BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR. LABORATORIO No 8: ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA
|
|
- María Rosario Camacho Iglesias
- hace 7 años
- Vistas:
Transcripción
1 BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR LABORATORIO No 8: ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA 1. INTRODUCCIÓN Para detectar los productos o fragmentos de ADN obtenidos después de varios de los procedimientos realizados en un laboratorio molecular, como son: extracción de ADN, cortes con enzimas de restricción y amplificación de ADN o ADNc mediante PCR se requiere la utilización de la electroforesis como metodología analítica que permite visualizar estos productos. La electroforesis es un procedimiento en el cual una partícula cargada se hace desplazar a través de un medio aplicando un campo eléctrico. Por lo tanto, esta permite que macromoléculas como aminoácidos, péptidos, proteínas, nucleótidos y ácidos nucleicos, se muevan hacia el polo positivo o negativo, en función de la carga que posean ((Bula, 1982) y de esta manera se separen por la velocidad de migración bajo la acción de un campo eléctrico. 2. OBJETIVOS Analizar diferentes productos enzimáticos y de PCR obtenidos de la experimentación en el laboratorio molecular. Utilizar la electroforesis de agarosa como método de separación y análisis de ácidos nucleicos 3. MARCO TEORICO Las moléculas de ADN de doble cadena lineal migran a través del gel a una velocidad que es inversamente proporcional al logaritmo del número de pares de bases que conforman dicha molécula. Esto permite calcular el tamaño en pares de bases de un ADN con base en la migración electroforética. Un fragmento de ADN lineal de un tamaño dado y en un tiempo definido migra a distancias diferentes a través de geles que contienen diferentes concentraciones de agarosa. De esta manera usando geles de diferentes concentraciones, es posible separar un amplio rango de moléculas de ADN. (Tabla No.1)
2 Tabla No. 1. Rango efectivo de separación de ADN en geles de agarosa Concentración de Rango efectivo de separación agarosa en el gel de moléculas de DNA lineal (Kb) (%p/v) Los ADN circulares súper enrollados (forma I) y circulares con un corte (forma III) migran a través de geles de agarosa con diferentes movilidades. La forma I del ADN es una estructura compacta que hace que la superficie de contacto con la matriz sea menor, lo que hace que la molécula migre una distancia mayor y de manera más rápida que la forma III, en la que la superficie de contacto es mayor. Aplicación de Voltajes La distancia usada para determinar el gradiente de voltaje es la distancia entre los electrodos, no la longitud del gel. Diagrama de electroforesis
3 4. PRELABORATORIO 1. En qué consiste una separación electroforética? 2. Qué parámetros pueden variarse para determinar las condiciones óptimas de separación de componentes por electroforesis? 3. Cómo influye el ph de la solución reguladora sobre la migración de los iones a separar por electroforesis? 4. Cómo influye la fuerza iónica de la solución reguladora sobre la migración de los componentes a separar por electroforesis? 5. Comparar los efectos de soluciones reguladoras de fuerza iónica alta y baja con respecto a su capacidad buffer y a la posibilidad de aplicación de voltajes elevados. 6. Por qué aumenta la temperatura del sistema durante el desarrollo electroforético? Qué efectos pueden producir esas variaciones? 7. En qué consisten los medios soporte para electroforesis? Qué propiedades de los medios soporte influyen en la separación electroforética? 8. Explique detalladamente cuales son los buffers utilizados en el corrido electroforético y sus componentes (TAE, TBE). Cuáles son sus propiedades y cuando se utilizan? 9. Qué es el buffer de carga y que propósitos cumple en la electroforesis? 10. Cuáles son los buffer de electroforesis en agarosa más comunes? 5. MATERIALES Y REACTIVOS Reactivos: Agarosa al 2% Agua desionizada grado I (MQ) estéril (H2O dd) Tampón de electroforesis (TBE 10x = Tris base 10.8 g, ácido bórico 5.5 g EDTA 0.5 M ph ml completar con agua desionizada a 100 ml) Bromuro de etidio 10mg/ml Tampón de carga (Buffer de carga 6X basado en glicerol= glicerol 50%, EDTA 1 mm ph 8.0, azul de bromofenol 0.25%, xylene cyanole 0.25%) Muestras de DNA diluidas en buffer TE (Tris-HCl 10mM EDTA 1 mm) Nota: En concentraciones de agarosa entre el 0.5- y 1.4%, el naranja de acridina migra a la misma velocidad que el DNA de doble cadena de un tamaño de 50 pb; el azul de bromofenol (AB) migra a la misma velocidad que el DNA de doble cadena de un tamaño de 300 pares de bases, mientras que el xylene cyanole (XC) migra a una rata similar al DNA de 4 kilo bases (Kb) Materiales Cámara de electroforesis para geles horizontales, fuente de poder, transiluminador de luz ultravioleta (UV), puntas, micro pipetas, tubos Eppendorf, Erlenmeyer,.
