11 Número de publicación: Int. Cl.: 74 Agente: Ungría López, Javier

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1 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 Número de publicación: Int. Cl.: A23K 1/16 (06.01) A23K 1/18 (06.01) 12 TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA T3 86 Número de solicitud europea: Fecha de presentación : Número de publicación de la solicitud: Fecha de publicación de la solicitud: Título: Cerveza de fermentación agotada concentrada de Saccharopolyspora erythraea activada por una mezcla de enzimas útiles como complemento alimentario. Prioridad: US P 73 Titular/es: ABBOTT LABORATORIES Dept. 377/ AP6D-2, 0 Abbott Park Road Abbott Park, Illinois 064-0, US 4 Fecha de publicación de la mención BOPI: Inventor/es: Fidler, Daniel, J.; Lampel, Jay, S. y Weyant, Daniel, B. 4 Fecha de la publicación del folleto de la patente: Agente: Ungría López, Javier ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. Pº de la Castellana, Madrid

2 ES T DESCRIPCIÓN Cerveza de fermentación agotada concentrada de Saccharopolyspora erythraea activada por una mezcla de enzimas útiles como complemento alimentario. Campo de la invención La presente invención está dirigida a una composición de aditivo para piensos que contiene cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea; a un método para producir un aditivo para piensos que contiene cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea; a un proceso para mejorar el valor nutritivo de la cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea mediante tratamiento enzimático; a un método para alimentar animales con un pienso que contiene un aditivo para piensos de cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea y a un proceso para mejorar la conversión del pienso, la producción de carne de pechuga y la resistencia intestinal en las aves de corral mediante la alimentación con un pienso que contiene un aditivo para piensos de cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea. La cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea es tratada con una celulasa y con al menos un glicosidasa, y es posteriormente concentrada. Antecedentes de la invención La población mundial continua aumentando, pero la tierra para la producción de alimento es limitada. Para soportar la creciente demanda de alimento, se necesitarán mejoras en la utilización de los recursos alimentarios para mantener los estándares de vida actuales. En muchas áreas del mundo, se utilizan dietas que contienen un bajo contenido de energía metabolizable. Las dietas de estos países no son suplementadas con grasa. Como consecuencia, existe la necesidad de incrementar la eficacia energética para la utilización de dietas bajas en grasa. En los países en desarrollo o desarrollados la grasa concentrada suplementaria está siendo eliminada de la dieta por razones de salud. Además, hay un sorprendente número de problemas asociados con la adición de grasa concentrada a las raciones de la dieta para incrementar el contenido de energía metabolizable (EM) del pienso. Se sabe que la oxidación de los ácidos grasos insaturados de la grasa da lugar a la formación de peróxidos y radicales libres. Éstos a su vez dan lugar a la oxidación de los nutrientes y vitaminas del alimento. Existen también pruebas disponibles que indican que las dietas ricas en grasa pueden dar lugar a un fallo ventricular y/o a problemas de líquido ascítico en los pollos de engorde. Algunas fuentes de grasa para el pienso de animales incluyen la grasa de desecho de los restaurantes que ha sido parcialmente hidrogenada para crear ácidos grasos no naturales con dobles enlaces en trans que pueden interferir con la fertilidad, con el metabolismo de los ácidos grasos y con el valor energético del pienso. Otra cuestión es que la presencia de ácidos grasos libres en las grasas comerciales puede tener un efecto adverso sobre la producción y puede tener un efecto antimicrobiano en el intestino de los pollos. Las grasas mezcladas están también contaminadas frecuentemente con bifenilos policlorados (PCBs), residuos de pesticidas, metales pesados y gosipol procedente de la pasta oleosa de las semillas del algodón. Los directores de las fábricas de pienso tienen que vigilar todos estos temas. Es bien conocido que la grasa ingerida (y los materiales en ella disueltos como PCB) puede ser incorporada directamente a la grasa del animal que la consume y esto puede representar importantes riesgos para la salud. Además, la grasa de las raciones de los animales puede afectar al sabor de la carne. Por ejemplo, más de un 1% de aceite de pescado en las dietas de los pollos producirá un olor de tipo pescado característico en la carne o en los huevos. El efecto de un alto contenido en grasa (especialmente grasa animal) sobre el sabor del producto es otra cuestión a la que algunos productores están comenzando a prestar mucha atención. La capacidad para evitar la utilización de grasa y seguir obteniendo la misma productividad es por tanto de interés