VOLUMEN V: MANUAL DE INMUNOLOGÍA

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1 Manual bir VOLUMEN V: MANUAL DE INMUNOLOGÍA Autor: Dr. Tomás E. Verdura González Editora: Dra. Iliana Perdomo López

2 Manual BIR. VOLUMEN V: MANUAL DE INMUNOLOGÍA Autor: Dr. Tomás E. Verdura González Iliana Perdomo López (editora). Depósito legal: DLC Reservado todos los derechos. Está prohibido, bajo las sanciones penales y el resarcimiento civil previsto en las leyes, reproducir, registrar o transmitir esta publicación, íntegra o parcialmente por cualquier sistema de recuperación y por cualquier medio, sea mecánico, electrónico, magnético, por fotocopia o por cualquier otro, sin la autorización previa por escrito de la editora.

3 ÍNDICE DE MANUAL DE INMUNOLOGÍA Tema 1. Introducción. Generalidades. Células y tejidos del sistema inmune... 1 Tema 2. Inmunoglobulinas. Estructura funcional Tema 3. Genética de las inmunoglobulinas Tema 4. El sistema del complemento Tema 5. Complejo principal de histocompatibilidad (MHC) Tema 6. Citocinas Tema 7. Desarrollo de linfocitos B Tema 8. Receptor de Ag del linfocito T Tema 9. Desarrollo de linfocitos T Tema 10. Transducción de señales mediante los receptores de Ag de linfocitos B y T Tema 11. Inmunidad mediada por linfocitos T Tema 12. Activación de linfocitos B y producción de anticuerpos Tema 13. Regulación de la respuesta inmune Tema 14. Inmunidad frente a microorganismos Tema 15. Inmunodeficiencias Tema 16. Reacciones de hipersensibilidad Tema 17. Autoinmunidad Tema 18. Trasplantes y aloinmunidad Tema 19. Respuesta inmune frente a tumores Tema 20. Técnicas Inmunológicas y manipulación de la respuesta inmune tumores Bibliografía

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5 InspiracleBIR/2014 Inmunología La respuesta inespecífica o innata constituye la primera barrera defensiva del organismo y no requiere, para su funcionamiento óptimo, de contacto previo con el agente agresor. Por lo general a igual estimulo siempre se desarrolla con igual intensidad (no se amplifica) y su sistema de discriminación de las características fisicoquímicas del agente agresor es menos sofisticado (solo reconoce estructuras muy primitivas y conservadas filogenéticamente y estímulos físicos o químicos). Consta de estructuras y mecanismos físico-químicos como la existencia de las barreras naturales (la piel y las mucosas impiden la fácil penetración de agentes externos), el flujo constantes de secreciones (flujo de orina que arrastra bacterias) y las secreciones de sustancias con actividad antibacteriana (como la lisosima de la saliva y lágrimas que rompe la unión de azúcares en las paredes bacterianas, el PH extremo del estómago, los ácidos grasos de la piel, etc). También entre estos mecanismos inespecíficos se encuentran células y moléculas que participan fundamentalmente en los procesos de inflamación, fagocitosis e histolisis como los leucocitos polimorfonucleares neutrófilos, los macrófagos y las células NK. A esto se le suma la participación de otras células que tienen una acción con carácter más particular como basófilos, eosinófilos, mastocitos, plaquetas, etc. En ella participan también moléculas como las citoquinas (interleuquinas, quimioquinas, interferones, etc.), las enzimas citoliticas intracelulares, sistemas moleculares integrados como el complemento y otro gran número de estructuras de membrana, mecanismos bioquímicos (ej. proteinas de fase aguda como el fibrinógeno y la proteina C reactiva, etc.) y metabólicos cuya actividad integrada y coordinada tiene como finalidad el aislamiento y la destrucción de los agentes agresores sean de naturaleza física, química o biológica. La respuesta específica o adquirida se desarrolla solo (especificidad) frente a las moléculas extrañas (antígenos) que indujeron su iniciación y está mediada fundamentalmente por los linfocitos y las sustancias liberadas por los mismos (anticuerpos, citoquinas, etc.) Requiere del reconocimiento antigénico (discriminación, especificidad, clonalidad), lo cual le caracteriza, además de otras propiedades como memoria, amplificación y autorregulación. Mejora cuantitativa y cualitativamente con los subsiguientes encuentros con el antígeno que le dio origen (cambios en la respuesta secundaria con respecto a la primaria). 2