4 6. PROCEDIMIENTO 6.1 Preparación del gel Preparar la agarosa al 2% en TBE 1X en un Erlenmeyer que sea de tamaño 2 veces mayor que la cantidad de agarosa a preparar (50 ml). Deje que la agarosa se hidrate y marque el nivel del líquido en el recipiente. Caliente la mezcla hasta que aparezcan burbujas, agite suavemente para resuspender la agarosa aun no disuelta; caliente de nuevo, hasta que se disuelva completamente y reponga el volumen perdido. Permita el enfriamiento de la agarosa a una temperatura aproximada de C, adicione 2.5 µl de bromuro de etidio (EtBr 10 mg/ml) para una concentración final de 0.5 µg/ml (CUIDADO! EL EtBr ES MUTAGENICO, MANEJELO CON GUANTES Y TAPABOCAS). Vierta la solución de agarosa en el molde previamente preparado, coloque el peine apropiado para formar los pozos donde será colocada la muestra y deje solidificar. Para una resolución óptima los geles deben tener un grosor entre 5 y 6 mm; los geles demasiado gruesos hacen que las bandas de ADN se visualicen tenues y difusas. Una vez solidificada la agarosa (aprox. 30 min.), retire cuidadosamente el peine, introduzca el gel en el aparato de electroforesis y adicione suficiente tampón TBE 0.5% a los compartimentos de la cámara de electroforesis para sumergir el gel entre 3 a 5 mm. Si se adiciona menos tampón, el gel puede secarse durante la corrida electroforética, y si se adiciona mucho tampón, se disminuye la movilidad del ADN, se promueve la distorsión de las bandas y produce calentamiento excesivo del sistema. 6.2 Corrido electroforético Prepare las muestras de ADN así: 8 µl de ADN más 2 µl de tampón de carga 2X. De igual manera proceda con el patrón de peso molecular, si este está a una concentración de 100 ng/µl: 3 µl de patrón más 2 µl de tampón de carga 2X y 5ul de agua dde. Haga un esquema del gel, localizando cada una de las muestras. La cantidad de ADN que puede ser cargada en un gel depende de varios factores: volumen del pozo; tamaño de los fragmentos que se quieren visualizar (la capacidad del gel disminuye a medida que aumenta el tamaño de los fragmentos); distribución del tamaño de los fragmentos, y gradiente del voltaje (voltajes altos son apropiados para fragmentos <1 Kb, mientras que voltajes bajos son mejores para fragmentos >1 Kb). La menor cantidad de ADN que puede ser visualizada confiablemente en un gel coloreado con EtBr es 10ng;
5 sin embargo, la cantidad de ADN que produce bandas claras y nítidas, es alrededor de 100 ng. Conecte la cámara de electroforesis a una fuente de poder y realice el corrido a un gradiente de voltaje de 5-10 V/cm. (La distancia que debe considerarse para determinar el gradiente de voltaje es la distancia entre los electrodos y no la longitud del gel). Recomendaciones: Si el voltaje es demasiado alto, la banda de ADN se puede convertir en una línea delgada, especialmente para fragmentos > Kb; en este caso, se recomienda una electroforesis con un gradiente de voltaje de 1-2V/cm. Cuando el voltaje es demasiado bajo se reduce la movilidad de los fragmentos pequeños de ADN (< que 1kb), lo que hace que las bandas se difundan y pierdan nitidez. No olvide que la electroforesis es en sentido negativo a positivo, por lo que el origen de siembra del gel debe estar cerca al electrodo negativo La electroforesis debe hacerse hasta que la banda de interés haya migrado un 40-60% de la mitad de la longitud del gel. Las bandas del ADN pierden resolución en el tercio inferior del gel debido a que se difunden y dispersan. 6.3 Visualización de las bandas de ADN El ADN teñido con bromuro de etidio, es detectado con radiación ultravioleta; a una longitud de onda de 245 nm la luz UV es absorbida directamente por el ADN y transmitida al colorante; a 302 y 306 nm la luz UV es absorbida directamente por el colorante. En ambos casos la energía es re-emitida a una longitud de onda de 590nm, en la región rojo naranja del espectro visible. Para visualizar las bandas de ADN separadas en el gel, páselo directamente al transiluminador con luz UV. Cuando el gel no tiene incluido el EtBr, es decir cuando no se incluyó durante el proceso de gelificación, se debe teñir durante aproximadamente 20 min. En una solución de 0.5 µg /ml de EtBr en agua desionizada. CUIDADO! LA LUZ UV PRODUCE QUEMADURAS EN LA RETINA Y EN LA PIEL. Evite la exposición directa de los ojos y la piel a la luz UV, ya que se puede producir una quemadura de primer grado. (Se ha asociado con cáncer de piel) Los resultados se pueden registrar, tomando una fotografía al gel, con una cámara instantánea, o mediante un sistema computarizado de análisis de imágenes. Calcule el peso molecular mediante el cálculo de una regresión de log 10 de un marcador conocido versus la distancia de migración de cada uno de los fragmentos o mediante comparación con cada una de las bandas del patrón λhindiii.
6 7. POST-LABORATORIO 1. En qué caso se utiliza la poliacrilamida para separación de ácidos nucleicos? 2. Qué factores afectan la velocidad de migración del ADN en geles de agarosa? 3. Por qué se utiliza Ultravioleta para visualizar el ADN? 4. Entre un ADN lineal, enrollado (con un corte), súper enrollado, cuál migra más rápido y por qué? 5. Cómo funciona el bromuro de etidio en la visualización de ácidos nucleicos? Explique en un diagrama el fundamento exacto de este. Como se cuantifican ácidos nucleicos con bromuro de etidio? 6. Cuáles son los efectos biológicos adversos puede tener el bromuro de etidio? 7. Para qué se usa la electroforesis en campo pulsado y en qué se diferencia de la convencional que usted aprendió en esta práctica? 8. BIBLIOGRAFIA. - Almonacid, C Pinilla G. Introducción al análisis Bioquímico y a sus métodos de separación Sambrook, J., Fritschh, and Maniatis, T. Molecular cloning a Laboratory. 2da Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press Perbal, B. A practical guide to molecular cloning. 2da edition John Wiley & Sons, David, L.G. Dibner, M.D.& Battery, J..F. Bassic methods in molecular biology. Elsiever Science publishing Co. Ind. NY Hames, BD.& Rickwood, D. Gel electroforesis of protein, a practicla approach. IRL. Perss. Oxford. Washington D.C Hames, BD.& Rickwood, D. Gel electroforesis of nucleid acids, a practice a approach. IRL. Perss. Oxford. Washington D.C AUTOEVALUACION NUMERO DE LA PRACTICA SI LOGRO (Objetivos cumplidos) NO FORTALEZAS DEBILIDADES SUGERENCIAS A CADA DEBILIDAD
Práctica: Electroforesis de DNA y transferencia a membranas de celulosa o nylon.