general. Existe una necesidad continua de una mayor eficacia en la producción de alimentos y la urgencia de proporcionar soluciones sólo aumentará con el tiempo. La utilización de dietas muy energéticas que incluyan varios tantos por ciento de grasa para estimular un crecimiento eficaz del animal no es siempre posible o deseable debido al elevado coste de la grasa o de los aceites vegetales, o debido a las cantidades limitadas de grasa animal disponibles en algunas de las partes del mundo más pobladas (por ejemplo en China y en India). Existe una ineficacia básica en la utilización de la grasa disponible en el pienso. Por ejemplo, en las industrias química y del jabón la grasa podría tener más valor. Finalmente, existen varias cuestiones de salud y problemas asociados con la incorporación de grasas concentradas exógenas a las dietas de los animales. Estas cuestiones son una indicación adicional de que se necesita urgentemente una dieta para la alimentación de los animales con grasa reducida, calorías reducidas, que mantenga una alta eficacia alimenticia. Existe todavía la necesidad de un método para incrementar la eficacia con la que los animales monogástricos utilizan las raciones de pienso que tienen un bajo contenido de energía metabolizable. De igual modo, existe la necesidad de una dieta alimentaria que pueda ser utilizada eficazmente por los animales monogástricos sin la adición de grasa. Un procedimiento para mejorar la eficacia ha sido aumentar la digestión de los piensos mediante la inclusión de enzimas. La digestión ayudada enzimáticamente no sólo produce más carne por libra de pienso, sino que reduce también el volumen de estiércol y el coste de su eliminación. 2

3 ES T3 1 2 Algunos enzimas han sido claramente reconocidos en el mercado por su valor como aditivos en los piensos para animales: xilanasa, β-glucanasa, enzimas que cortan el fósforo del ácido fítico, hemicelulatos (según está descrito en la Patente de EE.UU. Nº ), esterasa del ácido ferúlico (según se describe en la Patente de EE.UU. Nº ) y manasa. Además de los aditivos alimentarios enzimáticos, son también útiles pequeñas moléculas tales como los derivados de los ácidos aminocarboxílicos según se describe en la Patente de EE.UU. Nº , y se han descrito también mamíferos marinos tratados con enzimas proteolíticos (Patente de EE.UU. Nº ). Los productos de fermentación son también conocidos como aditivos para piensos, tal como un pienso de fórmula fermentada obtenible de la mezcla de un material alimentario de soja con trigo, según está descrito en la Patente de EE.UU. Nº ; y líquidos con productos solubles de Saccharopolyspora. GB 81 1 describe la fermentación de melazas agotadas con Streptomyces aureofaciens productores de antibióticos. US-A describe la producción de un caldo agotado aglutinado de líquido con productos solubles de Streptomyces (LSS). Sin embargo, existe todavía la necesidad de aditivos baratos y más eficaces. Breve resumen de la invención La invención está dirigida a una composición de aditivo para piensos que comprende: una cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea; dicha cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea es tratada con una celulasa y con al menos una glicosidasa antes de la concentración. Preferiblemente, la cerveza es tratada con al menos una primera glicosidasa y una segunda glicosidasa, donde la primera glicosidasa puede ser un enzima pectinolítico y la segunda glicosidasa puede ser una arabinosidasa. La celulasa puede ser β-glucanasa. El enzima pectinolítico puede ser poligalactouronasa; y la arabinosidasa puede ser α- N-arabinofurinosidasa. Preferiblemente, la cerveza es tratada con menos de un 1 por ciento en peso de cada enzima por volumen total de dicha cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea. La composición puede tener desde un por ciento aproximadamente hasta un por ciento aproximadamente de sólidos; un ph de 4 aproximadamente a aproximadamente, teniendo los sólidos un tamaño de partícula medio de 2, aproximadamente a 4 micras aproximadamente. Preferiblemente, la composición tiene de un 4 aproximadamente a un 0 por ciento aproximadamente de sólidos; un ph de 4,3 aproximadamente a 4, aproximadamente, teniendo los sólidos un tamaño medio de partícula de 3,1 aproximadamente a 3, micras aproximadamente. La invención está dirigida también a un método para producir un aditivo para piensos que comprende las etapas de: a) el tratamiento de una cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea con ácido a una temperatura de 80ºC aproximadamente a 0ºC aproximadamente para formar una cerveza de fermentación agotada tratada con calor; b) el enfriamiento de dicha cerveza de fermentación agotada tratada con calor hasta una temperatura de ºC aproximadamente a ºC aproximadamente; c) el tratamiento de dicha cerveza de fermentación agotada resultante de la etapa b) con una mezcla enzimática durante un periodo de dos a veinte horas a un ph de 3 aproximadamente a 6 aproximadamente para formar una