bos Tauro x Bos indicus. En los primeros años de la década del 80, se definió a este animal como el genotipo más adaptable a las condiciones del país, aspecto concebido a partir de los resultados alcanzados en su comportamiento productivo y reproductivo. Posteriormente la Comisión Nacional de Genética en un reordenamiento de su política de cruzamiento, motivada por limitaciones en el suministro de insumos destinados a la ganadería, amplió nuevamente el uso del Siboney (López 2003), por este el genotipo en el cual se basa fundamentalmente la producción lechera del país y se considera como animal de doble propósito. Por ello, existe una constante preocupación por parte del estado cubano de poner al servicio de este genotipo todo tipo de biotecnologías, fundamentalmente reproductivas (Denis et al. 2004), de modo que podamos incrementar su número al más corto plazo posible, presumiblemente, a partir de animales elites, optimizando al máximo su vida útil. La producción de embriones in vitro, a partir de ovocitos recolectados por OPU, puede constituir una alternativa para la transferencia de embriones (Petyim et al. 2003, Denis et al. 2005a y 2005b), y los programas del mejoramiento genético (Bols 2005), ya que permite producir 2 ó 3 veces más embriones por vaca que por el método convencional de transferencia de embriones (TE). Esta técnica ofrece la posibilidad de repetirse varias veces en un mismo animal, lo cual no era posible cuando la FIV sólo se realizaba a partir de ovarios de matadero. Sin embargo, conocer el futuro reproductivo de estas hembras, que durante largos períodos de tiempo se utilizan como donantes de óvulos, sería en extremo importante, por lo que constituye el objetivo del presente trabajo evaluar el comportamiento reproductivo (fertilidad posterior) en hembras del genotipo Siboney de Cuba utilizadas como donantes de óvulos en un programa de OPU MATERIALES Y MÉTODOS Se trabajaron 40 vacas (grupo I) del genotipo Siboney de Cuba ubicadas en el Instituto de Ciencia Animal (ICA), las cuales fueron sometidas a un programa de recolecta de ovocitos (OPU) durante dos meses (16 sesiones) con una frecuencia de dos veces por semana (15 días posparto). Posterior al período de trabajo los animales pasaron a un programa normal de reproducción (detección de celo e inseminación artificial (IA). Se tomaron como control vacas (36) no puncionadas (grupo II) que se reincorporaban a su vida reproductiva entre 60 y 70 días después del parto. Se realizó el diagnóstico ultrasonográfico de gestación (en ambos grupos) a partir de los 20 días post IA, el cual fue repetido nuevamente entre los 40 y 50 días posteriores. Se evaluó la viabilidad de las crías después del parto. Estadísticamente los datos se procesaron a través del método de comparación de proporciones con la utilización del SAS/STAT, RESULTADOS Y DISCUSIÓN Desde sus inicios (década del 80) se han generado expectativas relacionadas con el posible daño que repetidas sesiones de OPU pudieran causar en el estado de salud y el comportamiento reproductivo posterior de las hembras utilizadas como donantes de óvulos (Bols et al. 2004a y 2004b). En este 18