Biología Celular y Molecular para Medicina Jorge Contreras Pineda Práctica: Electroforesis de DNA y transferencia a membranas de celulosa o nylon. GENERALIDADES La electroforesis es una técnica de laboratorio
Más detallesPRÁCTICA 9 ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA
INTRODUCCIÓN PRÁCTICA 9 ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA La electroforesis es una técnica que permite separar moléculas cargadas eléctricamente, entre las cuales se encuentran los ácidos nucleicos (DNA
Más detallesAUTOR: JORGE CONTRERAS PINEDA 1. Titulo:
Página 1 de 1 1. Titulo: Electroforesis de DNA 2. Objetivo Conocer los principios básicos de la electroforesis horizontal en geles de agarosa y aplicarlo para la separación de DNA humano, plasmídico, recombinante
Más detallesInstrucciones de uso. BAG Cycler Check. Kit de para la validación de la uniformidad de la temperatura en los termocicladores
Instrucciones de uso BAG Cycler Check Kit de para la validación de la uniformidad de la temperatura en los termocicladores listo para usar, prealicuotado REF 7104 (10 tests) REF 71044 (4 tests) Contenidos
Más detallesBIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR. LABORATORIO No 3: SEPARACIÓN POR GRADIENTES DE DENSIDAD (FICOLL-HYPAQUE)
BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR LABORATORIO No 3: SEPARACIÓN POR GRADIENTES DE DENSIDAD (FICOLL-HYPAQUE) 1. INTRODUCCIÓN Es necesario para realizar los estudios funcionales de células mononucleares de sangre
Más detallesProyecto de Fin de Cursos
Universidad de la República Oriental del Uruguay Proyecto de Fin de Cursos ELECTROFORESIS EN GEL DE MOLÉCULAS DE ADN Noviembre de 2006 Carolina Etchart C.I. 3.757.708-8 Marcelo Lavagna C.I. 3.508.715-8
Más detallesBIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR. LABORATORIO No 5: ENZIMAS DE RESTRICCION
BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR LABORATORIO No 5: ENZIMAS DE RESTRICCION 1. INTRODUCION Las enzimas de restricción, también conocidas como endonucleasas, son enzimas que cortan los enlaces fosfodiéster del
Más detallesvelocidades de movimiento mediante la aplicación de un campo eléctrico a través de una matriz porosa
INTRODUCCIÓN En general, la electroforesis es una técnica que separa las moléculas en base a sus diferentes velocidades de movimiento mediante la aplicación de un campo eléctrico a través de una matriz
Más detallesBIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR. LABORATORIO No 2: EXTRACCION DE ADN
BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR LABORATORIO No 2: EXTRACCION DE ADN 1. INTRODUCCION Las características de un organismo están especificadas en su información genética, la cual está representada como una secuencia
Más detallesBIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR. LABORATORIO No 9: ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA (SDS-PAGE)
BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR LABORATORIO No 9: ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA (SDS-PAGE) 1. INTRODUCCIÓN Uno de los métodos que permite la purificación y separación de proteínas de un organismo
Más detallesELECTROFORESIS Definición
ELECTROFORESIS ELECTROFORESIS Definición: Método de análisis basado en la migración diferencial de sustancias en solución cargadas eléctricamente, por efecto de la aplicación de un campo eléctrico. Aplicación
Más detallesEasy PDF Creator is professional software to create PDF. If you wish to remove this line, buy it now.
1 Virología y Micología Veterinaria Trabajo Práctico No. 4 ELECTROFORESIS La electroforesis es una técnica utilizada para separar grandes moléculas por tamaño a través de la aplicación de un campo eléctrico
Más detallesUNIVERSIDAD DE PUERTO RICO EN AGUADILLA DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES. Laboratorio de Genética BIOL 3306
UNIVERSIDAD DE PUERTO RICO EN AGUADILLA DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES Laboratorio de Genética BIOL 3306 Liza V. Jiménez Rodríguez, Ph.D. Agosto, 2014 Pre-prueba I. Pareo 1) Geles de agarosa 2) Loading
Más detalles2ª PRÁCTICA DE MICROBIOLOGÍA:
2ª PRÁCTICA DE MICROBIOLOGÍA: INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA MOLECULAR Y AMBIENTAL INTRODUCCIÓN A. MICROBIOLOGÍA MOLECULAR El objetivo de esta práctica es poder distinguir entre distintos tipos de moléculas
Más detallesCUADERNO DE PRÁCTICAS
CUADERNO DE PRÁCTICAS ANÁLISIS INDUSTRIAL Área de Química Analítica Facultad de Ciencias Químicas Curso 2006/2007 Cuaderno de Prácticas 2006/2007 1 ÍNDICE *Práctica 1.- Práctica 2.- Determinación de Cu
Más detallesREACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Microbiología General Microbiología M de los Alimentos Licenciatura en Bioquímica i Ingeniería en alimentos c Microbiología r 2015 Licenciatura en Biotecnología
Más detallesPRACTICA N O 3 OBTENCION DE MITOSIS EN TEJIDO VEGETAL INDICE MITOTICO INDICE DE FASE
PRACTICA N O 3 OBTENCION DE MITOSIS EN TEJIDO VEGETAL INDICE MITOTICO INDICE DE FASE 1. INTRODUCCION En biología, la mitosis es un proceso que ocurre en el núcleo de las células eucarióticas y que precede
Más detallesEXTRACCIÓN DE ADN (Doyle & Doyle, 1987)