cerveza de fermentación agotada activada; donde dicha mezcla enzimática incluye una celulasa y al menos una glicosidasa; d) la concentración de dicha cerveza de fermentación agotada activada hasta al menos un 31 por ciento de sólidos y, posteriormente, e) la recuperación de un producto aditivo para piensos de cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea. La invención está dirigida también a un proceso para mejorar el valor nutritivo de la cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea como aditivo para piensos mediante un tratamiento enzimático que comprende las etapas de: a) el tratamiento de una cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea con ácido a una temperatura de 80ºC aproximadamente a 0ºC aproximadamente para formar una cerveza de fermentación agotada tratada con calor; b) el enfriamiento de dicha cerveza de fermentación agotada hasta una temperatura de ºC aproximadamente a ºC aproximadamente; 6 c) el tratamiento de dicha cerveza de fermentación agotada resultante de la etapa b) con una mezcla enzimática durante un periodo de dos a veinte horas a un ph de 3 aproximadamente a 6 aproximadamente para formar una cerveza de fermentación agotada activada; 3

4 ES T3 donde dicha mezcla enzimática incluye una celulasa y al menos una glicosidasa; 1 d) la concentración de dicha cerveza de fermentación agotada activada hasta al menos un 31 por ciento de sólidos y, posteriormente, e) la recuperación de un producto aditivo para piensos de cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea. En este proceso, el producto de cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea proporciona una conversión mejorada del pienso. La invención está dirigida también a un método para alimentar animales que comprende la etapa de alimentación de los animales con un pienso que contiene el aditivo para piensos anteriormente descrito. Preferiblemente, el aditivo para piensos tiene una tasa de inclusión del 0,1 aproximadamente al por ciento en peso aproximadamente por peso total de pienso. Los animales incluyen aves de corral, cerdos, pescado, crustáceos y ganado. La invención está dirigida también a un proceso para mejorar la conversión del pienso, la producción de carne de pechuga y la resistencia intestinal en las aves de corral, que comprende la adición del aditivo para piensos anteriormente descrito al pienso de aves de corral. Preferiblemente, el aditivo para piensos es de un 0,1 aproximadamente a un por ciento en peso aproximadamente por peso total de pienso. Descripción detallada de la invención La presente invención está dirigida a una composición de aditivo para piensos que contiene cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea; a un método para producir un aditivo para piensos conteniendo cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea; a un proceso para mejorar el valor nutritivo de la cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea mediante tratamiento enzimático; a un método para alimentar animales con un pienso que contenga un aditivo para piensos de cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea y a un proceso para mejorar la conversión del pienso, la producción de carne de pechuga y la resistencia intestinal en las aves de corral mediante la alimentación con un pienso conteniendo un aditivo para piensos de cerveza de fermentación agotada, concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea. Preferiblemente, la cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea es tratada con una celulasa y al menos una glicosidasa, y posteriormente es concentrada. Las Composiciones El líquido con productos solubles de Saccharopolyspora (LSS) es un producto secundario de la producción del antibiótico eritromicina, disponible en Abbott Laboratories. El antibiótico es producido mediante un proceso de fermentación que implica a la especie de bacterias Saccharopolyspora. El medio de fermentación para el crecimiento bacteriano está basado principalmente en soja y sirve como fuente de carbono. Cuando la fermentación es completa, el antibiótico es extraído del medio de fermentación. Después de la extracción post-fermentación del antibiótico, el material restante es referido como cerveza de fermentación agotada. Esta cerveza de fermentación agotada es concentrada posteriormente hasta un % aproximadamente de sólidos y el producto resultante (denominado LSS) ha sido utilizado como aditivo en la industria de piensos durante muchos años. El LSS fue denominado tradicionalmente líquido con sólidos de Streptomyces, pero debido a un cambio reciente de la nomenclatura es referido actualmente como líquido con productos sólidos de Saccharopolyspora. El LSS se incorpora típicamente al pienso como un aditivo en una cantidad de 14-1 libras aproximadamente por tonelada de pienso total en las dietas para aves de corral o para cerdos. En la presente invención, la cerveza agotada procedente de una fermentación de Saccharopolyspora es modificada mediante el tratamiento de la misma con enzimas y