6 Inmunología InspiracleBIR/2014 Rep. De. Abbas. A, Lichtman. A, Pillai. S. Inmunología Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic Cuando por primera vez penetra un antígeno (Ag) al organismo, se pone en contacto con el sistema inmune y genera la activación, proliferación y diferenciación de los linfocitos, dando lugar a la formación de gran cantidad de células de memoria y células efectoras. Esta respuesta primaria se caracteriza por ser de poca intensidad y corta duración. A partir de un segundo contacto y en lo sucesivo la respuesta se considera secundaria y parte de la gran cantidad de células de memoria generadas en la respuesta primaria por lo que será más rápida, de mayor intensidad y más larga duración. Como veremos más adelante los tipos de anticuerpos (Ac), su afinidad por el Ag y otras propiedades también varían de una respuesta a otra en función del tipo de Ag y otros condicionantes. 3

7 Inmunología InspiracleBIR/2014 Los linfocitos B pueden ser de dos tipos: B 1 (expresan CD5 en su membrana y altos niveles de IgM de especificidades limitadas y escasas o nulas IgD) Se suelen localizar en serosas (Ej. peritoneo) y se les relaciona con activación policlonal y desarrollo de tumores. B 2 (carecen de CD5 y expresan niveles más altos de IgD) Son los linfocitos B habituales y mayoritarios de la circulación y tejidos. Otros marcadores característicos de los linfocitos B son CD19, CD21 (receptor del virus de Ebstein-Barr) y CD40. Linfocitos T: De origen medular pero maduran en el timo. Son una población celular muy heterogénea (varias subpoblaciones) funcionalmente diferentes Responsables de la llamada inmunidad celular, con un papel central cooperador y regulador de toda la respuesta inmune y otras funciones efectoras citotóxicas. Reconocen al antígeno mediante el receptor de antígenos de linfocitos T (TCR). Se clasifican en diferentes subpoblaciones funcionales: T 1 o linfocitos T δ: localizados fundamentalmente en epitelios, se caracterizan por poseer cadenas y δ conformando su receptor clonotípico y tener menor diversidad de cadenas. Al parecer pueden ser capaces de activarse sin que medie procesamiento y presentación antigénica. Además de péptidos, como el resto de los linfocitos T, puede ser capáz de reconocer otras moléculas. T 2 o linfocitos : Son los más abundantes en el organismo (sangre, linfa, órganos linfoides secundarios) y se caracterizan por conformar su receptor clonotípico con cadenas y. A su vez se subdividen en: citotóxicos o citolíticos (Tc) (median la lisis de células dianas), que expresan CD8 en su membrana, y cooperadores (Th) (cooperan con los linfocityos B y otros linfocitos T para que puedan realizar sus funciones) que expresan CD4. Los CD4 son más abundantes (aproximadamente el doble que las CD8). Otros marcadores identificativos son CD3 (correceptor) y CD2 (molécula de adhesión celular y como transductor de señales). Los linfocitos Tc CD8+ reconocen el antígeno en el contexto de una molécula MHC-I, mientras que los Th CD4+ lo reconocen en el contexto de una molécula MHC-II. A su vez los Th se subdividen en Th1 o Th2 según el patrón de citoquinas que producen (Th1: IL-2, INF- ; Th2: IL-4, 5, 6, 10 y 13). También podemos clasificar a los LT según la molécula CD45. Esta se presenta en forma CD45RA en los linfocitos vírgenes y CD45RO en los activados. 7

8 Inmunología InspiracleBIR/2014 Rep. De. Abbas. A, Lichtman. A, Pillai. S. Inmunología Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic

9 Inmunología InspiracleBIR/2014 El proceso de maduración de los timocitos parece ser predominantemente en dirección corteza-médula. Durante este proceso mueren aproximadamente el 95% de los timocitos. Esto se debe a un proceso de selección tímica que se realiza en dos fases (selección positiva y selección negativa) y está condicionado por el grado de afinidad del TCR con las moléculas del MHC de las células epiteliales y presentadoras del timo. Este proceso de selección garantiza que se eliminen los clones celulares autorreactivos. Médula ósea: se ocupa de la producción de todas las células hematopoyéticas. En los mamíferos esta función se lleva acabo en islotes de tejido linfoide en el hígado y la médula ósea fetal y posteriormente en la médula ósea en el adulto. Es donde ocurre la diferenciación y maduración de linfocitos B y la generación de los precursores de los linfocitos T que migrarán hacia el timo. También en ella ocurren procesos de selección mediados por las interacciones de los linfocitos B inmaduros y las células del estroma medular. Órganos linfoides secundarios. Bazo: Se trata de un órgano situado en el hipocondrio izquierdo, cuya superficie externa se compone de una cápsula fibrosa (tejido conectivo) que penetra profundamente en el órgano. En él se distingue la pulpa roja, formada fundamentalmente por capilares sinusoidales, que constituye un reservorio de hematíes (para emitir a la circulación en situaciones de emergencia) y donde ocurre el aclaramiento de células senescentes); y la pulpa blanca, formada por tejido linfoide, dispuesto alrededor de una arteriola central y organizado en áreas T y áreas B. Las células T se disponen inmediatamente alrededor de la arteriola central (vaina periarteriolar), mientras que las células B se disponen exteriores a la misma formando folículos primarios (folículos no estimulados) y secundarios (caracterizados por presentar centro germinativo o germinal que es una zona rica en células activadas en división y diferenciadas). En los folículos se localizan además las células foliculares dendríticas especializadas en presentar Ag a los linfocitos B. Sin embargo, la ausencia de bazo (filtra Ag que se encuentran en el torrente circulatorio) no produce grandes trastornos inmunológicos, excepto cierto aumento del riesgo de infecciones por bacterias encapsuladas. Al parecer su función puede ser compensada cor la realizada por los ganglios linfáticos. 15

10 InspiracleBIR/2014 Inmunología Rep. De. Abbas. A, Lichtman. A, Pillai. S. Inmunología Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic Ganglios linfáticos: Localizados a lo largo de la red de vasos linfáticos, principalmente en las zonas de bifurcación y de gran afluencia de sustancias de origen externo. Son los órganos donde se desarrolla la respuesta inmune frente a los antígenos procedentes del espacio intersticial (drenados al torrente linfático). 16

11 Inmunología InspiracleBIR/2014 Tema 3. Genética de las inmunoglobulinas. (2012:126, 127) (2010: 127) (2005: 52) (2004: 180) (2003: 141, 142) Los linfocitos B de un individuo pueden sintetizar y producir una gran cantidad y diversidad de inmunoglobulinas diferentes (en el orden de especificidades diferentes) para poder reconocer la inmensa variedad de antígenos que existen en la naturaleza. Para lograr tal diversidad de moléculas de inmunoglobulinas con una cantidad de material genético limitado, se lleva a cabo, fundamentalmente, un proceso de recombinación de segmentos génicos (recombinación somática). Existen también otros mecanismos que contribuyen a la generación de diversidad. La síntesis de las cadenas ligeras y pesadas ocurre a partir de genes que se encuentran en cromosomas distintos (las cadenas pesadas en el cromosoma 14, las ligeras en el cromosoma 2 y las en el cromosoma 22). Además, esta información está en la línea germinal fraccionada en forma de bloques de genes que pueden combinarse de diferentes maneras (recombinación génica). Estos segmentos codifican por separado la parte variable, la parte constante y la parte por las que ambas regiones se unen. Los segmentos que codifican la parte variable son de dos tipos: segmentos V y segmentos D, responsables de la variabilidad y diversidad de las inmunoglobulinas respectivamente. Le siguen los segmentos J o de unión, responsables de unir los fragmentos anteriores con los segmentos C que codifican para la parte constante. El número de segmentos responsables de la codificación de la parte constante es muy limitado en relación con el número de segmentos que codifican la parte variable de las inmunoglobulinas. Estos segmentos están contenidos en los exones, que son aquellos fragmentos de DNA que serán transcritos para dar lugar a la síntesis de proteínas, y que se encuentran separados entre sí por fragmentos de DNA no codificadores de proteínas denominados intrones. Asociados a los segmentos V y situados en dirección 5' de los mismos, existen otros segmentos génicos conocidos como segmentos líder (L). Estos segmentos génicos codifican un péptido pequeño que servirá de guía tanto para las cadenas ligeras como pesadas a su paso por el retículo endoplásmico pero que se separa de estas cadenas antes de que las mismas se unan entre sí para formar la molécula completa de inmunoglobulina. 35