EXTRACCIÓN DE ADN (Doyle & Doyle, 1987) MATERIALES Y REACTIVOS (Grado biología molecular a analítico) Cloroformo Alcohol Isoamilico Isopropanol. Etanol al 70%. Bloques de Hielo Microcentrifuga Bloque de
Más detallesELECTROFORESIS. Objetivo de la clase. *fundamentos *procedimientos *algunas aplicaciones. Conocer los métodos electroforéticos
ELECTROFORESIS Objetivo de la clase Conocer los métodos electroforéticos *fundamentos *procedimientos *algunas aplicaciones Definición de electroforesis Proceso de separación que se basa en la diferente
Más detallesAnálisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos
Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos Sesión nº 5 Electroforesis en gel de agarosa M. Somma, M. Querci WORLD HEALTH ORGANIZATION REGIONAL OFFICE FOR
Más detallesELECTROFORESIS AVANZADA
Ref. ELECAVANZADA (4 prácticas) 1. OBJETIVO DEL EXPERIMENTO ELECTROFORESIS AVANZADA El objetivo de este experimento es introducir a los alumnos en el conocimiento de la teoría electroforética y familiarizarse
Más detalles4. TIPADO GENÉTICO DE BACTERIAS PATÓGENAS MEDIANTE ELECTROFORESIS EN CAMPOS PULSADOS (PFGE) Materiales - Bacterias crecidas en placas de agar
4. TIPADO GENÉTICO DE BACTERIAS PATÓGENAS MEDIANTE ELECTROFORESIS EN CAMPOS PULSADOS (PFGE) Materiales - Bacterias crecidas en placas de agar - Agarosa de grado molecular - Agarosa de bajo punto de fusión
Más detallesEnsayos de restricción
Ensayos de restricción Vector con inserto= Vector recombinante 6500pb Objetivos de ensayos de restricción de plásmidos Conocer el principio de separación y detección de ácidos nucleicos en geles de agarosa.
Más detallesConceptos y técnicas en ecología fluvial
Conceptos y técnicas en ecología fluvial Edición a cargo de: ARTURO ELOSEGI Profesor titular de Ecología en la Universidad del País Vasco SERGI SABATER Catedrático de Ecología en la Universidad de Girona
Más detallesTaller Ciencia para Jóvenes CIMAT 2012 Bachillerato julio 8 14 Cinvestav Campus Guanajuato
Introducción Taller Ciencia para Jóvenes CIMAT 2012 Bachillerato julio 8 14 Cinvestav Campus Guanajuato Visita al CINVESTAV - Irapuato. 19 julio, 2012. Las bacterias son los organismos más abundantes que
Más detallesELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA CON SDS SDS-PAGE
ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA CON SDS SDS-PAGE FUNDAMENTO TEÓRICO La electroforesis es una técnica de separación de moléculas cargadas por migración en un campo eléctrico. Las moléculas se separan
Más detallesDETERMINACIÓN DE FLUORUROS EN AGUAS CON EL ELECTRODO SELECTIVO
DETERMINACIÓN DE FLUORUROS EN AGUAS CON EL ELECTRODO SELECTIVO 1. OBLETIVO: 1 Llevar a cabo medidas de potenciales con un electrodo selectivo de iones fluoruro para determinar la concentración de este
Más detallesBIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR. LABORATORIO No 4: EXTRACCIÓN DE ARN
BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR LABORATORIO No 4: EXTRACCIÓN DE ARN 1. INTRODUCCIÓN En los organismos celulares el ARN es la molécula encargada de dirigir la síntesis de proteínas, pues aunque el ADN es el
Más detallesMANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO INGENIERIA ENBIOTECNOLOGÍA INGENIERÍA GENÉTICA FICHA TECNICA FICHA TÉCNICA SEMINARIO DE BIOTECNOLOGÍA MÉDICO-FARMACÉUTICA Fecha: Nombre del catedrático: 10-Julio-2012
Más detallesUniversidad de la República Oriental del Uruguay Facultad de Ingeniería Instituto de Ingeniería Eléctrica MANUAL DE USUARIO ELECTROFORESIS
Universidad de la República Oriental del Uruguay Facultad de Ingeniería Instituto de Ingeniería Eléctrica MANUAL DE USUARIO ELECTROFORESIS DICIEMBRE 2006 Tratamiento de Imágenes por Computadora Proyecto
Más detallesTema 5. Propiedades de transporte
Tema 5 Propiedades de transporte 1 TEMA 5 PROPIEDADES DE TRANSPORTE 1. TEORÍA CINÉTICA DE LOS GASES POSTULADOS DE LA TEORÍA CINÉTICA DE LOS GASES INTERPRETACIÓN CINÉTICO MOLECULAR DE LA PRESIÓN Y LA TEMPERATURA
Más detallesELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA. Agustín Garrido. agugarrido@hotmail.com
1 ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA Agustín Garrido agugarrido@hotmail.com Introducción En este trabajo práctico se utilizó la técnica de electroforesis. Este proceso se basa en la migración de las moléculas
Más detallesPRÁCTICA 3 DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DEL pk DE UN INDICADOR
PRÁCTICA 3 DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DEL pk DE UN INDICADOR Material Productos 2 matraces aforados de 250 ml Hidróxido de sodio en lentejas 2 matraces aforados de 25 ml Disolución de hidróxido
Más detallesPRÁCTICO Nº 6. ACIDOS NUCLEICOS II Espectrofotometría, Electroforesis, Mapas de Restricción
PRÁCTICO Nº 6. ACIDOS NUCLEICOS II Espectrofotometría, Electroforesis, Mapas de Restricción Espectrofotometría de ácidos nucleicos Los dobles enlaces conjugados de las bases nitrogenadas hacen que los
Más detalles3. Materiales y Métodos
3. Materiales y Métodos El análisis de haplotipos se realizó mediante la caracterización de variaciones alélicas reportadas con anterioridad. En total de analizaron cinco marcadores polimórficos: tres
Más detallesDESARROLLO COGNOSCITIVO Y APRENDIZAJE