permitiendo que tenga lugar la digestión enzimática durante un periodo de horas. Aunque se conocen algunos enzimas como aditivos para piensos, y el producto LSS es conocido como aditivo para piensos, no se ha descrito la modificación de una cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea mediante un tratamiento enzimático para mejorar la utilidad de la cerveza de fermentación agotada como aditivo para piensos. Los enzimas utilizados pueden ser añadidos cada uno de ellos individualmente a la cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea, o pueden ser premezclados y añadidos todos juntos a la vez. El orden y los métodos de adición no son críticos. Muchos enzimas diferentes son útiles, aunque nosotros hemos encontrado al menos dos enzimas que son esenciales: una celulasa y al menos una glicosidasa. La celulasa puede ser β-glucanasa. La mezcla enzimática puede contener una o más glicosidasas. Preferiblemente, la mezcla enzimática contiene al menos una primera glicosidasa y una segunda glicosidasa. 4

5 ES T3 La primera glicosidasa puede ser un enzima pectinolítico. Un enzima pectinolítico es uno que hidroliza y despolimeriza la pectina. Un enzima pectinolítico actualmente preferido poligalactouronasa (PG), referido también como despolimerasa de pectina o pectinasa. 1 2 La segunda glicosidasa puede ser una arabinosidasa. Las arabinosidasas son hidrolasas que cortan la L-arabinosa de oligo o polisacáridos que contienen residuos de L-arabinofuranosilo ligados a α en los extremos no reductores. La actividad glicosidasa y la actividad celulasa son necesarias en el tratamiento enzimático utilizado en la presente invención. Cada tipo de actividad enzimática puede derivar de un único enzima, de una combinación de enzimas o de un complejo enzimático. La cantidad de enzima que se requiere para modificar la cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea es baja, por debajo del 1% y, preferiblemente, por debajo del 0,01% de una solución de 0 l de cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea. Otros enzimas que pueden ser también incluidos en la mezcla como útiles para el tratamiento de la cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea incluyen proteasas fúngicas ácidas, xilanasas, galactomanasas y hemicelulasas, entre otros. Otros aditivos, tales como antioxidantes, probióticos, agentes aromatizantes, enzimas, agentes antifúngicos, conservantes, levaduras o aglutinantes de los gránulos, pueden ser también añadidos a la composición de aditivo para piensos anteriormente descrita. Por ejemplo, puede añadirse a la composición ácido propiónico (en una cantidad inferior al 1%). El aditivo para piensos de la presente invención es un líquido viscoso, que es pulverizado en un mezclador de pienso para producir un pienso. El aditivo de la presente invención puede ser mezclado en el pienso en una cantidad desde el 0,1% aproximadamente hasta el % aproximadamente del pienso total. Después de mezclar, el pienso es convertido en gránulos. El pienso en gránulos de varios tamaños, dependiendo de la edad del animal que va a ser alimentado, es posteriormente suministrado al animal. Los ejemplos siguientes se presentan para describir las realizaciones y utilidades preferidas de la invención. Ejemplo El aditivo para piensos fue preparado de la siguiente manera. Una cerveza de fermentación agotada procedente de una fermentación de Saccharopolyspora erythraea, que tenía de un 6,% a un 7,% de sólidos aproximadamente, fue tratada con H 2 SO 4 a 9ºC para eliminar cualquier antibiótico presente. Posteriormente la cerveza agotada sin antibiótico fue enfriada hasta una temperatura de 4ºC a 0ºC. Después de enfriar, se añadió una mezcla de enzimas, y la digestión enzimática de la cerveza agotada tuvo lugar durante doce a dieciséis horas a un ph de 3,-,0. Este tratamiento enzimático de la cerveza agotada es utilizado para reducir la viscosidad y para retrasar la formación de gel en el aditivo producto final. Los enzimas utilizados están indicados en la Tabla 1. TABLA 1 Mezcla Enzimática de Dos Componentes Utilizada para Tratar la Cerveza Agotada Nombre Comercial Origen Tipo Descripción Cantidad (peso/vol) 0 MULTIFECT B Genencor, Int l. β-glucanasa hidrólisis de 0,0090% de Rochester, NY (una celulasa) glucanos DP474 Valley Research pectinasa y hidrólisis y 0,0090% Inc., de South arabinosidasa despolimerización Bend, IN (dos glicosidasas) de pectina 6 Con el fin de ilustrar la cantidad de enzima utilizada, cuando se utiliza un lote de l de cerveza agotada, se añadirán menos de 3 kg de cada enzima. Una vez que se han añadido los enzimas y se ha dejado que activen la cerveza agotada durante varias horas, el material resultante es concentrado hasta un 4-0% de sólidos mediante la eliminación del agua por un proceso de evaporación en una unidad de Recompresión de Vapor Mecánica. Después de la concentración, se añade un 0,% de ácido propiónico para constituir el producto final aditivo para piensos. El producto final tiene las características siguientes.

