Introducción al Inmunodiagnóstico.

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1 UNIVRSIDAD D LOS ANDS FACULTAD D FARMACIA Y BIOANÁLISIS CATDRA D INMUNOLOGÍA Introducción al Inmunodiagnóstico. César Pérez-Maldonado,PhD

2 INMUNIDAD Mecanismos de Defensa (specíficos / Inespecíficos) CLULARS Linfocitos T HUMORALS Síntesis de Anticuerpos. Linfocitos B. Destrucción / Inactivación de agentes extraños (no-propio)

3 INFCCIÓN Respuesta CUANTIFICACION DTCCION Antígenos / Anticuerpos (liquidos biológicos) Inmunodiagnóstico

4 RSPUSTA INMUN A LA INFCCIÓN Los linfocitos B sintetizan anticuerpos clase IgG, IgG IgM, IgM e IgA en respuesta a la mayoría de las infecciones. Ig en reacciones alérgicas.

5 DFINICIÓN Técnicas basadas en la reacción antígeno-anticuerpo. De utilidad en la detección de antígenos o anticuerpos en diferentes muestras biológicas (suero, saliva, líquidos biológicos, tejidos, etc.) Permite evidenciar infecciones, respuestas inmunes y componentes biológicos.

6 ASPCTOS PRÁCTICOS La sensibilidad su capacidad para detectar los analitos en los casos estudiados. La especificidad permite asegurar que el resultado positivo de una prueba indica con precisión la presencia del analito en cuestión. Anticuerpos Monoclonales - Proteínas Recombinantes

7 APLICACIÓN DL INMUNODIAGNÓSTICO. studios del Sistema Inmune: - Salud. - nfermedad. Aspectos a evaluar: - valuación del Sistema Inmune - Detección de nfermedades Infecciosas. - Análisis General en el Laboratorio. Hormonas, Drogas, Medicamentos, etc.

8 * Desarrollo de Métodos Diagnósticos. Aplicación en otras áreas ó especialidades. Bioanálisis Medicina Veterinaria Industria Farmacéutica.

9 MÉTODOS DIAGNÓSTICOS Métodos directos Ponen de manifiesto la presencia del antígeno - Visualización directa - Detección de ciertos componentes Métodos indirectos Permiten detectar la presencia de ciertos productos derivados de la infección (Anticuerpos).

10 MÉTODOS DIAGNÓSTICOS nfermedades infecciosas: Diagnóstico directo: detección de antígenos. a) n enfermedades infecciosas: VHB. b) Para identificar microorganismos en el laboratorio. Diagnóstico indirecto: detección de anticuerpos. a) nfermedades infecciosas: VIH, VHC, CMV, sífilis. b) Determinación del estado inmunitario de individuos y poblaciones. Conocer el porcentaje de personas de una población expuesta a infecciones. (Herramienta epidemiológica).

11 APLICACIONS Como pruebas de tamizaje (cribado): n estudios poblacionales donde se desea investigar la existencia de probables infecciones (aguda o crónica) mediante la detección de anticuerpos. Las mas utilizadas en la actualidad son las técnicas inmunoenzimáticas. Determinación del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg) Búsqueda de anticuerpos contra el virus de la hepatitis C (VHC) en bancos de sangre. Detección de anticuerpos contra el virus de la rubeola en mujeres no vacunadas. n el diagnóstico clínico: Se utilizan como complemento de las pruebas de tamizaje. Cuando se sospecha de una determinada enfermedad infecciosa. Deben ser muy sensibles y específicas: aglutinación con látex, hemaglutinación, inmunofluorescencia e inmunoenzimáticas.

12 Pruebas Serológicas. FACIL RALIZACION. VITAN PROCDIMINTOS INVASIVOS. PRMITN DTCTAR ANTIGNOS Y ANTICURPOS PRMITN LA RALIZACION D STUDIOS PIDMIOLÓGICOS D MANRA MÁS FCTIVA. SON ALTAMNT SPCÍFICAS Y SNSIBLS.

13 DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO La clase IgM se producen únicamente en la respuesta primaria. (fase aguda) aguda Su presencia se interpreta como exposición-infección reciente, reciente o activa. activa Las IgM, no atraviesan la placente humana. Importantes en diagnóstico de recién nacidos (infección fetal) fetal

14 Diagnóstico Serológico. Las clase IgG pueden permanecer -incluso a tasas elevadas- mucho tiempo (años) después de que la infección esté resuelta. Contactos posteriores con Antígenos producen una respuesta de Acs clase IgG (Respuesta Secundaria). n el caso de microorganismos intracelulares puede persistir toda la vida. (Toxoplasmosis, Herpesvirus etc..). Memoria Inmunológica : Respuesta más inmediata y con mayor intensidad (RSPUSTA ANAMNSICA).

15 Cínetica - IgG e IgM

16 Producción de Anticuerpos Monoclonales Inmunización de un ratón para estimular la producción de anticuerpos Linfocitos B aisladas de Bazo Células tumorales crecen en cultivos tisulares Linfocitos B se fusionan con células tumorales cultivadas HIBRIDOMA Producción de anticuerpos por los hibridomas Separación de clones de hibridoma productoras de anticuerpo Obtención de anticuerpos monoclonales.

17 Pruebas Serológicas. Fijación del Complemento

18 Aglutinación Párticulas de Látex Sensibilizadas con Anticuerpos Párticulas de Látex Sensibilizadas - Muestra Aglutinació n.

19 Pruebas Serológicas. Reacción de Aglutinación. Células completas - Bacterias - Protozoos - ritrocitos Partículas inertes - Látex - Bentonita - Gelatina

20 Pruebas Serológicas. Reacción de Hemaglutinación. Células completas - ritrocitos Antígeno Antícuerpo ritrocitos Fase Sólida Muestra Mallas de Aglutinación

21 Pruebas Serológicas. Reacción de Hemaglutinación. Células completas - ritrocitos

22 Pruebas Serológicas. Reacción de Precipitación. Medio Semisolido - Antígeno o Anticuerpo difundido en medio

23 Pruebas Serológicas. Reacción de Precipitación. Precipitado formado Medio Semisolido - Antígeno o Anticuerpo difundido en medio Zona de exceso de Ac-Ag Zona de equivalencia Zona de exceso de Ac-Ag Concentración creciente de antigeno

24 Pruebas Serológicas. Inmunofluorescencia. Conjugado Fluorescente - Antígeno o Anticuerpo marcado con Fluorocromo Directa Indirecta

25 Pruebas Serológicas. Inmunoensayo nzimático LISA. S S S S Antigeno Buffer de bloqueo Anticuerpo S S S Conjugado nzimático - Anticuerpo o Antiglobulina marcada con nzima nzima acoplada con un anti-ig Substrato

26 Pruebas Serológicas. Inmunoensayo nzimático LISA. Antigeno Buffer de bloqueo Anticuerpo S S S S S S S Conjugado nzimático - Anticuerpo o Antiglobulina marcada con nzima nzima acoplada con un anticuerpo Substrato

27 Pruebas Serológicas. Inmunoensayo nzimático LISA. (Auro-Dex Helicobacter pylori MultiTest)

28 G racias por su atención

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