Prof. Jhonis Valbuena Cátedra: Análisis Instrumental La Electrofóresis es un método de la Química Analítica que utiliza corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomolèculas según su
Más detalles38. Purificación de ADN plasmídico y electroforesis del mismo en gel de agarosa
38. Purificación de ADN plasmídico y electroforesis del mismo en gel de agarosa José Luis Caballero Repullo, Enriqueta Moyano, Juan Muñoz Blanco Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Campus
Más detallesMódulo 1 Biología Molecular Genética Molecular II 2009. Módulo 1. Amplificación de un fragmento de ADN genómico por PCR
Módulo 1 Amplificación de un fragmento de ADN genómico por PCR En este primer módulo se amplificará por PCR, mediante el uso de oligonucleótidos específicos, un fragmento de ADN genómico de Aspergillus
Más detalles27. Métodos para la cuantificación de proteínas
27. Métodos para la cuantificación de proteínas Emilio Fernández Reyes y Aurora Galván Cejudo Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Campus Universitario de Rabanales, Edificio Severo Ochoa,
Más detallesPractica 6 ELECTROFORESIS HORIZONTAL Corrimiento y visualización de ADN
Practica 6 ELECTROFORESIS HORIZONTAL Corrimiento y visualización de ADN La Biología Molecular es una ciencia cuyo objetivo fundamental es la comprensión de todos aquellos procesos celulares que contribuyen
Más detallesTÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR
TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR Dra. Mariana L. Ferramola Curso de Técnicas moleculares aplicadas a bioquímica clínica. Área de Qca. Biológica FQByF, UNSL 2014 REACCIÓN DE PCR Esta reacción permite obtener
Más detallesELABORACIÓN N DE MEZCLA PARA PCR. Raquel Asunción Lima Cordón
ELABORACIÓN N DE MEZCLA PARA PCR Raquel Asunción Lima Cordón PCR Polymerase Chain reaction (reacción en cadena de la polimerasa) Sintetizar muchas veces un fragmento de ADN PCR: simulación de lo que sucede
Más detallesELECTROFORESIS AVANZADA
Ref.ELECAVANZADA (4 prácticas) 1.OBJETIVO DEL EXPERIMENTO ELECTROFORESIS AVANZADA El objetivo de este experimento es introducir a los alumnos en el conocimiento de la teoría electroforética y familiarizarse
Más detallesREACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Microbiología de los Alimentos Ingeniería en alimentos
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Microbiología de los Alimentos Ingeniería en alimentos 2015 Desarrollada por Kary Mullis en 1986 Técnica in vitro que permite amplificar enzimáticamente una región
Más detallesELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL (ISOELECTROENFOQUE y SDS-PAGE) Isoelectroenfoque (IEF)
ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL (ISOELECTROENFOQUE y SDS-PAGE) Introducción Como bien sabemos, la electroforesis es un método de separación de moléculas biológicas que se basa en la migración de las mismas
Más detallesTRABAJO PRÁCTICO Nº 5: ÁCIDOS NUCLEICOS DESCRIPCIÓN DE LOS MÉTODOS A UTILIZAR
TRABAJO PRÁCTICO Nº 5: ÁCIDOS NUCLEICOS DOCENTES: Andrés Ciocchini, Gabriela Niemirowicz. DESCRIPCIÓN DE LOS MÉTODOS A UTILIZAR Purificación de ácido desoxiribonucleico (ADN) por partición diferencial
Más detallesCURSO DE EXTENSIÓN TEÓRICO PRÁCTICO HERRAMIENTAS EFICIENTES PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS DE INTERÉS AGROINDUSTRIAL
LIBRO DE MEMORIAS 2 CURSO DE EXTENSIÓN TEÓRICO PRÁCTICO HERRAMIENTAS EFICIENTES PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS DE INTERÉS AGROINDUSTRIAL Santiago de Cali, 23 al 28 de agosto de 2010 3 Libro de memorias
Más detallesElectroforesis. Dr. Héctor L. Ayala del Río AMGEN Bruce Wallace Program Departamento de Biología UPR-Humacao VER VIDEO CARGADO GEL
Electroforesis Dr. Héctor L. Ayala del Río AMGEN Bruce Wallace Program Departamento de Biología UPR-Humacao VER VIDEO CARGADO GEL 1 Electroforesis l Método utilizado para separar y purificar macromoléculas:
Más detallesInstrucciones de uso. Wipe test. Control de Contaminación. Kit de pruebas para la detección de contaminaciones basado en genética molecular REF 7091
Instrucciones de uso Wipe test Control de Contaminación Kit de pruebas para la detección de contaminaciones basado en genética molecular REF 7091 40 Reacciones 1. Descripción del Producto El uso de la
Más detallesANEXOS. Anexo 1 Transformación mediante electroporación
Anexo 1 Transformación mediante electroporación ANEXOS En este método de transformación de E. coli se requieren células electrocompetentes. La preparación de estas células consta de los siguientes pasos:
Más detallesPrácticas Integrales I Año Lectivo 2007-2008 Modulo I Procedimientos e instrumentación Básica en el Laboratorio
Práctica N 2 Mediciones y Tipos de Errores 1.- Objetivos: Seleccionar el instrumento más apropiado para realizar una medición considerando su precisión y exactitud. Realizar transformaciones de unidades
Más detallesELECTROFORESIS GENERALIDADES Y APLICACIONES CLINICAS
ELECTROFORESIS GENERALIDADES Y APLICACIONES CLINICAS Marcelo Castillo Navarrrete, T.M. MsCs (C) Facultad de Medicina Carrera Tecnología Médica 18 de Noviembre de 2004 Fundamentos de Electroforesis Alta
Más detallesConstrucción de la biblioteca en cósmidos de Azospirillum brasilense CBG 497.