6 ES T3 Un análisis indicó que el producto contenía un 49% de materia seca, teniendo un 1% de proteína bruta, un 8% de grasa bruta, un 1% de fibra bruta y un 8% de cenizas. Los aminoácidos clave encontrados en el aditivo incluían un 0,2% de metionina, un 0,4% de lisina, un 0,1% de triptófano, un 0,% de treonina y un 0,1% de cistina. Los minerales principales encontrados en el aditivo incluían un 0,2% de calcio, un 0,2% de fósforo, un 0,7% de potasio, un 0,2% de magnesio y un 2% de sodio, junto con un nivel muy elevado de inositol. En la Tabla 2 se muestra una comparación de las características del aditivo de la presente invención frente al líquido con productos solubles de Saccharopolyspora (LSS). TABLA 2 1 Características Líquido con productos solubles de Cerveza de fermentación agotada Saccharopolyspora erythraea concentrada, tratada con enzimas, procedente de una fermentación de Saccharopolyspora erythraea Porcentaje de sólidos 28-, 4-0 Viscosidad (cps) a ºC ph 4,1-4, 4,3-4, 2 Densidad aparente 9,1 9,7 (lb/galón) Tamaño Medio de Partícula 33 3,4 (µ) Ejemplo 2 3 Utilizando el procedimiento descrito en el Ejemplo 1, se produjo otro aditivo para piensos a partir de una cerveza de fermentación agotada procedente de una fermentación de Saccharopolyspora erythraea, sustituyendo la mezcla de dos enzimas descrita en la Tabla 1 anterior por la mezcla enzimática de cinco componentes descrita en la Tabla 3 siguiente. TABLA 3 Mezcla Enzimática de Cinco Componentes Utilizada para Tratar la Cerveza Agotada Nombre Comercial Origen Tipo Descripción Cantidad (peso/vol) MULTIFECT B Genencor International β-glucanasa hidrólisis de β-glucanos 0,0090% de Rochester, NY MULTEFECT GC Genencor International complejo de hidrólisis de polisacáridos distintos 0,0090% de Rochester, NY celulasas de almidón y pectina tales como celulosa, glucanos y xilanos VISCOZYME Novo Nordisk de complejo de las actividades incluyen arabinasa, 0,0090% Franklinton, NC carbohidrasas hemicelulasa, pectinasa y xilanasa DP474 Valley Research pectinasa y hidrólisis y despolimerización 0,0090% Inc., de South arabinosidasa de pectina Bend, IN DP4 Valley Research complejo de hidrólisis de los enlaces β-d, 0,0090% Inc., de South celulasas 1,4-glucosídicos de la celulasa, Bend, IN de sus oligómeros y derivados 6

7 ES T3 Ejemplo Con el fin de ilustrar la eficacia del aditivo del Ejemplo 1 a una variedad de niveles de dosificación respecto a un pienso basal, se realizó el ensayo siguiente. Los pollos utilizados en el ensayo fueron pollos de engorde comerciales Avian x Hubbard HyY obtenidos de Hoover s Hatchery, en Rudd, Iowa. El pienso y el agua se proporcionaron según necesidad. El peso de las aves después de 28 días con una dieta basal fue comparado con el peso de las aves después de 28 días bajo una dieta basal conteniendo un 0,%, un 1%, un 2% o un 4% del aditivo del Ejemplo 1, y los resultados se presentan en la Tabla 4. La dieta basal incluía un 4,06% de maíz, un,7% de harina de soja, un % de carne y huesos, un 3,% de grasa, un 0,9% de fósforo, un 0,4% de carbonato de calcio, un 0,29% de sal, un 0,27% de DL-metionina, un 0,08% de lisina, un 0,% de una premezcla de vitaminas y un 0,1% de una premezcla de trazas de minerales. Los resultados de la Tabla 4 muestran que se obtuvo un ave de mayor peso con cada nivel de dosificación del aditivo en la dieta basal respecto a la dieta basal sola. La conversión del pienso fue calculada midiendo el consumo total de pienso de un número establecido de aves en un corral, y dividiendo ese número por el peso total de las aves que sobrevivieron 28 días y el peso de las aves que murieron o fueron retiradas del corral en el periodo de 28 días para obtener una conversión del pienso ajustada. El pienso tratado con el aditivo de la presente invención a cualquiera de los niveles de dosificación medidos tuvo como resultado una conversión del pienso ajustada menor que cuando el pienso estaba sin tratar. Un número menor de conversión de pienso ajustada indica un pienso más eficaz. Ya que una diferencia de 0,01 en la conversión del pienso ajustada puede traducirse en un millón de dólares de valor adicional de las aves producidas, los resultados obtenidos con los aditivos de la presente invención son muy significativos, e indican una conversión del pienso enormemente mejorada. TABLA 4 Pienso Peso Medio de las Aves (g) Conversión del Pienso Ajustada dieta basal 967 1,717 3 dieta basal y un 0,% del Ejemplo ,6 dieta basal y un 1% del Ejemplo ,66 dieta basal y un 2% del Ejemplo 1 0 1,688 dieta basal y un 4% del Ejemplo ,688 Ejemplo Con el fin de determinar las ventajas de la adición del aditivo de la presente invención a piensos para aves de corral, se llevaron a cabo los ensayos siguientes. Los pollos utilizados para el ensayo fueron pollos de engorde Cobb x Cobb obtenidos de Cobb Vantress, Inc. de Cleveland, Ga. El pienso y el agua se proporcionaron según necesidad. Se comparó el peso de las aves después de 49 días bajo una dieta basal con el peso de las aves después de 49 días bajo una dieta basal conteniendo un 0,% del aditivo del Ejemplo 1 o bajo una dieta basal conteniendo un 1,0% del aditivo del Ejemplo 1, y los resultados están presentados en la Tabla. La dieta basal fue similar a la utilizada en el Ejemplo 3. La Tabla demuestra que a la concentración más baja utilizada, el pienso que contiene el aditivo produce un ave de mayor peso. TABLA 6 Pienso Peso medio (kg) dieta basal 2,996 dieta basal y un 0,% del Ejemplo 1 3,008 dieta basal y un 1,0% del Ejemplo 1 2,99 7