3 sentido, grupos de investigadores de diferentes regiones se han encargado de estudiar este fenómeno (De Roover et al. 2005). Looney et al. (1995), lograron tasas de gestación (entre el 1 er y 3 er servicio) del 93% en novillas inseminadas a los 14 meses de edad que habían sido súper ovuladas y puncionadas a la edad de 6 a 9 meses. En la Tabla 1. se presentan los resultados alcanzados en relación con la presentación del celo y servicios por gestación en ambos grupos, el 70 % de los animales puncionados (grupo I) se gestó en el primer celo pospunción (entre los 7 y 23 días de finalizar las sesiones de OPU), mientras que el 63.8% en el grupo control ocurrió de la misma manera. Resultados muy similares fueron reportados por Gibbons et al. (1994) quienes obtuvieron un 63% de gestaciones a menos de un mes de concluida la ultima sesión de OPU y por Chong et al. (2005). Sin embargo existen discrepancias entre estos resultados y los reportes de algunos autores. Se ha señalado la ocurrencia de perturbaciones del ciclo estral después que los animales fueran utilizados como donantes de ovocitos durante varios meses y Gibbons et al (1994) reportan traumas visibles en el ovario que afectan la actividad ovárica. En cambio Pieterse et al. (1991) no encontró adherencias ni disminución de la fertilidad en vacas después de sometidas a un proceso de OPU. El 100% de los animales puncionados presentaron celo (Tabla.1) y quedaron gestantes (fotos. 1 y 2) después del período de trabajo (70 % al 1 er celo, 20% al 2 do celo y 10% al 3 er celo). Foto. 1 Gestación gemelar lograda en el primer celo posterior al período de OPU Foto 2 Gestación simple lograda en el primer celo posterior al período de OPU. Kruip et al. (1994), indican que la respuesta a los tratamientos superovulatorios y la producción de embriones viables se afecta menos en vacas que en novillas cuando se utilizan como donantes de ovocitos durante 5 meses. Petyim et al. (2001), después de monitorear estrictamente durante dos períodos de cuatro a cinco semanas grupos de novillas de razas productoras de leche sometidas a dos sesiones de OPU por semanas, observaron que estas presentaron ocasionalmente signos de 19

4 celo y se desarrollaron estructuras luteales a partir de algunos folículos puncionados coincidentes con los niveles séricos de progesterona encontrados. Bols et al. (1997), hallaron que después de varias sesiones de OPU disminuían los casos de animales acíclicos. Otros trabajos han demostrado que la fertilidad de animales repetidores de celo puede incrementarse después de concluido el período de punción (Bage et al, 2003). Finalmente, se concluye por la mayoría de los autores que la OPU no provoca grandes daños en la estructura y funcionamiento ovárico (Petyim et al y 2003 y Bols, 2005). Otras investigaciones revelan un incremento en los niveles de FSH un día después de efectuar la punción (Petyim et al, 2000) Tabla. 1. Porcentaje de gestación alcanzados en los grupos I y II (puncionadas y control respectivamente) Servicio por Gestación (celos pospunción). Gestación al primer servicio (1 er celo entre 7-23 días) Gestación al 2 do servicio (24-45 días) Gestación al 3 er servicio (> 45 días) Grupo I No. (%) Grupo II No. (%) 28 (70) 23 (63.8) 8 (20) 8 (22.2) En cuanto al seguimiento de las gestaciones entre ambos grupos tampoco se hallaron diferencias significativas, culminando sin complicaciones y se presentaron partos a término con el nacimiento de 41 terneros sanos en el grupo uno (hubo un parto gemelar), y 36 en el dos. REFERENCIAS Bage, Renée, Petyim Sudsaijai, Larsson Birgitta, Hallap Triin, Bergqvist Ann-Sofi, Gustafsson Hans Rodríguez-Martínez, Heriberto. Oocyte competente in repeatbreeder heifers: effects an optimized ovum pick-up schedule on expression of oestrus, follicular development and fertility. Reproduction Fertility and Development. (15):115, Bols, P.E.J. Punture of immature ovarian follicles in bovine assisted reproduction. Verhandeligen Van de Koninklujke Academie Voor Geneeskunde Van Delgie. 67(3): 177, 2005 Bols, P.E.J., Leroy J.L., M.R., Van Holder, T, Van Soom A. A comparison of a mechanical sector and linear array transducer for ultrasound-guided Transvaginal oocyte retrieval (OPU) in the cow. Theriogenology, 62:906, 2004a. Bols, P.E.J., Van Holder, T. Leroy, J.L.M.R. Van Soom, A. Ultrasound-guided transvasginal injection of a low dose of FSH-LH into the bovine ovary as an alternative way to simulate follicular growth: prelimirary result. Reprod. Fert. Dev.16:230, 2004b. Bols, P.E.J, Ysebaert M.T., Van Soom A., Kruif A. Effects of 20