Construcción de la biblioteca en cósmidos de Azospirillum brasilense CBG 497. Extracción de DNA genómico El DNA de A. brasilense CBG 497 se extrajo siguiendo el método descrito por la casa comercial distribuidora
Más detallesPrácticas de Laboratorio 2014 SEMANA 27 LIPIDOS SIMPLES PROPIEDADES FÍSICAS Elaborado por: Licda. Lucrecia Casasola de Leiva
UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS, CUM UNIDAD DIDÁCTICA DE QUÍMICA, PRIMER AÑO Prácticas de Laboratorio 2014 SEMANA 27 LIPIDOS SIMPLES PROPIEDADES FÍSICAS Elaborado por:
Más detallesEXPERIMENTO 3. CURVAS DE TITULACION DE AMINOACIDOS. DETERMINACION DE VALORES DE pk
EXPERIMENTO 3 CURVAS DE TITULACION DE AMINOACIDOS. DETERMINACION DE VALORES DE pk REQUISITOS Repasar los conceptos sobre las propiedades de los aminoácidos (AA), reacciones ácido base, ph, pk, soluciones
Más detallesIV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN IV.1 Síntesis de Nanopartículas de Oro En primera instancia la obtención de las nanopartículas de oro es corroborada a simple vista mediante el cambio
Más detallesMateriales para la secuenciación de ADN
Introduccion La Secuenciación Sanger es un método de secuenciación de ADN en el que el ADN diana se desnaturaliza y se hibrida con un cebador de oligonucleótidos, que se extiende entonces gracias a la
Más detallesCódigo: IDX-016 Ver: 1 TOXO. Sistema para la detección de la presencia de ADN de Toxoplasma gondii. Reg. MSP 21205
Sistema para la detección de la presencia de ADN de Toxoplasma gondii Reg. MSP 21205 Valdense 3616. 11700. Montevideo. Uruguay. Teléfono (598) 2 336 83 01. Fax (598) 2 336 71 60. info@atgen.com.uy www.atgen.com.uy
Más detallesIV Curso Avanzado WHO GSS 2006 Buenos Aires 15 al 24 de mayo de 2006
IV Curso Avanzado WHO GSS 2006 Buenos Aires 15 al 24 de mayo de 2006 REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) EN EL DIAGNOSTICO DE Campylobacter jejuni/coli Viernes 19 de mayo María Rosa Viñas Servicio
Más detallesPROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS. Es un ácido capaz de formar sales con iones cargados
Extracción de ADN Genética molecular PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS Es un ácido capaz de formar sales con iones cargados positivamente (cationes). Es soluble en soluciones concentradas
Más detallesManual de Laboratorio de Química Analítica
PRÁCTICA 4: DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE ÁCIDO ACÉTICO EN UNA MUESTRA DE VINAGRE BLANCO INTRODUCCIÓN El vinagre blanco es una solución de ácido acético obtenida por fermentación. El análisis se
Más detalles40. Identificación de clones y fragmentos de ADNc mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
40. Identificación de clones y fragmentos de ADNc mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) José Luis Caballero Repullo, Enriqueta Moyano Cañete, Juan Muñoz Blanco Departamento de Bioquímica
Más detalles5. MATERIALES Y MÉTODOS
5. MATERIALES Y MÉTODOS 6.1. POBLACIÓN EN ESTUDIO Mediante campañas de salud, que proporcionaron evaluación médica general por personal médico especialista de la Facultad de Medicina de la Universidad
Más detallesELECTROFORESIS Fundamento.
ELECTROFORESIS La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas según su tamaño y carga eléctrica a través
Más detallesFuente de Poder para electroforesis Crudo Caamaño
C r u d o C a a m a ñ o M A N U A L D E I N S T R U C C I O N E S Fuente de Poder para electroforesis Crudo Caamaño Modelo M-O Laboratorios Norte S.R.L. Av. Federico Lacroze 3360 (1426) Ciudad Autónoma
Más detallesBaños de bloque Bloques Electroforesis Otros Biología Molecular PCR Separación y recogida de células. Cromakit, S.L. Biologia Molecular
Baños de bloque Bloques Electroforesis Otros Biología Molecular PCR Separación y recogida de células Cromakit, S.L. Biologia Molecular Contenido Baños de bloque 4 Bloques 6 Electroforesis 10 Cubetas electroforesis
Más detalles7. Medida del ph: Disoluciones reguladoras. Precipitación isoeléctrica de la caseína
7. Medida del ph: Disoluciones reguladoras. Precipitación isoeléctrica de la caseína José Peinado Peinado, Fermín Toribio Meléndez-Valdés Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Campus Universitario
Más detallesPRÓTIDOS. 2.27 En el esquema se representa la fórmula general de un aminoácido. Indica qué es lo tapado con los recuadros del 1 al 4.