8 ES T3 La cantidad de carne de pechuga obtenida de las aves procesadas después de estar bajo una dieta basal (descrita anteriormente), una dieta basal conteniendo un 0,% del aditivo del Ejemplo 1 o una dieta basal conteniendo un 1,0% del aditivo del Ejemplo 1 durante 0 días fue medida y comparada con el peso total de las aves con el fin de determinar qué porcentaje del ave es carne de pechuga. Los resultados están presentados en la Tabla 6. Los resultados indican un porcentaje incrementado de carne de pechuga con cualquiera de las concentraciones de aditivo respecto al pienso basal. TABLA 6 Pienso Porcentaje de Carne de Pechuga dieta basal 22,6 1 dieta basal y un 0,% del Ejemplo 1 23,1 dieta basal y un 1,0% del Ejemplo 1 23,4 2 Con el fin de determinar ventajas adicionales de la utilización del aditivo en el pienso de aves de corral, se llevó a cabo a cabo un estudio de la resistencia intestinal. La resistencia intestinal es importante en el procesamiento de las aves de corral, ya que un valor más elevado de resistencia intestinal indica un intestino más resistente, lo que significa que será menos probable que el intestino se rompa y su contenido contamine la carne durante el procesamiento mecanizado de las aves. La resistencia intestinal de las aves procesadas después de haber estado bajo una dieta basal, una dieta basal conteniendo un 0,% del aditivo del Ejemplo 1 o una dieta basal conteniendo un 1,0% del aditivo del Ejemplo 1, durante 48 días, fue medida utilizando una máquina semiautomática, motorizada, para analizar la resistencia, y los resultados están presentados en la Tabla 7. Los resultados indican una mayor resistencia intestinal en las aves alimentadas con piensos que contenían el aditivo del Ejemplo 1. TABLA 7 3 Pienso Resistencia Intestinal Media (kg) dieta basal 0,397 dieta basal y un 0,% del Ejemplo 1 0,421 dieta basal y un 1,0% del Ejemplo 1 0, Ejemplo Con el fin de determinar el incremento del contenido nutritivo proporcionado por el aditivo para piensos de la presente invención, se midió la Energía Metabolizable Aparente (EMA), de acuerdo con el procedimiento siguiente. Noventa pollos de engorde machos de seis días de edad de una cepa comercial fueron asignados a dos dietas; una dieta basal o una dieta basal que incluía un 4,8% del aditivo descrito en el Ejemplo 1. La dieta basal incluía un 8,44% de maíz, un 34,97% de harina de soja, un 2% de grasa animal-vegetal, un 1,6% de fosfato dicálcico, un 1,4% de carbonato de calcio, un 1,00% de premezcla de vitaminas-minerales de microminerales y vitaminas, un 0,36% de sal, DL-metionina y un 0,07% de L-lisina. El pienso y el agua se suministraron según necesidad. Las aves fueron alimentadas solamente con la dieta basal hasta los seis días de edad. Después de los seis días de edad (día 6) se les suministró solamente la dieta basal o la dieta basal que incluía el aditivo. Después del día 9, se recogieron los excrementos durante tres días consecutivos y se registró el consumo de pienso al final del periodo de recogida de los excrementos. Los excrementos fueron secados en una estufa a 6ºC durante 72 horas y posteriormente se analizaron la energía bruta y el contenido de nitrógeno de las dietas y los excrementos. La EMA es calculada según el procedimiento descrito por Leeson y col. en Commercial Poultry Nutrition, University Books, Ontario, Canadá, pp y en Nutritional Requirements of Poultry, National Academy Press, Washington, DC, 1994, pp La EMA calculada para la dieta basal fue de 289,2 kcal/kg, mientras que la EMA para la dieta basal que incluía el aditivo de la presente invención fue de 299, kcal/kg. Como un incremento de 0 kcal es considerado significativo, este resultado indica que los presentes aditivos tienen un contenido nutritivo mayor que los líquidos con sólidos de Streptomyces no tratados. 8