12 InspiracleBIR/2014 Inmunología Rep. De. Abbas. A, Lichtman. A, Pillai. S. Inmunología Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic A lo largo del proceso madurativo de los linfocitos B, se produce un reagrupamiento de segmentos de los genes para la iniciación de la síntesis de las cadenas ligeras y pesadas (recombinación), que siempre ocurre en el mismo orden. A medida que se produce el proceso madurativo de los linfocitos B, los segmentos V, D y J cambian de sitio en el cromosoma de tal manera que se colocan juntos. Posteriormente este conjunto V/D/J se reagrupa con el segmento C correspondiente quedando constituido en consecuencia un gen con toda la información de la cadena. En el linfocito B maduro están los genes reagrupados conformando la información secuencial de sus cadenas ligeras y pesadas y sólo podrá producir una conformación determinada anticuerpo. 36

13 InspiracleBIR/2014 Inmunología Los inmunocomplejos formados por la unión del anticuerpo y el antígeno pueden ser patógenos según sus características físico-químicas. Así dependiendo de su tamaño y otras propiedades físico-químicas, se mantendrán en circulación sin precipitar si son de muy pequeño tamaño o captados por los fagocitos si son de gran tamaño. Por el contrario los de tamaño intermedio pueden depositarse en los tejidos y causar lesiones. El tamaño de los IC depende de las proporciones moleculares relativas entre Ags y Acs, siendo las relaciones de equivalencia las que producen redes mayores con peligro de precipitación. Otros factores como la carga eléctrica también son determinantes para su efecto patológico. Los inmunocomplejos circularán por la sangre y se podrán localizar en diferentes tejidos del organismo, sobre todo sitios de alta presión, turbulencias y superficies de filtración como articulaciones, vasos sanguíneos bifurcados, glomérulos del riñón, procesos coroideos, etc. En la mayoría de los casos los inmunocomplejos se forman como consecuencia de infecciones; agudas en unos casos como los estreptococos (glomerulonefritis postestreptocócica), o persistentes como la hepatitis vírica tipo B o C; por exposición e inhalación persistente de agentes ambientales como hongos (pulmón del granjero) o proteínas animales (enfermedad del cuidador de aves) o bien como consecuencia de la presencia mantenida de altos niveles de autoanticuerpos en algunas enfermedades autoinmunes como lupus eritematoso sistémico o la artritis reumatoide. La unión de los anticuerpos tipo IgG a los antígenos solubles en el organismo causa el daño tisular por diferentes mecanismos. En primer lugar pueden inducir la activación de la cascada del complemento y la producción de C3a y C5a que atrae PMN al sitio inflamatorio. La activación de estos y la liberación de enzimas lisosomales causa daño tisular. Asimismo son atraídos al foco inflamatorio mastocitos y células cebadas que liberan histamina incrementando la permeabilidad vascular. La enfermedad del suero es el modelo de estas enfermedades por IC. Al inocular vía IV suero heterólogo el receptor recibe gran cantidad de Ag extraños en circulación. Ante estos Ag desarrolla una respuesta inmune que tarda unos días en formar a concentraciones adecuadas los Ac específicos para esos Ag. Cuando se alcanza la equivalencia entre Ag y anticuerpos se produce la precipitación del los complejos en los tejidos (articulaciones, glomérulos, plexos coroideos, vasos sanguíneos) con la subsecuente activación de C, fagocitos, inflamación y daño hístico, que se traducirán en los signos y síntomas de la enfermedad: fiebre, malestar general, dolor articular, púrpura, insuficiencia renal, etc. La enfermedad autoinmune representativa de este tipo de hipersensibilidad es el lupus eritematosos sistémico (LES). 178

14 Inmunología InspiracleBIR/2014 Mecanismos de daño hístico y producción de enfermedad en las hipersensibilidades mediadas por IC. Rep.de Abbas. A, Lichtman. A, Pillai. S. Inmunología Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic

15 InspiracleBIR/2014 Inmunología Antígenos de histocompatibilidad. El éxito o el fracaso de un determinado transplante depende, en gran medida, de la relación genética existente entre donante y receptor. Los genes del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC o sistema HLA en el caso de los humanos) codifica una serie de moléculas presentes en la superficie de las células (antígenos de histocompatibilidad) que son las que determinan el grado de compatibilidad o incompatibilidad en el transplante de órganos. La presencia en los órganos injertados de moléculas HLA distintas a las del receptor (situación de incompatibilidad HLA) provoca en éste el desarrollo de anticuerpos y células T citotóxicas dirigidas frente a dichas moléculas, lo que conduce al rechazo de dicho órgano. Por el contrario, si las moléculas HLA presentes en el órgano injertado son iguales a las del receptor (situación de compatibilidad HLA), se reduce en gran medida la incidencia y la severidad del rechazo, aumentando por tanto la supervivencia del injerto. En los mecanismos de destrucción del órgano transplantado tiene gran importancia el reconocimiento de los antígenos MHC-clase I por parte de los linfocitos T CD8 citotóxicos y al parecer su papel es crucial en las formas de rechazo más inmediatas, sin embargo al contemplar la sobrevida del transplante a largo plazo cobra mayor importancia la compatibilidad MHC-clase II. El hecho de que la compatibilidad HLA de clase II, sea más importante que la de clase I en el transplante de órganos, no está totalmente aclarado, pero parece tener su origen en la manera en que se induce la respuesta inmune. Se sabe que los linfocitos T CD4+, sólo son capaces de reconocer las moléculas que les son presentadas en la superficie de las células unidas a moléculas de clase II (restricción por clase II), por el contrario, los linfocitos T CD8+, sólo son capaces de reconocer moléculas que le son presentadas en la superficie de las células unidas a moléculas de clase I (restricción por clase I). Como la activación de las células T CD8+ requiere la participación de células T CD4+ activadas, es bastante lógico pensar que las diferencias en las moléculas de clase II induzcan una respuesta alogénica más intensa que las diferencias en las moléculas de clase I. Influencia de otros factores genéticos Un hecho demostrado repetidamente es que la supervivencia del injerto es mayor entre individuos emparentados HLA compatibles que entre individuos no emparentados con el mismo grado de compatibilidad HLA, esto puede deberse a diferentes causas. Si se trata de un estudio familiar, los hermanos que presentan los mismos haplotipos son HLA idénticos. Sin embargo, cuando se trata de individuos no emparentados no se puede hablar de individuos HLA idénticos, ya que aunque dos individuos presenten aparentemente las 190

16 Inmunología InspiracleBIR/2014 mismas moléculas HLA, el polimorfismo del sistema es tan elevado que pueden existir diferencias que no se puedan apreciar con la técnica de tipaje serológico, que es la que se utilizaba habitualmente hasta hace muy poco. Incluso contando con técnicas de biología molecular, hay que añadir técnicas confirmatorias como la de reacción cruzada y el cultivo mixto de linfocitos. Por otro lado, la compatibilidad MHC es importante en la supervivencia del injerto, pero no es el único sistema que influye en la aparición del rechazo. En este sentido se sabe que existe un grupo de elementos polimórficos, no relacionados entre sí ni con el MHC, denominados antígenos menores de histocompatibilidad que presentan importancia en el rechazo de injertos. Es lógico suponer que la probabilidad de que estas moléculas sean idénticas es mayor entre hermanos que entre individuos no emparentados. Mecanismos de presentación. Existen dos formas de reconocimiento de los aloantígenos por parte de los linfocitos del receptor, básicamente diferenciadas por el tipo de célula presentadora que participa en cada uno de ellos. Presentación directa: A pesar de que los órganos que van a ser transplantados son preparados previamente mediante lavados con soluciones apropiadas para eliminar todas las células que no son estructuralmente propias del órgano, junto con el órgano se transplantan leucocitos que no pudieron ser eliminados. Se les conoce como leucocitos passengers que posteriormente migran a los órganos linfoides del receptor y funcionan como células presentadoras de antígenos a los linfocitos T CD4 del receptor (el reconocimiento de sus MHC-clase II, más señales co-activadoras son capaces de producir la activación linfoide y la respuesta de rechazo). A este tipo de presentación se le conoce como presentación directa (presentadora del donante-linfocito del receptor). Presentación indirecta: En este caso ambas células, la célula presentadora y el linfocito T pertenecen al receptor. La APC del receptor endocita antígenos del órgano donado, los procesa y los presenta en forma de péptidos a los linfocitos T CD4, también pertenecientes al receptor, en un mecanismo igual al que el que ocurre normalmente en cualquier respuesta inmune. 191