PRÓTIDOS 2.27 En el esquema se representa la fórmula general de un aminoácido. Indica qué es lo tapado con los recuadros del 1 al 4. 2.28 - Se podrían separar los distintos aminoácidos de una mezcla en
Más detallesDETERMINACIÓN DE LA LEY EXPERIMENTAL DE RAPIDEZ. ESTUDIO DE LA CINÉTICA DE YODACIÓN DE LA ACETONA. Grupo: Equipo: Fecha: Nombre(s):
DETERMINACIÓN DE LA LEY EXPERIMENTAL DE RAPIDEZ. ESTUDIO DE LA CINÉTICA DE YODACIÓN DE LA ACETONA. Grupo: Equipo: Fecha: Nombre(s): I. OBJETIVO GENERAL Comprender que la composición de un sistema reaccionante
Más detalles17.- Electroforesis de ácidos nucleicos en geles de agarosa. Aislamiento y caracterización electroforética de DNA plasmídico
17.- Electroforesis de ácidos nucleicos en geles de agarosa. Aislamiento y caracterización electroforética de DNA plasmídico Carmen Alicia Padilla Peña, Jesús Diez Dapena, Emilia Martínez Galisteo, José
Más detallesCUADERNO DE PRÁCTICAS GENETICA MOLECULAR HUMANA. Grado en Medicina
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR III FACULTAD DE MEDICINA UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID CUADERNO DE PRÁCTICAS GENETICA MOLECULAR HUMANA Grado en Medicina CURSO ACADÉMICO 2014/2015 INDICE
Más detallesSe necesitaban nuevas técnicas para resolver definitivamente el problema:
PRACTICA N O 4 CULTIVO DE LINFOCITOS PARA OBTENCION DE CROMOSOMAS Y BANDEO 1. INTRODUCCION Los cromosomas fueron observados por primera vez en células vegetales por Karl Wilhelm von Nägeli en 1842. Su
Más detallesRevista Cubana de Hematología, Inmunología y Hemoterapia. 2017; 36 (Suplemento).
Electroforesis capilar: nueva técnica para análisis de marcadores oncohematológicos en el Instituto de Hematología e Inmunología 1 Ruiz-Moleón V, Garrote-Santana H, Díaz-Alonso CA, Fernández-Martínez L,
Más detallesBLOQUE I.- CUÁL ES LA COMPOSICIÓN DE LOS SERES VIVOS? LAS MOLÉCULAS DE LA VIDA
BLOQUE I.- CUÁL ES LA COMPOSICIÓN DE LOS SERES VIVOS? LAS MOLÉCULAS DE LA VIDA UNIDAD DIDÁCTICA 1. Bioelementos y biomoléculas. Agua y sales minerales. Describir qué es la biología. Conocer las características
Más detallesCalor específico de un metal
Calor específico de un metal Objetivos Determinar el calor específico del Cobre (Cu). Comprobar experimentalmente la ley cero de la Termodinámica. Introducción Diferentes sustancias requieren diferentes
Más detallesUniversidad de Los Andes Facultad de Medicina Instituto Inmunología Clínica Maestría en Inmunología
TÉCNICAS EN BIOLOGÍA MOLECULAR RESPONSABLE: Dra. Lisbeth Berrueta. CREDITOS: 2 El curso de Técnicas de Biología Molecular está destinado a profesionales del área biomédica con conocimientos básicos relativos
Más detalles41. Comprobación de colonias transformantes mediante PCR y electroforesis
41. Comprobación de colonias transformantes mediante PCR y electroforesis Aurora Galván Cejudo, Manuel Tejada, Antonio Camargo, José Javier Higuera, Vicente Mariscal, Emilio Fernández Reyes Departamento
Más detallesOndas. Opción Múltiple
Ondas. Opción Múltiple PSI Física Nombre: 1. La distancia recorrida por una onda en un período se llama A. Frecuencia B. Período C. Velocidad de onda D. Long de onda E. Amplitud 2. Cuál de las siguientes
Más detallesTÉCNICAS DE ANÁLISIS GENÉTICO: Extracción de ADN.
Trabajo Práctico 2.2 TÉCNICAS DE ANÁLISIS GENÉTICO: Extracción de ADN. Desde el reconocimiento del ADN como "la molécula de la vida", se conoce que en ella se encuentran cifradas las instrucciones que
Más detallesTécnicas de Biología Molecular. Biol 3051L
Técnicas de Biología Molecular Biol 3051L Objetivos El cortar el DNA con enzimas de restricción y hacer corridas de geles usando electroforesis es muchas veces el primer paso para estudiar un gen. En este
Más detallesUNIVERSIDAD DON BOSCO DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS LABORATORIO DE FÍSICA ASIGNATURA: ELECTRICIDAD Y MAGNETISMO
UNIVERSIDAD DON BOSCO DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS LABORATORIO DE FÍSICA ASIGNATURA: ELECTRICIDAD Y MAGNETISMO I. OBJETIVOS LABORATORIO : RESISTIVIDAD ELÉCTRICA Determinar la resistividad eléctrica
Más detallesIntroducción. Electroforesis zonal Campo aplicado a un soporte estabilizante Muestra dispuesta sobre una zona reducida del soporte
Introducción Técnica analítica separativa: Transporte de moléculas cargadas bajo la acción de un campo eléctrico Movilidad electroforética depende de: La carga de la molécula Depende del medio ph Fuerza
Más detalles5.- Materiales y métodos
5.- Materiales y métodos 5.1 Obtención del RNA El material genético usado para las pruebas fue RNA correspondiente a las cepas A/New Caledonia/20/99 (H1N1), A/Panamá/2007/99 (H3N2) y B/sicuani/379/99,
Más detallesVISCOSIDAD DE LÍQUIDOS NO NEWTONIANOS
1. PROBLEMA VISCOSIDAD DE LÍQUIDOS NO NEWTONIANOS Para cada uno de los líquidos suministrados, describa el comportamiento de la viscosidad en un reograma e indique de qué tipo de fluidos se trata y cuál
Más detallesLaboratorio. Objetivos I N T R O D U C C I Ó N. Al finalizar este laboratorio el estudiante podrá:
Laboratorio 12 Biología molecular Objetivos Al finalizar este laboratorio el estudiante podrá: 1. Conocer los principios básicos de la técnica de electroforesis y su aplicación al análisis del ADN. 2.