9 ES T3 REIVINDICACIONES Una composición de aditivo para piensos que comprende: una cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada enzimáticamente, de Saccharopolyspora erythraea; dicha cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea tratada con una celulasa y al menos una glicosidasa antes de la concentración. 2. La composición de la reivindicación 1 tratada enzimáticamente con al menos una primera glicosidasa y una segunda glicosidasa. 3. La composición de la reivindicación 2, en la que dicha primera glicosidasa es un enzima pectinolítico y dicha segunda glicosidasa es una arabinosidasa. 4. La composición de la reivindicación 3, en la que dicho enzima pectinolítico es poligalactouronasa y dicha celulasa es β-glucanasa.. La composición de la reivindicación 3, en la que dicha arabinosidasa es α-n-arabinofuranosidasa. 6. La composición de la reivindicación 2, en la que se utiliza menos de un 1 por ciento en peso de cada enzima para tratar el volumen total de dicha cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea. 7. La composición de la reivindicación 1, que tiene de un por ciento aproximadamente a un por ciento aproximadamente de sólidos; y un ph de 4 aproximadamente a aproximadamente, teniendo dichos sólidos un tamaño de partícula medio de 2, aproximadamente a 4 micras aproximadamente. 8. La composición de la reivindicación 1, que tiene de un 4 aproximadamente a un 0 por ciento aproximadamente de sólidos; y un ph de 4,3 aproximadamente a 4, aproximadamente, teniendo dichos sólidos un tamaño medio de partícula de 3,1 aproximadamente a 3, micras aproximadamente. 9. Un método para producir un aditivo para piensos que comprende las etapas de: a) el tratamiento de una cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea con ácido a una temperatura de 80ºC aproximadamente a 0ºC aproximadamente para formar una cerveza de fermentación agotada tratada con calor; b) el enfriamiento de dicha cerveza de fermentación agotada tratada con calor hasta una temperatura de ºC aproximadamente a ºC aproximadamente; c) el tratamiento de dicha cerveza de fermentación agotada resultante de la etapa b) con una mezcla enzimática durante dos a veinte horas a un ph de 3 aproximadamente a 6 aproximadamente para formar una cerveza de fermentación agotada activada; donde dicha mezcla enzimática incluye una celulasa y al menos una glicosidasa; d) la concentración de dicha cerveza de fermentación agotada activada hasta al menos un 31 por ciento de sólidos; y posteriormente, e) la recuperación de un producto aditivo para piensos de cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea.. El método de la reivindicación 9, en el que dicha cerveza de fermentación agotada resultante de la etapa b) es tratada enzimáticamente con al menos una primera glicosidasa y una segunda glicosidasa. 11. El método de la reivindicación, en el que dicha primera glicosidasa es un enzima pectinolítico y dicha segunda glicosidasa es una arabinosidasa. 12. El método de la reivindicación 11, en el que dicho enzima pectinolítico es poligalactouronasa y dicha celulasa es β-glucanasa. 13. El método de la reivindicación 11, en el que dicha arabinosidasa es α-n-arabinofuranosidasa. 14. El método de la reivindicación, en el que se utiliza menos de un 1 por ciento en peso de cada enzima para tratar el volumen total de dicha cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea. 9

10 ES T3 1. El método de la reivindicación 9 en el que dicho producto tiene de un aproximadamente a un por ciento de sólidos aproximadamente; y un ph de 4 aproximadamente a aproximadamente, teniendo dichos sólidos un tamaño de partícula medio de 2, aproximadamente a 4 micras aproximadamente El método de la reivindicación 9 en el que dicho producto tiene de un 4 aproximadamente a un 0 por ciento de sólidos aproximadamente; y un ph de 4,3 aproximadamente a 4, aproximadamente, teniendo dichos sólidos un tamaño medio de partícula de 3,1 aproximadamente a 3, micras aproximadamente. 17. Un proceso para mejorar el valor nutritivo de la cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea como aditivo para piensos que comprende las etapas de: a) el tratamiento de una cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea con ácido a una temperatura de 80ºC aproximadamente a 0ºC aproximadamente para formar una cerveza de fermentación agotada tratada con calor; b) el enfriamiento de dicha cerveza de fermentación agotada tratada con calor hasta una temperatura de ºC aproximadamente a ºC aproximadamente; c) el tratamiento de dicha cerveza de fermentación agotada resultante de la etapa b) con una mezcla enzimática durante dos a veinte horas a un ph de 3 aproximadamente a 6 aproximadamente para formar una cerveza de fermentación agotada activada; donde dicha mezcla enzimática incluye una celulasa y al menos una glicosidasa; d) la concentración de dicha cerveza de fermentación agotada activada hasta al menos un 31 por ciento de sólidos; y posteriormente, e) la recuperación de un producto aditivo para piensos de cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea. 18. El proceso de la reivindicación 17, en el que dicho producto aditivo para piensos de cerveza de fermentación agotada concentrada, tratada con enzimas, de Saccharopolyspora erythraea proporciona una conversión mejorada del pienso. 