17 Inmunología InspiracleBIR/2014 actualmente, de manera general, se les llama radioinmunoensayos indistintamente si lo que se marca es el Ag o el Ac. Estos métodos tienen alta sensibilidad y especificidad así como mínimas interferencias, pero dado lo engorroso de los métodos de separación que requieren, el elevado precio de los equipos lectores de radiactividad y el peligro que representa la radiactividad para la salud de los operadores como para el medio ambiente han sido sustituidos casi totalmente en la actualidad por los métodos inmunoenzimáticos. No obstante se siguen usando en la determinación cuantitativa de hormonas, drogas y algunos marcadores tumorales; todos ellos compuestos de muy bajo peso molecular y a bajas concentraciones en la muestra. Debido a las características de dichos analitos, y a la necesidad de cuantificarlos, se diseña el ensayo tipo competitivo, ya sea en una sola fase líquida pero con sistemas de separación, o en dos fases (una líquida y una sólida). Ej. RIA en medio líquido. Si queremos determinar la concentración de un hapteno (H) en un fluido corporal; habitualmente una hormona en orina o en suero, diseñaremos un ensayo competitivo para el cual será necesario realizar primeramente una curva patrón donde interpolar posteriormente la reacción específica con el analito (H) a concentración desconocida. Es necesario disponer de: a) un anticuerpo que se una específicamente a H (Ac anti-h). b) el analito (hapteno H) a concentración conocida. c) el mismo hapteno pero marcado con el isótopo radiactivo (hapteno radioactivo H*) también a concentración conocida.. Procedimiento: 1. Hacemos diluciones seriadas de H en tubos o pocillos de microtitulación 2. Añadir a todos los tubos una concentración conocida de H* 3. Añadimos a todos los tubos una cantidad fija de anticuerpos. Debe ponerse en cantidad limitada, no en exceso. Idealmente aquella que captura aproximadamente el 70% de la hormona marcada. 4. El Ac se unirá a los analitos marcados y sin marcar indiscriminadamente (misma estructura). En los primeros tubos se unirá más a los analitos sin marcar y en los finales en mayor medida a los marcados, dadas las concentraciones relativas a que estarán estos (competencia). 5. Posteriormente se aplica un método de separación para separar de la mezcla la radiactividad libre de la radiactividad ligada al anticuerpo y se mide una de las dos. La radiactividad que se una al Ac será menor a medida que es mayor la 221

18 InspiracleBIR/2014 Inmunología concentración del analito sin marcar, dado que las afinidades son iguales y la probabilidad de unión dependerá entonces de la concentración. 6. Con los datos obtenidos de la serie se realiza una curva patrón. Posteriormente se hace un ensayo semejante con las muestras con el analito a concentración desconocida y concentraciones conocidas del analito marcado y del Ac, para determinar el rango de la curva en la que se trabajará y donde se podrán interpolar los resultados. En este rango la cantidad de marcador unido a los Ac dependerá de la concentración del analito sin marcar y será inversamente proporcional a la concentración de este. El RIA competitivo también se puede hacer sobre fase sólida. Enzimoinmunoensayos (EIA). Inmunoensayos en los cuales la detección del compuesto a determinar es realizada al evaluar los cambios de concentración en el producto de una reacción enzimática. La enzima va unida a uno de los componentes de la reacción Ag-Ac y su actividad va a depender de la cantidad de ligando que se una a este componente. Las enzimas, como marcadores, presentan muchas ventajas ya que pueden diseñarse ensayos con tanta detectabilidad, sensibilidad, especificidad y precisión como las que presentan los RIA sin muchos de sus inconvenientes. Tipos de enzimoinmunoensayos. Homogéneos: se caracterizan por realizarse en una sola fase líquida sin pasos intermedios de lavado. Son diseños de tipo competitivo y en ellos la actividad enzimática se modifica con la unión de los ligandos (inhibición o activación catalítica durante la reacción Ag-Ac). Son muy empleados para la determinación de fármacos y hormonas en fluidos biológicos (compuestos de pequeño tamaño molecular que se comportan como haptenos). Heterogéneos: El ensayo transcurre en dos fases, una líquida y una sólida y no se modifica la actividad enzimática Se realizan pasos de lavado intermedios en los que se eliminan los elementos de la fase líquida que no se han unido a la fase sólida. Según su diseño pueden ser competitivos y no competitivos, directos e indirectos, de captura, etc. Son los que se denominan ELISA. Ambos tipos de ensayos pueden ser cualitativos o cuantitativos. 222