Más detallesAMPLIFICACIÓN DE ADN POR REACCIÓN EN CADENA DE POLIMERASA (PCR)
Universidad Interamericana de Puerto Rico Recinto de Fajardo Departamento de Ciencias y Tecnología AMPLIFICACIÓN DE ADN POR REACCIÓN EN CADENA DE POLIMERASA (PCR) Trasfondo La reacción en cadena de la
Más detalles3. MATERIALES Y MÉTODOS
3. MATERIALES Y MÉTODOS El proceso general llevado a cabo en la presente tesis se ilustra en el siguiente esquema: Exudado uretral/ cervical y/o biopsias Extracción del ADN PCR Digestión Algoritmo computacional:
Más detallesUNIVERSIDAD ESTATAL DEL SUR DE MANABÍ Creada mediante Registro Oficial Nº 261 del 7 de Febrero 2001 CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO SILABO
1. DATOS GENERALES: SILABO UNIDAD ACADEMCIA: CIENCIAS DE LA SALUD. CARRERA: LABORATORIO CLINICO Asignatura/Módulo: Biología Molecular Código: APE 504 PREREQUISITO: ABE 103 CORREQUISITO: NINGUNO Área Académica:
Más detallesLaboratorio de Marcadores Moleculares del Programa de Cereales y Granos Nativos
Laboratorio de Marcadores Moleculares del Programa de Cereales y Granos Nativos GUÍA PRÁCTICA: INTRODUCCIÓN AL USO DE MARCADORES MOLECULARES EN EL ANÁLISIS DE DIVERSIDAD GENÉTICA Bloque Práctico (Chirinos
Más detallesDEPARTAMENTO DE GENÉTICA UNIVERSIDAD DE GRANADA FUNDAMENTOS DE BIOLOGÍA APLICADA I 4º CURSO DE BIOLOGÍA
DEPARTAMENTO DE GENÉTICA UNIVERSIDAD DE GRANADA FUNDAMENTOS DE BIOLOGÍA APLICADA I 4º CURSO DE BIOLOGÍA MÓDULO DE GENÉTICA TÉCNICAS MOLECULARES DE ANÁLISIS GENÉTICO AISLAMIENTO Y CLONACIÓN DE ADN SATÉLITE
Más detallesBIOLOGÍA MOLECULAR TOTAL DE PUNTOS: 90. País: ESPAÑA
XII OLIMPIADA IBEROAMERICANA DE BIOLOGÍA SETIEMBRE 2018 LOJA-ECUADOR EXAMEN PRÁCTICO BIOLOGÍA MOLECULAR TOTAL DE PUNTOS: 90 TIEMPO PERMITIDO: 120 minutos País: ESPAÑA ESCRIBA EL CÓDIGO EN EL SIGUIENTE
Más detallesN 1 Reacción n en Cadena de la Polimerasa
Trabajo Práctico N 1 Reacción n en Cadena de la Polimerasa Definición n e importancia. Usos y aplicaciones. Optimización. Tipos de PCR. Electroforesis. Fundamentos. Asociado al Programa Teórico: Tema 2.
Más detallesMódulo 2 Biología Molecular Genética Molecular II Módulo 2. Clonación y Selección de moléculas recombinantes
Módulo 2 Clonación y Selección de moléculas recombinantes El fragmento de ADN amplificado por PCR en el módulo anterior se introdujo en un vector pgem T Easy (Ver Anexo 2) utilizando una ligasa. En la
Más detallesTRABAJO PRÁCTICO N 0 3 TERMOQUÍMICA
TRABAJO PRÁCTICO N 0 3 TERMOQUÍMICA OBJETIVOS Determinación de la variación de entalpía asociada a procesos químicos. Aplicación de conceptos termodinámicos: temperatura, calor, entalpía. Verificación
Más detallesVidrafoc Life Science
Estamos muy satisfechos de poder presentarle nuestra nueva línea de Vidrafoc Life Science Desde sus inicios, en 1968, con la fabricación de vidrio científi co y posteriormente con la distribución de material
Más detallesCódigo: KIT-005 Ver: 1 MTHFR C677T
Sistema para detección de la alteración C677T en el gene que codifica para la Metilen-tetrahidrofolato reductasa humana 1 Valdense 3616. 11700. Montevideo. Uruguay. Teléfono (598) 2 336 83 01. Fax (598)
Más detallesCuando la sustancia que se difunde es el agua, y cuando la difusión se lleva a cabo a través de una membrana semi-permeable el proceso se llama
OSMOSIS Cuando la sustancia que se difunde es el agua, y cuando la difusión se lleva a cabo a través de una membrana semi-permeable el proceso se llama ósmosis. También el movimiento del agua hacia abajo
Más detallesACIDEZ Y ALCALINIDAD EN AGUAS NATURALES Y RESIDUALES
ACIDEZ Y ALCALINIDAD EN AGUAS NATURALES Y RESIDUALES Se asume que usted trabaja en un laboratorio de análisis de agua y está por recibir un lote de muestras (15 muestras) de descargas industriales y deberá
Más detallesProtocolos de preparación de muestras
Protocolos de preparación de muestras Contenido 1. TIPOS DE MUESTRA 2. PROTOCOLO DE PREPARACIÓN DE MUESTRA 2.1 Producto de PCR crudo (sin purificar). 2.2 Producto de PCR crudo en gel (sin purificar). 2.3
Más detallesNombres de los integrantes: Práctica 4. Determinación de concentraciones y las diversas maneras de expresarla. Segunda parte: titulaciones rédox.
Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Química Laboratorio de Química General II 1 Nombres de los integrantes: Grupo Equipo Práctica 4. Determinación de concentraciones y las diversas maneras
Más detalles