5 needle tip bevel and aspiration procedure on the morphology and developmental capacity of bovine compact cumulus oocytes complexes. Theriogenology, 47:1221, Chong, M.G., Denis, R.G., Lliteras Emilia. Fuentes, D.S., Bernal, A.S. Punción folicular in vivo : Efecto sobre la fertilidad futura de madres sementales de la raza Siboney de Cuba [CD-ROM]. En: 1 er Congreso Internacional de Producción Animal. Memorias del III Congreso de Mejoramiento Animal La Habana nov Denis, R.G., Aguilar A.F., Dihigo E.L., Heyman. I., Fuentes. D.S., Vignon X., Bernal, A.S., Lliteras, Emilia, Chong, M.G. Gónzalez, A.P. Introducción en Cuba de la técnica de punción folicular in vivo. En: Memorias del III Congreso de Mejoramiento Animal. Soporte Digital, 2005a Denis, R.G., Aguilar A.F., Dihigo E.L., Herman, I., Fuentes, D.S., Vignon, X., Bernal A.S., Lliteras Emilia, Chong, M.G., Gónzalez, A.P. Introduction of the Ovum Pick Up technique in Cuba: results and perspectives. En: Memorias Congreso Biotecnología Habana 2005: 115. abstr. 2005b Denis, R.G., Rodríguez Lleretni, Fuentes, D.S., Lliteras, Emilia, Chong. M.G., Bernal, A.S, Hayes O., Maura R., Castro, F.O., Digo, E.L., González, A.P. Producción de embriones bovinos a partir de ovocitos colectados por la técnica de punción folicular in vivo (Ovum pick-up). Rev. Cub. Reprod. Animal. 30 (1): 91, De Roover, R., Genico, G., Leonard S. Bols, P. Dessy, F. Ovum pick-up and in vitro embryo production in cows superstimulated with an individually adapted superstimulation protocol. Anim. Reprod. Sci. 86:13, Gibbons, J.R, Beal, WE, Krisher RL, Faber EG, Pearson RE, Gwazdauskas FC. Effects of once versus twice weekly transvaginal follicular aspiration on bovine oocyte recovery and embryo development. Theriogenology. 41: 206 abstr Kruip, Th.A.M., Boni R., Wuth A.A., Roelfsen M.W.M., Pieterse M.C.. Potential use of ovum pick-up for embryo production and breeding in cattle Theriogenology 42, 675, Looney, C.R., Damiani, P., Lindsey B.R., Long C.R. Use of prepuberal heifers as 0ocyte donors for IVF: effect of age and gonadotrophin treatment. Theriogenology 43:269 (abstract), López, Delia. Cruzamiento en Cuba. Experiencias y perspectivas, 2003.[en línea]. Disponible en: llo/capiv.dbf. [consulta: 23 de mayo de 2006] Petyim, S., Bage, R., Hallap, T., Bergqvist, A. S., Rodríguez- Martínez, H, Larsson, B. Two different schemes of twice-weekly ovum pick-up in dairy heifer: effect on oocyte recovery and ovarian function. Theriogenology (60):175, 2003 Petyim, S, Bage, R, Larsson, B, Hallap, T, Bergqvist, A.-S, Gustafsson, H Rodríguez-Martínez,H. Effect of repeated follicular puncture on ovarian morphology and endocrine parameters in dairy heifers. J. Vet. Med. 48:49, Petyim, S, Bage, R, Larsson, B, Hallap, T, Bergqvist, A.-S, Gustafsson, H., Rodríguez-Martínez H. Effect of repeated follicular puncture on ovarian morphology and endocrine parameters in dairy heifers. J. Vet. Med. 48:49,

6 Pieterse, M.C, Vos, P.L.A.M., Kruip, Th.A.M., Wurth Y.A, van Beneden Th.H., Willems, A.H,. Taverne M.A.M. Transvaginal Ultrasound guided follicular aspiration of bovine oocytes, Theriogenology, 35: 19,1991. SAS/STAT. User s Kary NC: SAS Inst Inc.,1996. Recibido: 10 de enero de