19 InspiracleBIR/2014 Inmunología elementos no adheridos a la reacción, excepto en el último paso para no perder el sustrato modificado. La evidencia de este cambio de color, ya sea presencia o ausencia en el caso de los cualitativos o grados de intensidad en el de los cualitativos, se lee en un equipo automático cuyas características depende de las cualidades de la señal del sustrato utilizado (cromógenos en un espectrofotómetro, sustratos fluorescentes en un fluorímetro, sustratos luminescentes en un luminómetro). Como los equipos leen el total de señal en una sección estrecha de la columna líquida es preferible que los sustratos al modificarse se mantengan solubles y no precipiten, así se mantienen homogéneamente distribuíos en el pocillo y la lectura de esta señal es representativa de toda la reacción. Rep.de Roitt. I, Brostoff. J, Male. D. Inmunología. Elsvier España, Ed. 5 ed A partir de estas características básicas pueden diseñarse diferentes tipos de ensayos heterogéneos con diversas aplicaciones que pueden clasificarse en dos grandes grupos: EIA heterogéneos competitivos y no competitivos. Rep.de Roitt. I, Brostoff. J, Male. D. Inmunología. Elsvier España, Ed. 5 ed

20 InspiracleBIR/2014 Inmunología Drogas citotóxicas Antimetabolitos como el metotrexate intervienen en el metabolismo del ácido fólico necesario para la biosíntesis de timidina y purinas lo cual conlleva a déficits funcionales y muerte celular principalmente de linfocitos B. Por una vía alternativa la azatioprina inhibe también la síntesis de purinas y afecta fundamentalmente los linfocitos T. Rep.de Rudiger Burmester, Antonio Pezuto. Color Atlas of Immunology. Thieme La ciclofosfamida es una de las drogas más potentes como inmunosupresoras. Uno de sus metabolitos se comporta como agente alquilante de diversos componentes celulares incluyendo bases de DNA y RNA creando uniones cruzadas en la molécula de ácido nucleico que conllevan a la muerte celular. Rep.de Rudiger Burmester, Antonio Pezuto. Color Atlas of Immunology. Thieme

21 Inmunología InspiracleBIR/2014 La ciclosporina A, el tacrolimus (FK506) y el rapamicin inhiben la síntesis de citocinas, especialmente la IL-2 por mecanismos semejantes. Rep.de Rudiger Burmester, Antonio Pezuto. Color Atlas of Immunology. Thieme Anticuerpos Mediante inmunoglobulinas se puede interferir la respuesta inmune de una forma no tóxica y mucho más específica que los fármacos. Actualmente los más usados en este sentido son anticuerpos monoclonales de origen humano, transgénicos o murinos humanizados anti-cd3, anti-cd4, anti-tnf, anti-ige, etc. También se utilizan inmunoglobulinas a dosis altas (>400 mg/kg) como inmunosupresores. Hace unos años se conjugaron Ac específicos (casi siempre monoclonales) contra dianas celulares con diversas sustancias antitumorales (toxinas, fármacos, etc.), a lo cual que se llamó inmuno toxinas, magic bullets, etc., con muy poco exíto en general. 237

22 InspiracleBIR/2014 Inmunología 238

23 Inmunología InspiracleBIR/2014 Bibiliografía: 1. Abbas. A, Lichtman. A, Pillai. S. Inmunología Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic Kindt. T, goldsby. R, Osborne. B. Inmunología de Kuby. Mc Graw Hill, Ed Regueiro. J, López. L, González. S, Martínez. E. Inmunología Biología y Patología del Sistema Inmune. Editorial médica Panamericana, Ed. 3 edic reimp Roitt. I, Brostoff. J, Male. D. Inmunología. Elsvier España, Ed. 5 ed Peña. J. Inmunologíaonline Las ilustraciones del manual han sido tomadas de bibliografías 1, 2 y