19. El proceso de la reivindicación 17, en el que dicha cerveza de fermentación agotada sin antibióticos resultante de la etapa b) es tratada enzimáticamente con al menos una primera glicosidasa y una segunda glicosidasa.. El proceso de la reivindicación 19, en el que dicha primera glicosidasa es un enzima pectinolítico y dicha segunda glicosidasa es una arabinosidasa. 21. El proceso de la reivindicación, en el que dicho enzima pectinolítico es poligalactouronasa y dicha celulasa es β-glucanasa. 22. El proceso de la reivindicación, en el que dicha arabinosidasa es α-n-arabinofuranosidasa. 23. El proceso de la reivindicación, en el que se utiliza menos de un 1 por ciento en peso de cada enzima para tratar el volumen total de dicha cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea. 24. El proceso de la reivindicación 17, en el que dicho producto aditivo para piensos tiene de un aproximadamente a un por ciento de sólidos aproximadamente; y un ph de 4 aproximadamente a aproximadamente, teniendo dichos sólidos un tamaño de partícula medio de 2, aproximadamente a 4 micras aproximadamente. 2. El proceso de la reivindicación 17, en el que dicho producto aditivo para piensos tiene de un 4 aproximadamente a un 0 por ciento de sólidos aproximadamente; y un ph de 4,3 aproximadamente a 4, aproximadamente, teniendo dichos sólidos un tamaño medio de partícula de 3,1 aproximadamente a 3, micras aproximadamente. 26. Un método para alimentar animales que comprende la etapa de alimentar a los alimentos con un pienso que contiene la composición de aditivo para piensos de la reivindicación El método de la reivindicación 26, en el que dicho aditivo para piensos es de un 0,1 aproximadamente a un por ciento en peso aproximadamente por peso total de dicho pienso. 28. El método de la reivindicación 26, en el que dichos animales son seleccionados del grupo que consta de aves de corral, cerdos, peces, crustáceos y ganado. 29. El método de la reivindicación 26, en el que dicha cerveza de fermentación agotada es tratada enzimáticamente con al menos una primera glicosidasa y una segunda glicosidasa.

11 ES T3. El método de la reivindicación 29, en el que dicha primera glicosidasa es un enzima pectinolítico y dicha segunda glicosidasa es una arabinosidasa. 31. El método de la reivindicación, en el que dicho enzima pectinolítico es poligalactouronasa y dicha celulasa es β-glucanasa. 32. El método de la reivindicación, en el que dicha arabinosidasa es α-n-arabinofuranosidasa El método de la reivindicación 29, en el que se utiliza menos de un 1 por ciento en peso de cada enzima para tratar el volumen total de dicha cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea. 34. El método de la reivindicación 26, en el que dicho aditivo para piensos tiene de un aproximadamente a un por ciento de sólidos aproximadamente; y un ph de 4 aproximadamente a aproximadamente, teniendo dichos sólidos un tamaño de partícula medio de 2, aproximadamente a 4 micras aproximadamente. 3. El método de la reivindicación 26, en el que dicho aditivo para piensos tiene de un 4 aproximadamente a un 0 por ciento de sólidos aproximadamente; y un ph de 4,3 aproximadamente a 4, aproximadamente, teniendo dichos sólidos un tamaño medio de partícula de 3,1 aproximadamente a 3, micras aproximadamente. 36. Un proceso para mejorar la conversión del pienso, la producción de carne de pechuga y la resistencia intestinal en las aves de corral que comprende la adición al pienso de las aves de corral de la composición de aditivo para piensos de la reivindicación El proceso de la reivindicación 36, en el que dicho aditivo para piensos es de un 0,1 aproximadamente a un por ciento en peso aproximadamente por peso total de dicho pienso. 38. El método de la reivindicación 36, en el que dicha cerveza de fermentación agotada es tratada enzimáticamente con al menos una primera glicosidasa y una segunda glicosidasa El método de la reivindicación 38, en el que dicha primera glicosidasa es un enzima pectinolítico y dicha segunda glicosidasa es una arabinosidasa.. El método de la reivindicación 39, en el que dicho enzima pectinolítico es poligalactouronasa y dicha celulasa es β-glucanasa. 41. El método de la reivindicación 39, en el que dicha arabinosidasa es α-n-arabinofuranosidasa. 42. El método de la reivindicación 38, en el que se utiliza menos de un 1 por ciento en peso de cada enzima para tratar el volumen total de dicha cerveza de fermentación agotada de Saccharopolyspora erythraea. 43. El método de la reivindicación 37, en el que dicho aditivo para piensos tiene de un aproximadamente a un por ciento de sólidos aproximadamente; y un ph de 4 aproximadamente a aproximadamente, teniendo dichos sólidos un tamaño de partícula medio de 2, aproximadamente a 4 micras aproximadamente. 44. El método de la reivindicación 37, en el que dicho aditivo para piensos tiene de un 4 aproximadamente a un 0 por ciento de sólidos aproximadamente; y un ph de 4,3 aproximadamente a 4, aproximadamente, teniendo dichos sólidos un tamaño medio de partícula de 3,1 aproximadamente a 3, micras aproximadamente